AMPK Control Cell Extracts #9158

产品使用信息

使用前请先煮沸 3 分钟。每条泳道上样 20 μl 的磷酸化和非磷酸化的 AMPK Control Cell Extract。

保存

保存在SDS上样缓冲液中：含 62.5 mM Tris-HCl (pH 6.8，25°C)、2 % w/v SDS、10 % 甘油、50 mM DTT、0.01% w/v 溴酚蓝或酚红。储存在 -20ºC 或 -80ºC（长期储存）的温度下。

产品说明

非磷酸化 AMPK Control Cell Extracts： C2C12 细胞的总细胞提取物，用 CIP/λ 磷酸酶制备，用作阴性对照。在 SDS 样品缓冲液中配备该提取物。
磷酸化 AMPK Control Cell Extracts: 使用血清饥饿处理准备的 C2C12 细胞的总细胞提取物用作阳性对照。在 SDS 样品缓冲液中配备该提取物。

背景

AMP 激活的蛋白激酶 (AMPK) 从酵母到植物和动物中都高度保守，且在调节能量平衡方面发挥关键作用 (1)。AMPK 蛋白以一种异三聚体复合体的形式存在，由一个 α-催化亚基、一个 β-调节亚基和一个 γ-调节亚基组成，每个亚基被两到三个不同基因编码 (α1、2；β1、2；γ1、2、3) (2)。该激酶会被因细胞和环境压力引起AMP/ ATP 比值升高而激活，如热休克，缺氧和缺血 (1)。抑癌基因 LKB1 与辅助蛋白 STRAD 和 MO25 一同将位于活化环里 Thr172 位点的 AMPKα 磷酸化，该位点的磷酸化是 AMPK 激酶活性所必需的 (3-5)。AMPKα 在 Thr258 位点和 Ser485 位点（对于 α1；α2 是 Ser491 位点）也被磷酸化。上游激酶以及这些磷酸化事件的生物学意义尚未被阐明 (6)。β1 亚基是通过豆蔻酰化和多位点磷酸化翻译后修饰的，这些位点包括 Ser24/25 位点、Ser96 位点、Ser101 位点、Ser108 位点和 Ser182 位点 (6,7)。β1 亚基 Ser108 位点的磷酸化似乎对 AMPK 酶活性是必要的，而 Ser24/25 位点和 Ser182 位点的磷酸化会影响 AMPK 定位 (7)。已确定了一些 AMPKγ 亚基的突变，其中大部分位于假定的 AMP/ ATP 结合位点（CBS 或Bateman域）。这些位点的突变导致 AMPK 活性降低，引起心脏或骨骼肌糖原积累 (1,2)。越来越多证据表明，AMPK 不仅调节脂肪酸和糖原的代谢，也通过 EF2 和 TSC2/mTOR 通路调节蛋白质合成和细胞生长，另外还通过 eNOS / nNOS 调节血流量 (1)。

1. Hardie, D.G. (2004) J Cell Sci 117, 5479-87.
2. Carling, D. (2004) Trends Biochem Sci 29, 18-24.
3. Hawley, S.A. et al. (1996) J Biol Chem 271, 27879-87.
4. Lizcano, J.M. et al. (2004) EMBO J 23, 833-43.
5. Shaw, R.J. et al. (2004) Proc Natl Acad Sci USA 101, 3329-35.
6. Woods, A. et al. (2003) J Biol Chem 278, 28434-42.
7. Warden, S.M. et al. (2001) Biochem J 354, 275-83.