Akt Control Cell Extracts #9273

产品使用信息

使用前请先煮沸 3 分钟。每条泳道上样 20 µl 的磷酸化和非磷酸化 Akt 提取物。

保存

保存在 SDS 样品缓冲液中：62.5 mM Tris-HCl（在 25°C 下 pH 为 6.8）、2% w/v SDS、10% 甘油、50 mM DTT、0.01% w/v 溴酚蓝或酚红。
保存在 -20ºC 或 -80ºC（长期储存）下。

产品说明

磷酸化 Akt 细胞提取物：在经过血清饥饿过夜并用 Calyculin A (CST #9902) 处理以保持 Akt 的激活状态，从 Jurkat 细胞得到的总提取物，用作阳性对照。在 SDS 样品缓冲液中配备该提取物。

非磷酸化 Akt 细胞提取物：在经过血清饥饿过夜并用50 µM LY294002 (CST #9901) 处理 1 小时，从 Jurkat 细胞得到的总提取物，用作阴性对照。在 SDS 样品缓冲液中配备该提取物。

背景

Akt 也称作 PKB 或 Rac，在控制存活和凋亡中发挥至关重要作用 (1-3)。这种蛋白激酶由胰岛素和多种生长和存活因子激活，并在涉及 PI3 激酶的 wortmannin 敏感通路中发挥作用 (2,3)。通过磷脂结合过程并由 PDK1 在 Thr308 位点磷酸化激活环 (4) ，以及通过羧基末端内部 Ser473 处的磷酸化激活 Akt。曾经功能难以捉摸的 PDK2 可在 Ser473 处磷酸化 Akt ，它被鉴定为在含 rictor 和 Sin1 的雷帕霉素中的非敏感复合体中哺乳动物雷帕霉素靶标 (mTOR) (5,6)。Akt 通过磷酸化和失活几种靶标（包括 Bad (7)、叉头转录因子 (8)、c-Raf (9) 和 caspase-9）而抑制凋亡，进而促进细胞存活。PTEN 磷酸酶是 PI3K/Akt 信号转导通路的主要负向调节分子 (10)。LY294002 是特异性 PI3 激酶抑制剂 (11)。Akt 的另一个主要功能是通过磷酸化和失活 GSK-3α 和 β 调节糖原合成 (12,13)。Akt 还可以在胰岛素刺激转运葡萄糖中发挥作用 (12)。除其在存活和糖原合成中的作用外，Akt 还通过防止 GSK-3β 介导的磷酸化和周期蛋白 D1 降解 (14) 并通过负向调节周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白 p27 Kip1 (15) 和 p21 Waf1/Cip1 (16) 来参与细胞周期调节。Akt 还通过直接磷酸化含有 raptor 的雷帕霉素敏感性复合体中的 mTOR，在细胞生长中发挥至关重要作用 (17)。更重要的是，Akt 磷酸化并失活结节蛋白 (TSC2)（在 mTOR-raptor 复合体中 mTOR 的抑制分子）(18,19)。

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