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20154
SARS-CoV-2 Spike Protein Serological IgG ELISA Kit
ELISA 试剂盒
ELISA 试剂盒

SARS-CoV-2 Spike Protein Serological IgG ELISA Kit #20154

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ELISA Image 1 - SARS-CoV-2 Spike Protein Serological IgG ELISA Kit

患者检测:使用 SARS-CoV-2 Spike Protein Serological IgG ELISA Kit #20154 检测患者样品从诊断为 SARS-CoV-2 的供体(诊断阳性,n = 28),或从 SARS-CoV-2 爆发之前收集的假定未感染供体(假定阴性,n = 62)中获得血清或血浆。如实验步骤中所述,在运行检测之前将样品加热灭活(56°C,30 分钟)并以 1:800 的比例稀释。根据试剂盒实验步骤的“数据分析”部分中所述的标准,样品可视为阳性、阴性或不确定。从这些数据计算出阳性符合率 (PPA) 和阴性符合率 (NPA)。

注:我们将继续检测更多样品(如可用)。如需获取最新数据集,请始终参考网站产品页面上的 #20154。

ELISA Image 2 - SARS-CoV-2 Spike Protein Serological IgG ELISA Kit

板内准确度:使用一个 SARS-CoV-2 Spike Protein Serological IgG ELISA #20154 测定试剂盒,分别对三个不同的血清样品进行16复孔测试。计算每个样品的测定内 CV (%),并且使用所附实验步骤中所述的临界标准与阴性对照进行比较时,每个复孔样品都被正确地标识为阳性或阴性。

ELISA Image 3 - SARS-CoV-2 Spike Protein Serological IgG ELISA Kit

板间准确度:使用 3 个不同血清样品设置复孔,阳性和阴性对照设立4复孔,在同一批次的六个测定试剂盒中检测。计算每个样品的分析间 CV (%),并且使用所附实验步骤中所述的临界标准与阴性对照进行比较时,每个测定试剂盒均正确地将样品鉴定为阳性或阴性。

ELISA Image 4 - SARS-CoV-2 Spike Protein Serological IgG ELISA Kit

患者检测:使用 SARS-CoV-2 Spike Protein Serological IgG ELISA Kit #20154 检测患者样品如实验步骤中所述,在运行检测之前将血清/血浆样品加热灭活(56°C,30 分钟)并以 1:800 的比例稀释。绘制了各血清/血浆样品在 450 nm 处的背景减去吸光度的值,与获自诊断为 SARS-COV-2(诊断阳性 n = 28)的供体的样品相对应的值绘制于右侧,与来自 SARS-CoV-2 爆发之前收集的假定未感染供体(假定阴性,n = 62)的样品相对应的值绘制于左侧。同时也显示了分界线(蓝线),位于分界线(蓝线)之上的样品视为阳性,以及阴性分界线(红线),位于阴性分界线(红线)之下的样品视为阴性。截止值按照试剂盒实验步骤的“数据分析”部分所述进行计算。

购买 # 20154C
产品货号 规格 价格 库存
20154C
1 个试剂盒(96 次检测)

支持数据

反应性 H

应用缩写:

  • W-Western
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种
产品包括 体积 溶液颜色
Spike Protein Coated Microwells 96 次测试
Anti-Human IgG, HRP-linked Antibody (ELISA Formulated) 1 个 红色(冻干)
Sample Diluent A 25 ml
HRP Diluent 11 ml 红色
ELISA Wash Buffer (20X) 9801 25 ml
TMB Substrate 7004 11 ml
STOP Solution 7002 11 ml
Sealing Tape 2 ea
ELISA Kit #20154 Positive Control 1 个
ELISA Kit #20154 Negative Control 1 个

产品说明

SARS-CoV-2 Spike Protein Serological IgG ELISA Kit 是一种固相 ELISA,可检测人 IgG 与全长 SARS-CoV-2 刺突蛋白 (S-protein) 的结合。全长刺突蛋白已包被在微孔上。与样品一起孵育后,特异于刺突蛋白的人 IgG 被捕获在平板上。然后洗涤微孔以除去未结合的物质。随后使用 HRP-linked Anti-Human IgG 识别结合的 IgG。加入 HRP 底物 (TMB) 来显色。该显色的光密度值与刺突蛋白特异的 IgG 的数量成比例。

* 试剂盒中的抗体为针对该试剂盒的定制制剂。

实验步骤

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SARS-CoV-2 Spike Protein Serological IgG ELISA 实验步骤

此 ELISA 试剂盒仅供研究使用。不得用于诊断或临床流程。

A. 溶液和试剂

注意:用去离子水/纯净水或等效水制备溶液。仅制备实验当天所需的足够试剂。

  1. 刺突蛋白包被的微孔:在打开袋子/使用之前,将其全部恢复至室温。应将未使用的微孔板条放回可重复密封且含有干燥剂包的原装袋中并存储于 4°C 下。
  2. 1X ELISA 洗涤缓冲液:通过使用去离子水稀释 ELISA 洗涤缓冲液 (20X)(每个试剂盒中均有提供)至 1X 来制备。
  3. 样品稀释剂 A:提供的稀释剂用于稀释样品以及复溶试剂盒中包括的阳性和阴性对照。
  4. HRP 稀释剂:红色稀释剂用于重新配制和稀释抗人 IgG、HRP-Linked Antibody(提供 11 ml)。
  5. 抗人 IgG、HRP-Linked Antibody(ELISA Formulated):以冻干的红色块状或粉末形式保存。加入 1.0 mL HRP 稀释剂(红色溶液)以获得浓缩的原液。在室温下孵育 5 分钟,同时不时轻轻混合,以充分重新配制。如需配制最终使用溶液,则在一根干净试管中添加满 1.0 mL 重新配制的 HRP-Linked Antibody 到 10.0 mL HRP 稀释剂中,轻轻混合。为获得最佳结果,立即使用此工作液。未使用的工作液可能在 4°C 下储存最多 4 周,但与新制溶液相比可能会有一些信号损失。
  6. 阳性对照:用 1.0 mL 样品稀释液 A 复溶冻干的阳性对照小瓶。轻轻充分混合,在室温下保持 1 分钟,然后按照“检测程序”部分中所述的步骤进行操作。建议在复溶后立即使用阳性对照,但剩余物质可保存在 -80°C 下(在冻融的情况下可能会丢失一些阳性对照信号)。阳性对照作为一种对照试剂提供,而不是作为一种绝对定量方法。
  7. 阴性对照:用 1.0 mL 样品稀释液 A 复溶冻干的阴性对照小瓶。轻轻充分混合,在室温下保持 1 分钟,然后按照“检测程序”部分中所述的步骤进行操作。建议在复溶后立即使用阴性对照,但剩余物质可保存在 -80°C 下(在冻融的情况下可能会丢失一些阴性对照信号)。
  8. TMB 底物 (#7004):使用前请恢复至室温。
  9. STOP 溶液 (#7002):使用前请恢复至室温。

B. 检测程序

:在运行检测之前,请将所有材料和已制备的试剂平衡至室温。

  1. 如上(第 A 部分)所述制备所有试剂。
  2. 人来源的样品应按照认可的安全规范进行处理。样品应使用样品稀释剂 A 至少以 1:800 稀释,如果用户需要相对定量,可以进一步进行系列稀释。在复溶后不需要稀释阳性和阴性对照。请参阅数据表,该数据表显示了从阳性对照、阴性对照、未感染个体的血清和 SARS-CoV-2 患者的血清观察到的典型结果。当使用以下所述的临界标准来确定样品是否为抗 CoV-2 刺突蛋白抗体阳性时,必须将 1:800 稀释的样品与未稀释的阴性对照进行比较。

    注意:样品的储存/处理(包括样品的热灭活)可能会影响观察到的信号。因此,强烈建议除了试剂盒中包含的阳性和阴性对照外,用户在运行分析时还应包括自己的阴性和阳性患者样品作为对照,以建立适当的临界值

  3. 将 100μL 每个稀释的样品、阳性对照、阴性对照和空白(仅样品稀释液 A)添加到适当的孔中。用提供的密封胶带密封板并在 37°C 下孵育 1 小时。
  4. 轻轻取下胶带并洗涤各孔:
    1. 将平板内容物弃入容器中。
    2. 用 1X ELISA 洗涤缓冲液洗涤 4 次,每孔每次 200 µl。每次洗涤后,将孔吸干或倒空。倒转平板并用干净的纸巾将其吸干,以便除去每个孔中的残留溶液,但无论何时都不得让孔完全干燥。
    3. 用无绒织物清洁全部孔的底面。
  5. 添加 100 μl 复溶抗人 IgG、HRP-linked Antibody (ELISA Formulated)。用胶带密封,平板在 37°C 下孵育 30 分钟。
  6. 重复洗涤程序(B 部分,步骤 4)。
  7. 向每个孔添加 100 μl TMB 底物。用胶带密封,平板在黑暗处 37°C 下孵育 10 分钟。
  8. 向每个孔添加 100 μL STOP 溶液。温和振摇数秒。

    注意:阳性反应的初始颜色为蓝色,一旦添加 STOP 溶液,就变为黄色。

  9. 读取结果:
    1. 目测:在添加 STOP 溶液后 30 分钟内读取。
    2. 分光光度法测定:用无绒薄布擦拭各孔底部。添加 STOP 溶液后 30 分钟内,读取在 450 nm 处的吸光度。
  10. 数据分析:
    1. 从阳性和阴性样品对照值中减去“空白”孔(仅样品稀释液 A)的吸光度 450 nm 值。
    2. 阳性对照值应大于 1.5,阴性对照值应小于 0.75。
    3. 如果样品(1:800 稀释)大于 4.1 x 阴性对照吸光度 450 nm 值,则视为阳性。
    4. 如果样品(1:800 稀释)小于 3 x 阴性对照吸光度 450 nm 值,则视为阴性。
    5. 如果样品 (1:800) 大于 3 x 阴性对照吸光度 450 nm 值且小于 4.1 x 阴性对照吸光度 450 nm 值,则认为结果不确定。
    6. 局限性:通过测定一组确认的 SARS-CoV-2 阳性样品和在 SARS-CoV-2 大流行之前收集的未感染的供体血清来确定实验临界值。研究人员可以使用其他样品建立或修改此临界值。该测定的阳性或阴性结果不应成为确定样品感染状况的唯一依据。由于以下原因,SARS-CoV-2 患者样品中可能出现阴性结果:
      • 样品处理/储存不当
      • 感染后样品收集时间
      • 免疫功能受损的患者

实验步骤编号:2024

特异性/敏感性

SARS-CoV-2 Spike Protein Serological IgG ELISA Kit 可检测内源水平的针对全长 SARS-COV-2 刺突蛋白 (S-protein) 的 人 IgG。

物种反应性:

背景

COVID-19 疫情的病因是一种新型的高致病性冠状病毒,称为 SARS-CoV-2(严重急性呼吸系统综合症冠状病毒 2)。SARS-CoV-2 是冠状病毒家族的成员(1)。SARS-CoV-2 的基因组与其他冠状病毒相似,并且由四个关键结构蛋白组成:S,刺突蛋白;E,包膜蛋白;M,膜蛋白;N,核衣壳蛋白(2)。冠状病毒刺突蛋白是 I 类融合蛋白,具有胞外域、跨膜域和胞内尾巴(3,4)。高度糖基化的胞外域从病毒包膜表面突出,并促进与宿主细胞质膜的附着和融合。胞外域可进一步细分为宿主受体结合域(RBD)(S1)和膜融合(S2)亚基,它们是由宿主蛋白酶在 S1/S2 和 S2' 位点进行蛋白水解产生的。S1 和 S2 亚基在切割后仍保持结合并组装成冠状三聚体(2,4)。在人类中,SARS-CoV 和 SARS-CoV-2 刺突蛋白均利用血管紧张素转化酶 2(ACE2)蛋白作为进入细胞的受体(5-7)。刺突蛋白亚基代表冠状病毒毒粒的关键抗原特征,因此代表疫苗、新型治疗性抗体和小分子抑制剂(8,9)的重要靶标。

  1. Zhou, P. et al. (2020) Nature 579, 270-3.
  2. Tortorici, M.A. and Veesler, D. (2019) Adv Virus Res 105, 93-116.
  3. Li, F. et al. (2006) J Virol 80, 6794-800.
  4. Li, F. (2016) Annu Rev Virol 3, 237-61.
  5. Shang, J. et al. (2020) Nature 581, 221-4.
  6. Wrapp, D. et al. (2020) Science 367, 1260-3.
  7. Yan, R. et al. (2020) Science 367, 1444-8.
  8. Yuan, Y. et al. (2017) Nat Commun 8, 15092.
  9. Amanat, F. and Krammer, F. (2020) Immunity 52, 583-9.

通路和蛋白

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