反应性 | H |
产品包括 | 体积 | 溶液颜色 | |||
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Atg13 Rabbit mAb Coated Microwells | 96 次测试 | ||||
Phospho-Atg13 (Ser355) Rabbit Detection mAb | 1 个 | 红色(冻干) | |||
HRP Diluent | 5.5 ml | 红色 | |||
TMB Substrate 7004 | 11 ml | ||||
STOP Solution 7002 | 11 ml | ||||
Sealing Tape | 2 ea | ||||
ELISA Wash Buffer (20X) 9801 | 25 ml | ||||
Cell Lysis Buffer (10X) 9803 | 15 ml |
产品信息
快速实验步骤 (RP) 的 PathScan® RP Phospho-Atg13 (Ser355) Sandwich ELISA Kit 是一种固相夹心酶联免疫吸附检测 (ELISA) 试剂盒,可在缩短的 1.5 小时测定时间内检测在 Ser355 位点被磷酸化的 Atg13 蛋白的内源水平。在包被微孔板上孵育细胞裂解物和检测抗体,只需一步即可与磷酸化 Atg13 (Ser355) 蛋白形成夹心结构。随后深度洗涤平板,并添加 TMB 试剂来产生信号。该显色的吸光度值与被磷酸化的 Atg13 (Ser355) 蛋白的数量成比例。点击此处,以详细了解您的所有 ELISA 试剂盒选项。
*试剂盒中的抗体为专属该试剂盒的定制制剂。
注:此实验步骤用于使用直接与检测用抗体偶联的 HRP 的 PathScan® 试剂盒(快速实验步骤),而不用于依次添加检测用抗体和 HRP 二抗的两步法。
注意:用去离子水/纯净水或等效水制备溶液。
对于贴壁细胞
对于悬浮细胞
注:在运行检测之前,请将所有材料和已制备的试剂平衡至室温。
注意:阳性反应的初始颜色为蓝色,一旦添加 STOP 溶液,就变为黄色。
创建于 2020 年 7 月
实验步骤编号:2144
自噬是自噬溶酶体降解大部分细胞浆内容物的一种分解代谢过程 (1,2)。通常在营养剥夺条件下激活自噬,但自噬也与一些生理过程有关,如发育、分化、神经变性、感染和癌症 (3)。已在酵母中大量发现自噬的分子机制,被称为自噬基因 (Atg)。
Atg13/Apg13 最初作为一种结构性表达蛋白发现于酵母中,这种蛋白在基因层面与 Atg1/Apg1 相连,后者是自噬所需的一种蛋白激酶 (4)。Atg1 过表达会抑制在 Atg13 突变体中观察到的自噬缺陷 (4)。自噬过程需要 Atg1 与 Atg13 之间的直接结合,并且在高营养条件下受 Atg13 的 TOR 依赖性磷酸化的抑制 (5)。同样,哺乳动物的 Atg13 与 Atg1 同源蛋白 ULK1/2 和 FIP200 形成一个复合体,该复合体定位至自噬隔离膜并调节自噬体的生物合成 (6-8)。mTOR 磷酸化 Atg13 和 ULK1,进而抑制 ULK1 激酶活性和自噬 (7-9)。ULK1 可在一个尚未鉴定的位点直接磷酸化 Atg13,推测其可促进自噬 (7,8)。其他研究表明,Atg13 和 FIP200 的作用不受 ULK1 和 ULK2 的影响,并通过一种未知机制诱导自噬 (10)。
Atg13 于 Ser355 位点 (对应于 Atg13 同工型2的 Ser318) 发生 ULK1 依赖性磷酸化,可使得 Atg13 募集至受损的线粒体中,从而保证有效的自噬过程 (11)。
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