产品货号 | 规格 | 价格 | 库存 |
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7143S | 1 个试剂盒(试剂可用于 4 x 96 孔板) |
为庆祝中国农历新年,我们的中国办事处关闭。我们将于星期四(2 月 18 日 )开放。
感谢您的耐心等待。
反应性 | H M R |
产品包括 | 体积 | 盖颜色 | |||
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Phospho-Akt (Ser473) Capture Rabbit mAb (100X) | 400 µl | 粉色 | |||
Akt1 Detection Mouse mAb (100X) | 400 µl | 蓝色 | |||
Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody (1000X) | 40 µl | 黄色 |
产品信息
抗体对已使用建议的缓冲液、试剂、平板和包含的实验步骤进行优化。溶液应每天新鲜配制。
捕获和检测抗体存储在 4ºC。HRP 标记二抗保存在 -20°C 下。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
1X 细胞裂解缓冲液:10X 细胞裂解缓冲液 (#9803):要配制 10 ml 1X 细胞裂解缓冲液,则添加 10X 细胞裂解缓冲液到 9 ml dH2O 中,混匀。这种缓冲液可保存在 4°C 下供短期使用(1-2 周)。
建议:使用前,立即添加 1 mM 苯甲基磺酰氟 (PMSF) (#8553)。
STOP 溶液:(#7002)
注意:试剂应每天新鲜制备。
发布于 2008 年 1 月
修订于 2013 年 9 月
实验步骤编号:20
CST 的 PathScan® Phospho-Akt1 (Ser473) Sandwich ELISA Antibody Pair 是 PathScan® Phospho-Akt1 (Ser473) Sandwich ELISA Kit #7160 的一种经济合算的替代物。捕获和检测抗体以及 HRP 标记二抗分别作为 100X 原液和 1000X 原液提供。提供的试剂足以进行 4 x 96 孔的 ELISA 测定。Phospho-Akt (Ser473) Rabbit Capture Antibody 在 96 孔微孔板中 PBS 包被过夜。封闭后,加入细胞裂解物,随后加入 Akt1 Mouse Detection Antibody 和 HRP-conjugated Anti-Mouse IgG。加入 HRP 底物 (TMB) 来显色。该显色的吸光度值与磷酸-Akt1 (Ser473) 蛋白的数量成比例。
该试剂盒中的抗体为该试剂盒所特制。
如需了解抗体对的特异性和敏感度,请参阅相应的 PathScan® Sandwich ELISA Kit。注意:经内部测试确定,该抗体对可检测规定物种中的蛋白,但也可能检测其他物种的同源蛋白。
人, 小鼠, 大鼠
Akt 也称作 PKB 或 Rac,在控制存活和凋亡中发挥至关重要作用 (1-3)。这种蛋白激酶由胰岛素和多种生长和存活因子激活,并在涉及 PI3 激酶的 wortmannin 敏感通路中发挥作用 (2,3)。通过磷脂结合过程并由 PDK1 在 Thr308 位点磷酸化激活环 (4) ,以及通过羧基末端内部 Ser473 处的磷酸化激活 Akt。曾经功能难以捉摸的 PDK2 可在 Ser473 处磷酸化 Akt ,它被鉴定为在含 rictor 和 Sin1 的雷帕霉素中的非敏感复合体中哺乳动物雷帕霉素靶标 (mTOR) (5,6)。Akt 通过磷酸化和失活几种靶标(包括 Bad (7)、叉头转录因子 (8)、c-Raf (9) 和 caspase-9)而抑制凋亡,进而促进细胞存活。PTEN 磷酸酶是 PI3 激酶/Akt 信号转导通路的主要负向调节分子 (10)。LY294002 是特异性 PI3 激酶抑制剂 (11)。Akt 的另一个主要功能是通过磷酸化和失活 GSK-3α 和 β 调节糖原合成 (12,13)。Akt 还可以在胰岛素刺激转运葡萄糖中发挥作用 (12)。除其在存活和糖原合成中的作用外,Akt 还通过防止 GSK-3β 介导的磷酸化和 cyclin D1 降解 (14),并通过负向调节细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 p27 Kip1 (15) 和 p21 Waf1/Cip1 (16),参与细胞周期调节。Akt 还通过直接磷酸化含有 raptor 的雷帕霉素敏感性复合体中的 mTOR,在细胞生长中发挥至关重要作用 (17)。更重要的是,Akt 磷酸化并失活结节蛋白 (TSC2)(在 mTOR-raptor 复合体中 mTOR 的抑制分子)(18,19)。
探索与本品相关的通路 + 蛋白。
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