反应性 | H M R Mk |
产品包括 | 容量(计数) | 溶液颜色 | |||
---|---|---|---|---|---|
FastScan™ ELISA Microwell Strip Plate, 96 Well 53257 | 1 x 96 次检测 | ||||
Akt1 Rabbit Capture mAb | 1 x 1 次 | 绿色(冻干) | |||
Phospho-Akt (Ser473) Rabbit HRP-linked mAb | 1 x 1 次 | 红色(冻干) | |||
FastScan™ ELISA Capture Antibody Diluent | 1 x 3 ml | 绿色 | |||
FastScan™ ELISA HRP Antibody Diluent | 1 x 3 ml | ||||
TMB Substrate 7004 | 1 x 11 ml | ||||
STOP Solution 7002 | 1 x 11 ml | ||||
Sealing Tape | 1 x 1 次 | ||||
ELISA Wash Buffer (20X) 9801 | 1 x 25 ml | ||||
FastScan™ ELISA Cell Extraction Buffer (5X) 69905 | 1 x 10 ml | ||||
FastScan™ ELISA Cell Extraction Enhancer Solution (50X) 25243 | 1 x 1 ml | ||||
FastScan™ ELISA Kit #54336 Positive Control Type 2 | 1 x 1 次 |
产品信息
注意:用去离子水/纯净水或等效水配制溶液。
仅配制实验当天所需的足够试剂。
*重要提示:提供的 FastScan™ ELISA 细胞提取增强剂溶液 (50X) 保存在 4°C 下时可能会产生沉淀。要溶解,则在 37°C 下短暂加热并轻轻混合。FastScan™ ELISA 细胞提取增强剂溶液 (50X) 可保存在室温下,以避免沉淀。
注:1X 细胞提取缓冲液含有磷酸酶抑制剂。应在裂解细胞之前立即将蛋白酶抑制剂加入 1X 细胞提取缓冲液中。还可添加其他磷酸酶抑制剂(例如蛋白酶/磷酸酶抑制剂混合物 (100X) #5872,未提供)。
注意:一定数量的 FastScan™ ELISA 试剂盒不包含阳性对照,请参考数据表上的产品内含试剂表,了解所含试剂列表。如果您对如何产生这些试剂盒的阳性对照需要支持,请联系 CST 技术支持 ([电子邮件受保护])。
对于贴壁细胞
对于悬浮细胞
注:在运行检测之前,请将所有材料和已制备的试剂平衡至室温。
*注:某些 FastScan™ ELISA Kit 可能需要在这个步骤额外洗涤。任何额外洗涤的要求都将在试剂盒数据表的产品“说明”中特别注明。
注意:阳性反应的初始颜色为蓝色,一旦添加 STOP 溶液,就变为黄色。
发布时间 2018 年 5 月
修订时间 2019 年 11 月
实验步骤编号:1924
Akt 也称作 PKB 或 Rac,在控制细胞存活和凋亡中发挥至关重要作用 (1-3)。这种蛋白激酶由胰岛素和多种生长和存活因子激活,并在涉及 PI3 激酶的 wortmannin 敏感通路中发挥作用 (2,3)。通过磷脂结合过程并由 PDK1 在 Thr308 位点磷酸化激活环 (4) ,以及通过羧基末端内部 Ser473 处的磷酸化激活 Akt。曾经功能难以捉摸的 PDK2 可在 Ser473 处磷酸化 Akt ,它被鉴定为在含 rictor 和 Sin1 的雷帕霉素中的非敏感复合体中哺乳动物雷帕霉素靶标 (mTOR) (5,6)。Akt 通过磷酸化和失活几种靶标(包括 Bad (7)、叉头转录因子 (8)、c-Raf (9) 和 caspase-9)而抑制凋亡,进而促进细胞存活。PTEN 磷酸酶是 PI3K/Akt 信号转导通路的主要负向调节分子 (10)。LY294002 是特异性 PI3 激酶抑制剂 (11)。Akt 的另一个主要功能是通过磷酸化和失活 GSK-3α 和 β 调节糖原合成 (12,13)。Akt 还可以在胰岛素刺激转运葡萄糖中发挥作用 (12)。除其在存活和糖原合成中的作用外,Akt 还通过防止 GSK-3β 介导的磷酸化和周期蛋白 D1 降解 (14) 并通过负向调节周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白 p27 Kip1 (15) 和 p21 Waf1/Cip1 (16) 来参与细胞周期调节。Akt 还通过直接磷酸化含有 raptor 的雷帕霉素敏感性复合体中的 mTOR,在细胞生长中发挥至关重要作用 (17)。更重要的是,Akt 磷酸化并失活结节蛋白 (TSC2)(在 mTOR-raptor 复合体中 mTOR 的抑制分子)(18,19)。
探索与本品相关的通路。
除非如以 CST 合法授权代表签署的书面形式另行明确同意,否则以下条款适用于 CST、其附属公司或其分销商提供的产品。除非 CST 合法授权代表以书面形式单独接受,否则任何附加于或异于此处所载条款和条件的客户条款和条件均被拒绝且无效。
产品用“仅供研究使用”或类似标示声明标示,并且尚未经 FDA 或其他国外或国内监管实体出于任何目的批准、准许或许可。客户不得出于任何诊断或治疗目的或以任何与产品标示声明相冲突的方式使用任何产品。CST 销售或许可的产品提供给作为最终用户的客户,且仅用于研究和开发用途。出于诊断、预防或治疗目的任何产品使用或出于转售(单独或作为成分)或其他商业目的的任何产品购买都要求来自 CST 的单独许可。客户 (a) 不得向任何第三方出售、许可、出借、捐赠或另行转让或提供任何本公司产品,无论单独或联合其他材料方式,或使用本公司产品制造任何商业产品,(b) 不得复制、修改、逆向工程、反编译、反汇编或另行尝试发现本公司产品的底层结构或技术,或出于开发与 CST 产品或服务竞争的任何产品或服务的目的使用本公司产品,(c) 不得从本公司产品改变或移除任何商标、商品名称、徽标、专利或版权声明或标记,(d) 仅应根据 CST 产品销售条款和任何适用文档使用本公司产品,以及 (e) 应就客户联系本公司产品所用的任何第三方产品或服务而言遵守任何许可、服务条款或类似协议。