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7576
HTScan® Pim-2 Kinase Assay Kit
细胞检测试剂盒
检测试剂盒

HTScan® Pim-2 Kinase Assay Kit #7576

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图 3. Pim-2 激酶活性的剂量依赖性曲线:使用 Phospho-Bad (Ser112) Antibody #9291 检测 Pim-2 激酶对底物肽 (#1342) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用数量递增的 Pim-2 和 1.5 µM 底物肽反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 5. Staurosporine 会抑制 Pim-2 激酶活性:使用 Phospho-Bad (Ser112) Antibody #9291 检测 Pim-2 激酶对 Pim-2 底物肽 (#1342) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用 50 ng Pim-2、1.5 µM 底物肽、20 µM ATP 和数量递增的 staurosporine 反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 4. Pim-2 激酶活性的肽浓度依赖性:使用 Phospho-Bad (Ser112) Antibody #9291 检测 Pim-2 激酶对底物肽 (#1342) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用 50 ng Pim-2 和浓度递增的底物肽反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 2. Pim-2 激酶活性的时程:使用 Phospho-Bad (Ser112) Antibody #9291 检测 Pim-2 激酶对 Pim-2 底物肽 (#1342) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔用 50 ng Pim-2 和 1.5 µM 底物肽。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 1. 在使用以下反应条件的放射检测中可检测 Pim-2 激酶活性:60 mM HEPES-NaOH (pH 7.5)、3 mM MgCl2、3 mM MnCl2、3 µM 原钒酸钠、1.2 mM DTT、ATP(可变)、2.5 µg/50 µl PEG20,000,底物:R11-S6-肽 5 µg/50 µl,重组 Pim-2:200 ng/50 µl。

产品说明

该试剂盒提供一种方法来使用重组人 Pim-2 激酶进行激酶活性检测。它包含活化的 Pim-2 激酶(以 GST 融合蛋白的形式保存)、生物素化肽底物以及用于检测磷酸化底物肽的磷酸化丝氨酸/苏氨酸抗体。

分子式

Peptide substrate, Biotin-peptide:1,700 道尔顿。GST-Pim-2 激酶:64 kDa。

背景

Pim 蛋白(Pim-1、Pim-2 和 Pim-3)是癌基因编码的丝氨酸/苏氨酸激酶 (1)。Pim-1 是一种在造血细胞中高表达的丝氨酸/苏氨酸激酶,它在有丝分裂信号的转导中发挥关键作用,并通过各种生长因子和细胞因子快速诱导 (1-4)。在淋巴样细胞转化过程中,Pim-1 结合 c-Myc,并避免细胞生长因子退出和基因毒应激诱导的凋亡 (5,6)。Pim-1 还直接磷酸化 c-Myb DNA 结合域并磷酸化转录共激活因子 p100,从而增强 c-Myb 的转录活性 (7,8)。在 B 细胞弥漫性大细胞性淋巴瘤细胞中会发现 Pim-1 基因高频突变 (9)。在受到 IL-6 刺激后,Etk 在位点Tyr218处磷酸化 Pim-1,并且与 Pim-1 活性增强有关 (10)。现已发现不同的 Pim 底物;Bad 在 Ser112 位点被 Pim-1 和 Pim-2 磷酸化,并且这种磷酸化会逆转 Bad 诱导的细胞凋亡 (11,12)。

  1. Mikkers, H. et al. (2004) Mol Cell Biol 24, 6104-15.
  2. Selten, G. et al. (1986) Cell 46, 603-11.
  3. Meeker, T.C. et al. (1987) J Cell Biochem 35, 105-12.
  4. Dautry, F. et al. (1988) J Biol Chem 263, 17615-20.
  5. Möröy, T. et al. (1993) Proc Natl Acad Sci USA 90, 10734-8.
  6. Lilly, M. and Kraft, A. (1997) Cancer Res 57, 5348-55.
  7. Leverson, J.D. et al. (1998) Mol Cell 2, 417-25.
  8. Winn, L.M. et al. (2003) Cell Cycle 2, 258-62.
  9. Pasqualucci, L. et al. (2001) Nature 412, 341-6.
  10. Kim, O. et al. (2004) Oncogene 23, 1838-44.
  11. Aho, T.L. et al. (2004) FEBS Lett 571, 43-9.
  12. Yan, B. et al. (2003) J Biol Chem 278, 45358-67.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
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