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7577
HTScan® PDK1 Kinase Assay Kit
细胞检测试剂盒
检测试剂盒

HTScan® PDK1 Kinase Assay Kit #7577

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HTScan® PDK1 Kinase Assay Kit: Image 1

图 3. PDK1 激酶活性的剂量依赖性曲线:使用 Phospho-PKA C (Thr197) Antibody #4781 检测 PDK1 激酶对底物肽 (#1024) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用数量递增的 PDK1 和 3.0 µM 底物肽反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 5. Staurosporine 会抑制 PDK1 激酶活性:使用 Phospho-PKA C (Thr197) Antibody #4781 检测 PDK1 激酶对 PDK1 底物肽 (#1024) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用 50 ng PDK1、3.0 µM 底物肽、20 µM ATP 和数量递增的 staurosporine 反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 4. PDK1 激酶活性的肽浓度依赖性:使用 Phospho-PKA C (Thr197) Antibody #4781 检测 PDK1 激酶对底物肽 (#1024) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用 50 ng PDK1 和浓度递增的底物肽反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 2. PDK1 激酶活性的时程:使用 Phospho-PKA C (Thr197) Antibody #4781 检测 PDK1 激酶对 PDK1 底物肽 (#1024) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔用 50 ng PDK1 和 3.0 µM 底物肽。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 1. 在使用以下反应条件的放射检测中可检测 PDK1 激酶活性:5 mM MOPS (pH 7.2)、2.5 mM β-甘油磷酸、1 mM EGTA、0.4 mM EDTA、5 mM MgCl2、0.05 mM DTT、50 ng/μl BSA、50 μM ATP,底物:PDKtide 400 ng/μL 和重组 PDK1:可变。

产品说明

该试剂盒提供一种方法来使用重组人 PDK1 激酶进行激酶活性检测。它包含活化的 PDK1 激酶(以 GST 融合蛋白的形式保存)、生物素化肽底物以及用于检测磷酸化底物肽的磷酸化丝氨酸/苏氨酸抗体。

分子式

生物素-肽:2,205 道尔顿。PDK1 激酶:67 kDa。

背景

磷酸肌醇依赖的蛋白激酶 1 (PDK1) 在许多信号转导通路中发挥关键作用 (1,2),包括 Akt 和 PKC 同工酶 p70 S6 激酶和 RSK 的激活 (3)。通过对这些激酶的作用,PDK1 参与调控包括细胞增殖、分化和凋亡在内的各种进程。

  1. Belham, C. et al. (1999) Curr Biol 9, R93-6.
  2. Toker, A. and Newton, A.C. (2000) Cell 103, 185-8.
  3. Williams, M.R. et al. (2000) Curr Biol 10, 439-48.

通路和蛋白

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