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7633
HTScan® PAK1 Kinase Assay Kit
细胞检测试剂盒
检测试剂盒

HTScan® PAK1 Kinase Assay Kit #7633

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图 3. PAK1 激酶活性的剂量依赖性曲线:使用 Phospho-Tyrosine Hydroxylase (Ser40) Antibody #2791 检测 PAK1 激酶对底物肽 (#1132) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用数量递增的 PAK1 和 1.5 µM 底物肽反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 5. Staurosporine 会抑制 PAK1 激酶活性:使用 Phospho-Tyrosine Hydroxylase (Ser40) Antibody #2791 检测 PAK1 激酶对 PAK1 底物肽 (#1132) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用 50 ng PAK1、1.5 µM 底物肽、20 µM ATP 和数量递增的 staurosporine 反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 4. PAK1 激酶活性的肽浓度依赖性:使用 Phospho-Tyrosine Hydroxylase (Ser40) Antibody #2791 检测 PAK1 激酶对底物肽 (#1132) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用 50 ng PAK1 和浓度递增的底物肽反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 2. PAK1 激酶活性的时程:使用 Phospho-Tyrosine Hydroxylase (Ser40) Antibody #2791 检测 PAK1 激酶对 PAK1 底物肽 (#1132) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔用 50 ng PAK1 和 1.5 µM 底物肽。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 1. 在使用以下反应条件的放射检测中可检测 PAK1 激酶活性:60 mM HEPES-NaOH (pH 7.5)、3 mM MgCl2、3 mM MnCl2、3 µM 原钒酸钠、1.2 mM DTT、ATP(可变)、2.5 µg/50 µl PEG20.000,底物:Tetra (LRRWSLG) 5 µg/50 µl,重组 PAK1:25 ng/50 µl。

产品说明

该试剂盒提供一种方法来使用重组人 PAK1 激酶进行激酶活性检测。它包含活化的 PAK1 激酶(以 GST 融合蛋白的形式保存)、生物素化肽底物以及用于检测磷酸化底物肽的磷酸化丝氨酸/苏氨酸抗体。

分子式

Peptide substrate, Biotin-peptide:2,326 道尔顿。GST-PAK1 激酶:90 kDa。

背景

丝氨酸/苏氨酸激酶 p21 激活的激酶 (PAK) 家族参与许多细胞进程,包括细胞骨架重组、MAPK 信号转导、凋亡信号转导、吞噬性 NADPH 氧化酶调控、生长因子诱导的神经突增生 (1,2)。现已报道了许多诱导 PAK 活性的机制。Rac/cdc42 结合 PAK 的氨基末端周围的 CRIB(或 PBD)结构域会导致 PAK 自磷酸化和构象变化 (1)。PDK 在 Thr423 位点磷酸化 PAK1 会诱导 PAK1 激活 (3)。现已发现许多自磷酸化位点,包括 PAK1 的 Ser199 和 Ser204 与 PAK2 的 Ser192 和 Ser197 (4,5)。自磷酸化位点位于氨基末端抑制结构域,因此可假设该区域的修饰会防止激酶恢复到失活构象 (6)。研究表明,PAK1 Ser144 或 PAK3 Ser139(位于激酶抑制结构域)磷酸化会影响激酶活性 (7)。PAK1 Ser21 或 PAK2 Ser20 的磷酸化可调控与接头蛋白 Nck 的结合 (8)。就氨基末端调节域而言,PAK4、PAK5 和 PAK6 与 PAK1-3 具有较低的序列相似性 (9)。PAK4 Ser474(一个与 PAK1 Thr423 类似的位点)磷酸化在调节 PAK4 的活性和功能中发挥重要作用 (10)。

  1. Knaus, U.G. and Bokoch, G.M. (1998) Int. J. Biochem. Cell Biol. 30, 857-862.
  2. Daniels, R.H. et al. (1998) EMBO J. 17, 754-764.
  3. King, C.C. et al. (2000) J. Biol. Chem. 275, 41201-41209.
  4. Manser, E. et al. (1997) Mol. Cell. Biol. 17, 1129-1143.
  5. Gatti, A. et al. (1999) J. Biol. Chem. 274, 8022-8028.
  6. Lei, M. et al. (2000) Cell 102, 387-397.
  7. Chong, C. et al. (2001) J. Biol. Chem. 276, 17347-17353.
  8. Zhao, Z. et al. (2000) Mol. Cell. Biol. 20, 3906-3917.
  9. Abo, A. et al. (1998) EMBO J. 17, 6527-6540.
  10. Qu, J. et al. (2001) Mol. Cell. Biol. 21, 3523-3533.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
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