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7802
HTScan® Csk Kinase Assay Kit
细胞检测试剂盒
检测试剂盒

HTScan® Csk Kinase Assay Kit #7802

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图 1. 在使用以下反应条件的放射性同位素滤膜结合测定法中可检测 CSK 激酶活性:60 mM HEPES-NaOH (pH 7.5)、3 mM MgCl2、3 mM MnCl2、3 uM 原钒酸钠、1.2 mM DTT、ATP(可变)、200 ng/50 µl PEG20,000,底物:Poly(EY) 1 ug/50 µl,重组 Csk:4 单位/50 µl。

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图 3. Csk 激酶活性的剂量依赖性曲线:使用 Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) #9411 检测 Csk 激酶对底物肽 (#1370) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用数量递增的 Csk 和 1.5 µM 底物肽反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 5. Staurosporine 会抑制 Csk 激酶活性:使用 Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) #9411 检测 Csk 激酶对 Csk 底物肽 (#1370) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用 100 ng Csk 激酶、1.5 µM 底物肽、20 µM ATP 和数量递增的 staurosporine 反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 4. Csk 激酶活性的肽浓度依赖性:使用 Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) #9411 检测 Csk 激酶对底物肽 (#1370) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用 100 ng Csk 和浓度递增的底物肽反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 2. Csk 激酶活性的时程:使用 Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) #9411 检测 Csk 激酶对 Csk 底物肽 (#1370) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔用 100 ng Csk 和 1.5 µM 底物肽。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

产品说明

该试剂盒提供一种方法来使用重组人 Csk 激酶进行激酶活性检测。它包含活化的 Csk 激酶(以 GST 融合蛋白的形式保存)、生物素化肽底物以及用于检测磷酸化底物肽的磷酸化酪氨酸单克隆抗体。

分子式

Peptide substrate, Biotin-peptide:2,290 道尔顿;GST-Csk 激酶:80 kDa。

背景

羧基末端 Src 激酶 (Csk) 是普遍表达的非受体酪氨酸激酶,它通过磷酸化 SFK 羧基末端酪氨酸负向调节 Src 家族激酶 (SFK) (1,2)。磷酸化的羧基末端酪氨酸以分子内方式与 SFK 的 SH2 结构域结合并导致 SFK 的折叠和失活 (3)。这种 Csk 催化的 SFK 酪氨酸磷酸化具有高度特异性和排他性。SFK 羧基末端酪氨酸是 Csk 的唯一已知生理底物 (4)。

Csk 由一个 SH2 结构域、一个 SH3 结构域和一个激酶结构域组成。存在以下证据:SH2 结构域和 SH3 结构域是调节 SFK 必需的并且可以募集 Csk 至 SFK 处于活性状态的膜。这个过程由 Csk 结合蛋白(Cbp,也称作 PAG)介导,该蛋白质牢固结合于 Csk 的 SH2 结构域 (5)。SFK 受胞外刺激激活导致 Cbp 的酪氨酸磷酸化产生 Csk 的锚定位点。Csk 的募集形成终止 SFK 功能的反馈机制 (6)。

  1. Nada, S. et al. (1991) Nature 351, 69-72.
  2. Nada, S. et al. (1993) Cell 73, 1125-35.
  3. Lee, S. et al. (2003) Proc Natl Acad Sci U S A 100, 14707-12.
  4. Imamoto, A. and Soriano, P. (1993) Cell 73, 1117-24.
  5. Kawabuchi, M. et al. (2000) Nature 404, 999-1003.
  6. Matsuoka, H. et al. (2004) J Biol Chem 279, 5975-83.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
DELFIA 为 PerkinElmer 公司的注册商标
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