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7513
HTScan® Aurora B Kinase Assay Kit
细胞检测试剂盒
检测试剂盒

HTScan® Aurora B Kinase Assay Kit #7513

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图 3. Aurora B 激酶活性的剂量依赖性曲线:使用 Phospho-PLK (Ser137) Antibody #5070 检测 Aurora B 激酶对底物肽 #1300 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用数量递增的 Aurora B 和 1.5 µM 底物肽反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 5. Staurosporine 会抑制 Aurora B 激酶活性:使用 Phospho-PLK (Ser137) Antibody #5070 检测 Aurora B 激酶对 Aurora B 底物肽 #1300 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用 50 ng Aurora B、1.5 µM 底物肽、50 µM ATP 和数量递增的 staurosporine 反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 4. Aurora B 激酶活性的肽浓度依赖性:使用 Phospho-PLK (Ser137) Antibody #5070 检测 Aurora B 激酶对底物肽 #1300 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用 50 ng Aurora B 和浓度递增的底物肽反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 2. Aurora B 激酶活性的时程:使用 Phospho-PLK (Ser137) Antibody #5070 检测 Aurora B 激酶对 Aurora B 底物肽 #1300 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔用 50 ng Aurora B 和 1.5 µM 底物肽。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 1. 在使用以下反应条件的放射检测中可检测 Aurora B 激酶活性:5 mM MOPS (pH 7.2)、2.5 mM β-甘油磷酸、1 mM EGTA、0.4 mM EDTA、5 mM MgCl2、0.05 mM DTT、50 μM ATP,底物:MBP 200 ng/μL 和重组 Aurora B:可变。

产品说明

该试剂盒提供一种方法来使用重组人 Aurora B 激酶进行激酶活性检测。它包含活化的 Aurora B 激酶(以 GST 融合蛋白的形式提供)、生物素化肽底物以及用于检测磷酸化底物肽的磷酸化丝氨酸抗体。

分子式

生物素-PLK (Ser137):1,945 道尔顿。GST-Aurora B 激酶:66 kDa。

背景

Aurora 激酶属于高度保守的有丝分裂丝氨酸/苏氨酸激酶家族,已在哺乳动物细胞中识别出该家族的三个成员,分别为 Aurora A、B 和 C (1,2)。研究表明,时序表达模式和 Aurora 激酶在有丝分裂亚细胞定位与有丝分裂结构有关。Aurora 激酶的功能可作用于 G2 期到胞质分裂,有可能涉及重要的细胞周期事件,如中心体复制、染色体双向定位和隔离、卵裂沟的定位和脱离 (3)。Aurora A 在中心体上被发现,沿着有丝分裂的纺锤体微管以及在有丝分裂增殖细胞的细胞浆中分布。Aurora A 蛋白水平在 G1 期和 S 期很低,在细胞周期 G2/M 期达到最高。Aurora A 在催化域 Thr288 位点的磷酸化会增加激酶活性。Aurora A 可参与中心体分离、成熟和纺锤体装配和稳定性。Aurora B 蛋白也在细胞周期 G2/M 期表达最多;Aurora B 激酶活性在有丝分裂的中期到末期时最高。前期时 Aurora B 在染色体定位到纺锤体之前与之结合。Aurora B 通过控制微管-着丝粒的结合和胞质分裂调控染色体分离。G2/M期 Aurora A 和 Aurora B 的表达与组蛋白 H3 的磷酸化高度一致 (4,5);研究人员已经发现多种人类癌症中这些激酶均呈过表达 (2,4)。在前期到胞质分裂期,Aurora C 都位于中心体上, mRNA 和蛋白水平都在 G2/M 期达到最高。尽管典型的 Aurora C 蛋白的表达局限在睾丸中,但研究发现多种癌细胞系中也有过表达的 Aurora C (6)。

  1. Warner, S.L. et al. (2003) Mol Cancer Ther 2, 589-95.
  2. Katayama, H. et al. (2003) Cancer Metastasis Rev 22, 451-64.
  3. Andrews, P.D. et al. (2003) Curr Opin Cell Biol 15, 672-83.
  4. Pascreau, G. et al. (2003) Prog Cell Cycle Res 5, 369-74.
  5. Crosio, C. et al. (2002) Mol. Cell. Biol. 22 (3), 874-885.
  6. Kimura, M. et al. (1999) J Biol Chem 274, 7334-40.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
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