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图 3. Abl1 T315I 激酶活性的剂量依赖性曲线：使用 Phospho-Tyrosine Mouse mAb (P-Tyr-100) #9411 检测 Abl1 T315I 激酶对底物肽 (#1366) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中，每个反应孔在室温下用数量递增的 Abl1 T315I 和 1.5 µM 底物肽反应 30 分钟。（DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标）。
图 5. 比较野生型和突变 Abl1 T315I 激酶对 Staurosporine (A) 和 Gleevec (B) 的敏感性：使用 Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) # 9411检测 Abl1 激酶对 Abl1 底物肽 (#1366) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中，每个反应孔在室温下用 50 ng 激酶、1.5 µM 底物肽、5 µM ATP 和浓度递增的规定抑制剂反应 30 分钟。（DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标）。
图 4. Abl1 T315I 激酶活性的肽浓度依赖性：使用 Phospho-Tyrosine Mouse mAb (P-Tyr-100) #9411 检测 Abl1 T315I 激酶对底物肽 (#1366) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中，每个反应孔在室温下用 50 ng Abl1 T315I 和浓度递增的底物肽反应 30 分钟。（DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标）。
图 2. Abl1 T315I 激酶活性的时程：使用 Phospho-Tyrosine Mouse mAb (P-Tyr-100) #9411 检测 Abl1 T315I 激酶对 Abl1 T315I 底物肽 (#1366) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中，每个反应孔用 50 ng Abl1 T315I 和 1.5 µM 底物肽。（DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标）。
图 1. 在使用以下反应条件的放射检测中可检测 Abl1 T315I 激酶活性：60 mM HEPES-NaOH (pH 7.5)、5 mM MgCl2、5 mM MnCl2、3 µM 原钒酸钠、1.2 mM DTT、100 µM ATP、100 µM Signal Transduction Protein (Tyr160) Biotinylated Peptide #1366 和可变量的重组 Abl1 T315I。反应混合物在室温下孵育 10 分钟。
产品信息
该试剂盒提供一种方法来使用重组人 Abl1 T315I 激酶进行激酶活性检测。它包含活化的 Abl1 T315I 激酶（以 GST 融合蛋白的形式保存）、生物素化肽底物以及可检测磷酸化底物肽的磷酸化酪氨酸单克隆抗体。
| 分子式 | Peptide substrate, Biotin-Signal Transduction Protein (Tyr160)：1830 道尔顿。GST-Abl1 T315I 激酶：76 kDa。 |
c-Abl 原癌基因编码在后生动物进化中广泛表达且高度保守的非受体蛋白酪氨酸激酶。c-Abl 蛋白分布在细胞核和细胞浆中。它在调控细胞增殖、分化、凋亡、细胞黏附以及应激反应过程中起作用 (1-3)。c-Abl 激酶活性通过多样化生理刺激在体内提高，包括整合素激活、PDGF 刺激以及与 c-Jun、Nck 和 RFX1 的结合 (2,4)。c-Abl 激酶活性的体内调控机制尚未完全清晰。Tyr245 位于 SH2 和催化结构域之间的连接区域。这种定位在 Abl 家族成员中较保守。Tyr245 磷酸化作用在激活 c-Abl 激酶时起作用 (5)。此外，Tyr412 磷酸化作用位于 c-Abl 的激酶激活环中，为激酶活性所必需 (6)。
伊马替尼 (Gleevec) 已成功用于治疗与 Bcr-Abl 激酶有关的慢性髓性白血病 (CML)。CML 患者中最常发现与 Gleevec 耐药性有关的突变是 Abl 激酶结构域中的 T315I (7,8)。
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