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13547
Griess Reagent Nitrite Measurement Kit
细胞检测试剂盒
检测试剂盒

Griess Reagent Nitrite Measurement Kit #13547

引用 (0)
FUNC Image 1 - Griess Reagent Nitrite Measurement Kit

图 2:在未经处理或已经 Mouse Interferon-γ (mIFN-γ) #5222 (100 ng/ml)、Lipopolysaccharides (LPS) #14011 (10 ng/ml) 或两者处理的 RAW 264.7 细胞的上清液中检测亚硝酸盐。48 小时后,收集细胞培养物上清液,并使用 Griess Reagent Nitrite Measurement Kit 检测亚硝酸盐。

FUNC Image 2 - Griess Reagent Nitrite Measurement Kit

图 1:不同检测基质有代表性标准曲线。亚硝酸盐标准曲线根据水、RPMI 10% FBS、血清或尿生成。

购买 # 13547S
产品货号 规格 价格 库存
13547S
1 个试剂盒(500 次检测)

产品包括 数量(计数)
0.1 M Nitrite Standard 1 x 1 ml
Reagent A: Sulfanilamide Solution 1 x 25 ml
Reagent B (NED Solution) 1 x 25 ml

实验步骤

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#13547 Griess Reagent Nitrite Measurement Kit 实验步骤

A. 溶液和试剂

  1. 试剂 A:磺胺胺溶液:使用前将其恢复至室温。
  2. 试剂 B:NED 溶液:使用前请恢复至室温。
  3. 通过混合等体积的试剂 A:磺胺溶液和试剂 B:NED 溶液,制备Griess 试剂工作液
  4. 0.1 M 亚硝酸盐标准品:使用前将其恢复至室温。通过在未知样品所用的相同基质/缓冲液中以 1:1000 稀释0.1 M 亚硝酸盐标准品,制备100 µM 亚硝酸盐工作标准液。对100 µM 亚硝酸盐工作标准溶液进行连续两倍稀释。标准曲线中亚硝酸盐的最终浓度应如下: 100、50、25,12.5、6.25、3.13 和 1.56 µM。空白也应在同一个基质/缓冲液中制备。

B. 检测程序

  1. 添加 100 µl 样品或亚硝酸盐标准品至微量滴定板的每个孔。
  2. 每孔添加 100 µl Griess 试剂工作液。溶液在亚硝酸盐存在下会变成粉红色。
  3. 在 550 nm 处测量吸光度。
  4. 为量化未知样品中亚硝酸盐的量,以平均吸光度对照对应标准曲线中每个相应浓度绘制 X vs. Y 的标准曲线。从线性曲线外推未知样品的浓度。

发布​于 2020 年 6 月 

实验步骤编号:2052

产品说明

Griess Reagent Nitrite Measurement Kit 可用于通过测量其中一种稳定的氧化产物亚硝酸盐来间接检测一氧化氮 (NO)。亚硝酸盐会与磺胺和 N-(1-萘基)二盐酸乙二胺 (NED) 发生反应,从而产生粉红色的偶氮染料。该测定法中产生的偶氮染料可通过使用分光光度计测量在 550 nm 处的吸光度来进行检测。

特异性/敏感性

Griess Reagent Nitrite Measurement Kit 可检测某种特定样品中的亚硝酸盐水平。使用 Griess 测定法可检测微摩尔级数量的亚硝酸盐,其中检测范围取决于检测中所使用的基质或缓冲液。估计产生的总 NO 需要确定亚硝酸盐和硝酸盐水平。试剂盒仅能检测亚硝酸盐水平,因此硝酸盐应首先使用硝酸还原酶进行还原。

背景

一氧化氮 (NO) 是一种多效性信号转导分子,在许多细胞类型和组织中都发挥关键作用。三种不同的一氧化氮合成酶 (NOS) 催化 L-精氨酸氧化成 L-瓜氨酸和 NO 均会产生 NO (1)。其中的两种酶(内皮 NOS (eNOS) 和神经元 NOS (nNOS))在许多细胞类型中呈组成性表达 (1)。可诱导的 NOS (iNOS) 受转录调控,并在促炎性细胞因子等炎性刺激下表达 (1)。NO 是一种有效的血管扩张剂和神经递质 (1)。在癌细胞中,NO 可作为抑癌因子或肿瘤促进因子 (2)。巨噬细胞产生的高水平 NO 有细胞毒性 (2)。相比之下,研究表明低水平的 NO 可能会促进血管生成,从而导致肿瘤发生 (2)。

  1. Hill, B.G. et al. (2010) J Biol Chem 285, 19699-704.
  2. Rahat, M.A. and Hemmerlein, B. (2013) Front Physiol 4, 144.
仅供研究使用。不得用于诊断流程。
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