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5872
Protease/Phosphatase Inhibitor Cocktail (100X)
缓冲液与染料
缓冲剂

Protease/Phosphatase Inhibitor Cocktail (100X) #5872

引用 (0)
Protease/Phosphatase Inhibitor Cocktail (100X): 图像 1

使用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb #8480 对在没有蛋白酶抑制剂(左图)或添加 Protease/Phosphatase Inhibitor Cocktail (100X) #5872(右图)的裂解缓冲液中制备,且在 37ºC 下孵育特定时间点的 NIH/3T3 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。在没有蛋白酶抑制剂的情况下,在采集后 3 小时内,β-Catenin 信号逐渐减弱,表明蛋白被降解。在有蛋白酶抑制剂混合物的情况下,β-Catenin 降解明显减弱,并且信号在采集后 20 小时仍然存在。

Protease/Phosphatase Inhibitor Cocktail (100X): 图像 2

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb #4060(上图)或 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691(下图),对血清饥饿过夜、经 hPDGF-BB #8912(100ng/ml,5 分钟)处理、在没有磷酸酶抑制剂(左图)或添加 Protease/Phosphatase Inhibitor Cocktail (100X) #5872(右图)的裂解缓冲液中制备并在 37ºC 下孵育规定时间点的 NIH/3T3 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。在没有磷酸酶抑制剂的情况下,在时间点 0 之后,磷酸化-Akt 信号明显减弱,表明磷酸化在之后的时间点快速消失。在有磷酸酶抑制剂混合物的情况下,磷酸化-Akt 信号在所有监测的时间点中依然被保留着。

产品使用信息

1. 使用前,短暂涡旋 Protease/Phosphatase Inhibitor Cocktail (100X)。

2. 在进行细胞裂解之前,在所需裂解缓冲液中按 1:100 的比例稀释混合物,以获得 1X 的使用浓度。

溶液和试剂

Protease/Phosphatase Inhibitor Cocktail (100X) 为一种特制的多成分混合抑制物,其中的抑肽酶、苯丁抑制素、E64 和亮抑酶肽可抑制多种内源性蛋白酶;而氟化钠、焦磷酸钠、β-甘油磷酸和原钒酸钠,则抑制多种内源性丝氨酸/苏氨酸以及酪氨酸磷酸酶。该混合物不含 EDTA(一种金属蛋白酶抑制剂),它与一些下游应用不相容(即蛋白芯片、2D 电泳等)。如要将 EDTA 用作蛋白酶抑制剂,则可添加到细胞裂解缓冲液中,其终浓度为 5mM。

保存

将未稀释的 100X 混合液储存在 4ºC 的温度下。切勿冷冻。本产品可稳定保存 12 个月。

产品说明

当裂解缓冲液中的稀释终浓度为 1X 时,Protease/Phosphatase Inhibitor Cocktail 可防止总细胞提取物中的内源性蛋白酶和磷酸酶对蛋白的降解和去磷酸化。100X 混合物为透明淡黄色到淡绿色的液体。

背景

动态蛋白磷酸化是许多细胞进程调控所依赖的一种关键细胞信号转导机制。为了研究特定靶蛋白的磷酸化状态,磷酸化的目标残基必须保持完整。当细胞裂解成总细胞提取物时,会发生正常细胞信号转导调节丢失,同时细胞提取物内的磷酸酶会以不受控的方式自由去磷酸化蛋白。磷酸酶抑制剂添加到细胞裂解缓冲液中有助于在发生细胞破碎时保留磷酸化残基。

同样,在制备总细胞提取物时,对正常细胞控制的丧失会导致内源性蛋白酶不受控地降解蛋白。蛋白酶抑制剂添加到细胞裂解缓冲液中有助于保留细胞提取物中的靶蛋白。

限制使用

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