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使用 Phospho-PKC (pan) (ΒII Ser660) Antibody #9371 对在没有蛋白酶抑制剂（左图）或添加 Protease/Phosphatase Inhibitor Cocktail (100X) #5870（右图）的裂解缓冲液中制备且在 37ºC 下孵育规定时间点的 NIH/3T3 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。在没有蛋白酶抑制剂的情况下，在采集后 3 小时内，Phospho-PKC 信号逐渐减弱，表明蛋白被降解。在有蛋白酶抑制剂混合物的情况下，Phospho-PKC 降解明显减弱，并且信号在采集后 24 小时仍然存在。
产品信息
使用前，稍微涡旋 Phosphatase Inhibitor Cocktail (100X)。那么，在使用前：
对于蛋白印迹或免疫沉淀实验细胞裂解：按 1:100 的比例用所需裂解缓冲液稀释混合物，以获得 1X 的使用浓度。
对于 PTMScan(R) 细胞裂解：按 1:50 的比例用尿素裂解缓冲液稀释混合物，以获得 2X 的使用浓度。鉴于裂解物的浓缩性质，需要这种更高的浓度。
Phosphatase Inhibitor Cocktail (100X) 是一种由氟化钠、焦磷酸钠、β-甘油磷酸和原钒酸钠构成的专有混合物，有利于大范围阻挡内源性丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸磷酸酶。
将未稀释的 100X 混合液储存在 4ºC 的温度下。切勿冷冻。
这种磷酸酶抑制剂混合物用于防止总细胞提取物中活化丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸磷酸酶的磷酸化蛋白发生去磷酸化。100X 混合物为无色至淡黄色的液体。
动态蛋白磷酸化是许多细胞进程调控所依赖的一种关键细胞信号转导机制。为了研究特定靶蛋白的磷酸化状态，磷酸化的目标残基必须保持完整。当细胞裂解成总细胞提取物时，会发生正常细胞信号转导调节丢失，同时细胞提取物内的磷酸酶会以不受控的方式自由去磷酸化蛋白。磷酸酶抑制剂添加到细胞裂解缓冲液中有助于在发生细胞破碎时保留磷酸化残基。
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