REACTIVITY | H |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit IgG |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
人
使用与人 ROS1 蛋白中羧基末端结构域的残基相对应的一种肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
ROS1 是胰岛素受体家族的一种孤儿受体酪氨酸激酶,最初被发现是 UR2 肉瘤病毒蛋白的 v-ros 同源物 (1)。ROS1 由一个大的细胞外结构域组成,该结构域由六个纤连蛋白重复序列、一个跨膜结构域和一个 C 末端激酶结构域组成。作为孤儿受体,ROS1 的功能并非熟知,即便已经证明它在附睾上皮细胞分化中发挥重要作用 (2)。探索性研究最初在成胶质细胞瘤细胞中鉴定到 ROS1 的首个致癌融合蛋白 FIG-ROS1 (3),并且后续研究发现,在胆管癌 (4)、卵巢癌 (5) 和非小细胞肺癌 (NSCLC) (6) 细胞中也存在这种融合蛋白。研究人员发现,在 NSCLC 细胞中存在其他的致癌 ROS1 融合蛋白(频率约为 1.6%),其中,ROS1 激酶结构域与 CD74 和 SLC34A2 等数种不同蛋白质的氨基末端区域融合 (6-8)。ROS1 融合蛋白激活 SHP-2 磷酸酶、PI3K/Akt/mTOR、Erk 和 Stat3 通路 (3,4,9)。ROS1 激酶结构域下游有两个自磷酸化位点(Tyr2274、Tyr2334),其中任何一个都可以作为 ROS1 激酶活性的生物标志物,包括 ROS1 融合蛋白的生物标志物 (10)。
探索与本品相关的通路。
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