REACTIVITY | H |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit IgG |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
人
犬 , 兔
使用与人 ID3 蛋白羧基末端附近残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
DNA 结合/分化 (ID) 蛋白的抑制剂是旨在抑制碱性螺旋-环-螺旋 (bHLH) 转录因子活性的一个蛋白家族。在人体中发现了 4 种 ID 蛋白 (ID1-4),它们都含有一个螺旋-环-螺旋结构域,但缺乏碱性 DNA 结合结构域。用 bHLH 转录因子结合形成的异源二聚体可以减弱 bHLH 蛋白活性并阻止它们与 DNA 结合 (1)。ID 蛋白在发育过程中发挥着重要作用,主要抑制干细胞/祖细胞提前成熟分化 (1,2)。ID3 在免疫系统发育过程中发挥着重要的作用,可以抑制 E2A 介导的 T 细胞分化 (3)。针对小鼠模型的研究已经证明,ID3 同合型缺失会阻断调节性 T 细胞分化(4)并导致 γδ T 细胞淋巴瘤的产生 (5)。已证明在造血室外部 ID3 能抑制 MyoD,表明 ID3 与 TGFβ 介导的肌肉修复有关 (6)。同样,研究表明 ID3 能抑制结肠癌细胞中的 p21,据称此功能能够增强可能的癌起始细胞的自我更新能力 (7)。
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