REACTIVITY | H M R |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit IgG |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
人, 小鼠, 大鼠
使用与人类 FosB 的序列相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。该抗体在最合适的条件下偶联 Alexa Fluor® 488,其中 F/P 比值为 2-6。
胞核癌基因 Fos 家族包括 c-Fos、FosB、Fos-相关抗原 1 (FRA1) 和 Fos-相关抗原 2 (FRA2) (1)。虽然大部分 Fos 蛋白作为单一亚型存在,但是 FosB 蛋白作为两种亚型存在:全长 FosB 和缩短形式 FosB2 (δ FosB),后者缺乏羧基端的 101 个氨基酸 (1-3)。Fos 蛋白的表达可由各种胞外刺激快速且瞬间诱导,这些刺激包括生长因子、细胞因子、神经递质、多肽激素和应激反应。Fos 蛋白与 Jun 蛋白(c-Jun、JunB 和 JunD)二聚化以形成激活蛋白-1 (AP-1),一种与 TRE/AP-1 元件结合并激活转录的转录因子。Fos 蛋白和 Jun 蛋白包含可介导二聚化的亮氨酸拉链基序和一个与 DNA 结合的毗邻碱性结构域。各种 Fos/Jun 异二聚体在反式激活 AP-1 依赖性基因方面的能力不同。Erk 激酶引起的 Fos 蛋白磷酸化对胞外刺激应答后,除了表达增加外,还可能会进一步增强转录活性 (4-6)。Erk5 引起的 c-Fos 在 Ser32 和 Thr232 的磷酸化增强了蛋白质稳定性及核定位 (5)。Erk1/2 引起的 FRA1 在 Ser252 和 Ser265 的磷酸化增强了蛋白质稳定性并导致 FRA1 在癌细胞中过量表达 (6)。生长因子刺激后,FosB 和 c-Fos 的表达在静息成纤维细胞中立即开始,但是持续时间很短,蛋白水平在几小时后便消失了 (7)。FRA1 和 FRA2 表达持续的时间更长,并且可以在非同步生长的细胞中检测到它的相对水平 (8)。去调控的 c-Fos、FosB 和 FRA2 表达可能导致肿瘤性细胞转化;但 δ FosB 不能转化细胞 (2,3)。
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