反应性 | H M R Mk |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | |
来源 | 兔 |
产品信息
Cell Signaling Technology 的这种抗体接合 Alexa Fluor® 488 荧光染料,并可对人体细胞进行直接的流式细胞术和免疫荧光分析内部检测。该抗体显示的物种交叉反应性预计与非偶联的 Cleaved Caspase-3 (Asp175) Antibody #9661 相同。
应用 | 稀释度 |
---|---|
免疫荧光法(免疫细胞化学) | 1:50 |
流式细胞术 | 1:50 |
保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。请不要分装抗体。避光保存。切勿冷冻。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
注意:细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。
吸干液体,随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。
注意:甲醛有毒性,需在通风橱中使用。
注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。
发布于 2006 年 11 月
修订于 2013 年 11 月
实验步骤编号:182
本实验步骤中所需的所有试剂可与我们的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 一起高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
注意:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活性染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经流式细胞术验证的细胞染料完整列表。
注:固定前,应分离黏附细胞或组织,并放在单细胞悬浮液中。
注意:理想的离心条件根据细胞类型和试剂容量有所不同。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀。
注意:如果使用全血,则需在固定前裂解红细胞并通过离心洗涤。
注意:如果表位被甲醛和/或甲醇破坏,可以在固定前添加靶向 CD 标记物或其他胞外蛋白的抗体。在固定和透化过程中,这类抗体保持结合目的靶标。但注意,某些荧光团(包括 PE 和 APC)会被甲醇损坏,因此不应在透化前添加。如果您不确定,请进行小规模实验。
注:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。
发布于 2009 年 7 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:407
Cleaved Caspase-3 (Asp175) Antibody (Alexa Fluor® 488 Conjugate) 可检测内源水平的活化 caspase-3 中的大片段 (17/19 kDa) ,该片段由天冬氨酸 175 附近的裂解活化产生。该抗体不可识别全长 caspase-3 或其他裂解活化的 caspase 。
人, 小鼠, 大鼠, 猴
牛 , 犬 , 猪
使用与人 caspase-3 中 Asp175 附近的氨基末端残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。使用蛋白质 A 和肽亲和色谱对抗体进行纯化。该抗体在最合适的条件下接合 Alexa Fluor® 488,其中 F/P 比值为 2-6。
Caspase-3 (CPP-32, Apoptain, Yama, SCA-1) 是一个凋亡的关键执行者,因为它对许多关键的蛋白起着部分或全部的裂解作用,比如核酶多聚 (ADP-ribose) 聚合酶 (PARP) (1)。caspase-3 的激活需要经过其未活化的酶原形式转变为活化的 p17 和 p12 片段的蛋白水解过程。caspase-3 的剪切需要位于 P1 位点的天门冬氨酸残基 (2)。
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