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Erk 信号转导

MAPK/Erk 信号级联放大通过生长和分化中涉及的各种不同受体进行激活，包括受体酪氨酸激酶 (RTKs)、整合素以及离子通道。GPCRs（G 蛋白偶联受体）使用一组不同的接头蛋白激活 MAPK 级联。

级联的特异性组分在不同刺激下差别很大，但通路的结构是相似的：

  • 接头蛋白（Shc、GRB2、Crk 等）将受体连接至鸟嘌呤核苷酸交换因子 (GEF)，即 SOS 和 C3G。
  • GEF 蛋白将信号传递到小 GTP 结合蛋白 (Ras、Rap1)。
  • GTP 结合蛋白激活级联的核心单位，级联单位包括一个 MAPKKK (Raf)、一个 MAPKK (MEK1/2) 和 MAPK (Erk)。激活的 Erk 可在胞质中调控靶标，也可转位到胞核磷酸化各种调控基因表达的转录因子。
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Erk（胞外信号调节的激酶）激活需要 Thr 202 和 Tyr 204 氨基酸残基磷酸化。

已经 TPA（诱导 Erk 磷酸化）或 U0126（抑制 Erk 磷酸化）处理的 NIH/3T3 细胞沉淀物（结果图 A）与石蜡包埋的卵巢癌细胞切片（结果图 B）

IHC 比较
  • 正如预计的一样，CST #4370 抗体在经 TPA 处理的细胞中显示出较深的细胞染色，但在经 U0126 处理的细胞中则没有较深染色。
  • 在 1：400的稀释度下，公司 1 抗体在经 TPA 诱导的细胞中的染色较浅。在更低稀释度/更高浓度下，公司 1 抗体在经 U0126 处理的细胞中显示出较深的非特异性染色。
  • 在相同的稀释度下，CST #4370对卵巢癌组织的染色比公司 1 抗体更深。使用更低稀释度/更高浓度时，公司 1 抗体的染色比 CST #4370 更浅，但具有可比性。
  • 考虑到公司 1 抗体在经 U0126 处理的 NIH/3T3 细胞沉淀物中有背景染色，卵巢癌组织染色特异性值得怀疑。
#4377 WB

Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (197G2) Rabbit mAb #4377

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (197G2) Rabbit mAb4377（上图）、Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (3D7) Rabbit mAb #9215（中图）和 Phospho-SAPK/JNK (Thr183/Tyr185) (98F2) Rabbit mAb #4671（下图）对经紫外线和 PDGF 处理的 NIH/3T3 细胞的纯化 MAPK 磷蛋白或提取物进行蛋白质印迹分析。

功能：Erk（胞外信号调节的激酶）激活需要 Thr 202 和 Tyr 204 氨基酸残基磷酸化。

样品：Jurkat 细胞用 TPA 处理，TPA 是一种会激活 PKC 以诱导 Erk 磷酸化的佛波酯。

蛋白质印迹实验比较
  • CST 的 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb #4370可检测分别与 Erk1 和 Erk2 对应的预计两条 44 和 42 kDa的条带。
  • 公司 1 的 phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) mouse monoclonal antibody 可检测预计的两条 44 和 42 kDa的条带，并且还显示出较高背景和非特异性的条带。
  • 公司 2 的 phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) rabbit polyclonal antibody 可微弱地检测预计的两条 44 和 42 kDa 的条带。TPA 会强烈诱导 Erk 磷酸化，因此微弱信号表明抗体结合率较低。
CST #4370 与竞争公司 1、竞争公司 2 产品4370的稀释比为 1:2000、1:100、1:100 浓度 (μg/mL) 0.222 1 10