反应性 | |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
免疫沉淀法 | 1:20 |
本实验步骤适用于天然蛋白质免疫沉淀法,进行蛋白质免疫印迹分析或激酶活动分析。
注意:用反渗透去离子 (RODI) 水或等效净化水制备溶液。
10X 细胞裂解缓冲液: (#9803) 20 mM Tris (pH 7.5),150 mM NaCl,1 mM EDTA,1 mM EGTA,1% Triton X-100,2.5 mM 焦磷酸钠,1 mM β 甘油磷酸酯,1 mM Na3VO4,1 μg/ml 亮抑酶肽
注意: CST 建议在使用前应添加 1 mM PMSF (#8553)*。
继续下述其中一项的具体步骤。
注意:当使用兔源一抗检测分子量在 50 kDa 范围内的蛋白质时,我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Light-Chain Specific) (D4W3E) mAb (#45262) 或 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP conjugate #5127)作为二抗,以尽量减少变性兔重链产生的干扰。对于分子量大约为 25 kDa 的蛋白,建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP conjugate #5127),以尽量减少变性小鼠重链或轻链产生的干扰。
当使用鼠源一抗检测分子量在 50 kDa 范围内的蛋白质时,我们建议使用 Rabbit Anti-Mouse IgG (Light Chain Specific) (D3V2A) mAb (HRP Conjugate) (#58802) 作为二抗,以尽量减少变性小鼠重链产生的干扰。
发布时间 2007 年 12 月
修订时间 2021 年 10 月
实验步骤编号:27
使用磷酸-Akt 底物合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
作为激酶的一个重要类别,Arg 引导型激酶或 AGC 家族激酶,包括 cAMP-依赖性蛋白激酶 (PKA)、cGMP-依赖性蛋白激酶 (PKG)、蛋白激酶 C、Akt 和 RSK。这些激酶具有相同的底物特异性,其特征为相对于磷酸化的 Ser 或 Thr 位点,具有在位置 -3 处 的 Arg (1,2)。Akt 在介导关键细胞反应(包括细胞生长与存活、血管生成和转录调节)中发挥核心作用 (3-5)。尽管已经知道多种 Akt 底物(如 GSK-3、Bad 和胱天蛋白酶-9)但是许多重要的底物仍等待发现。Akt 仅在以位置 -5 和 -3处 Arg 为特征的保守基序中在 Ser/Thr 位点磷酸化底物 (6)。Cell Signaling Technology 的磷酰-Akt 底物特异性抗体是研究 Akt 和其他 Arg 引导型激酶调节磷酸化以及高通量激酶药物研发的强有力工具。
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