反应性 | 所有物种 |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | |
来源/亚型 | 兔 IgG |
产品信息
Cell Signaling Technology 的这种抗体通过甲酰苯甲酰胺修饰抗体与酰肼激活磁珠之间的共价反应进行固定。
Phospho-Akt Substrate (RXXS*/T*) (110B7E) Rabbit mAb (Magnetic Bead Conjugate) 可用于对磷酸化 Akt 底物蛋白进行免疫沉淀。
应用 | 稀释度 |
---|---|
免疫沉淀 | 1:20 |
保存在 PBS 缓冲液(pH 为 7.2),0.1% Tween® 20 中。储存在 4°C。切勿分装抗体。
本实验步骤适用于天然蛋白质免疫沉淀法,进行蛋白质免疫印迹分析或激酶活动分析。
注意:用反渗透去离子 (RODI) 水或等效净化水制备溶液。
10X 细胞裂解缓冲液: (#9803) 20 mM Tris (pH 7.5),150 mM NaCl,1 mM EDTA,1 mM EGTA,1% Triton X-100,2.5 mM 焦磷酸钠,1 mM β 甘油磷酸酯,1 mM Na3VO4,1 μg/ml 亮抑酶肽
注意: CST 建议在使用前应添加 1 mM PMSF (#8553)*。
继续下述其中一项的具体步骤。
注意:为了最大限度减少变性 IgG 重链产生的遮盖作用 (~50 kDa),我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Light-Chain Specific) (L57A3) mAb (#3677) 或 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP conjugate #5127)。为了最大限度减少变性 IgG 轻链产生的遮盖作用 (~25 kDa),我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP conjugate #5127)
发布于 2007 年 12 月
实验步骤编号:408
Phospho-Akt Substrate (RXXS*/T*) (110B7E) Rabbit mAb (Magnetic Bead Conjugate) 可识别包含磷酸化 Ser/Thr(其前方的 3 位点有 Arg)的肽和蛋白。观察到它可在某种程度上优先检测包含磷酸化 Ser/Thr(在其前方的位点 -5 和 -3 有 Arg)的肽。(美国专利号:6,441,140;6,982,318;7,259,022;7,344,714;美国系列号 11,484,485;和全部外国同类产品)
预期的所有物种
使用磷酸-Akt 底物合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
作为激酶的一个重要类别,Arg 引导型激酶或 AGC 家族激酶,包括 cAMP-依赖性蛋白激酶 (PKA)、cGMP-依赖性蛋白激酶 (PKG)、蛋白激酶 C、Akt 和 RSK。这些激酶具有相同的底物特异性,其特征为相对于磷酸化的 Ser 或 Thr 位点,具有在位置 -3 处 的 Arg (1,2)。Akt 在介导关键细胞反应(包括细胞生长与存活、血管生成和转录调节)中发挥核心作用 (3-5)。尽管已经知道多种 Akt 底物(如 GSK-3、Bad 和胱天蛋白酶-9)但是许多重要的底物仍等待发现。Akt 仅在以位置 -5 和 -3处 Arg 为特征的保守基序中在 Ser/Thr 位点磷酸化底物 (6)。Cell Signaling Technology 的磷酰-Akt 底物特异性抗体是研究 Akt 和其他 Arg 引导型激酶调节磷酸化以及高通量激酶药物研发的强有力工具。
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