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5563
PTMScan® Phospho-Akt Substrate Motif mAb 2 (RXRXXS*/T*) Kit
蛋白质组分析产品
PTMScan

PTMScan® Phospho-Akt Substrate Motif mAb 2 (RXRXXS*/T*) Kit #5563

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图表显示了在使用 Akt substrate motif mAb 2进行的 PTMScan® 研究和 Orbitrap LC-MS 分析中发现的潜在类 Akt 底物序列基序的比例。分析一项对 H3255 细胞的肽进行的实验可获得包含 Akt 底物样基序的 121 个非重复位点。主要基序用白色突出显示。包含磷酸化丝氨酸的比例为 72%,在 -5 和 -3 位点有精氨酸残基的比例为 65%。该抗体优先检测在 -5 和 -3 位点的精氨酸残基,但它还可在较小程度上检测在 -3 位点含有精氨酸残基的肽。

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基序标识显示抗体检测的位点周围的氨基酸分布。

产品包括 容量(计数)
PTMScan® Phospho-Akt Substrate Motif (RXRXXS*/T*) Immunoaffinity Beads 10 x 80 µl
PTMScan® IAP Buffer (10X) 9993 10 x 600 µl
PTMScan® Limited Use License 1 x 1 ml

产品使用信息

细胞在含尿素的缓冲液中进行裂解,细胞蛋白被蛋白酶消化,所产生的肽通过反相固相提取进行纯化。肽段随后使用接合 protein A agarose beads 的 PTMScan® Motif antibody 进行免疫亲和纯化。通过洗涤去除未结合的肽,捕获的包含 PTM 的肽用稀酸洗脱。在浓缩富集肽进行 LC-MS/MS 分析前,先在微探针尖端进行反相纯化使肽脱盐,并将肽与抗体分离。CST 建议用试剂盒中包含的 PTMScan® IAP Buffer #9993。该试剂盒还包含详细的实验步骤以及允许使用获专利的 PTMScan® 方法的有限使用许可。

保存

抗体微珠以含 50% 甘油的 IAP 缓冲液提供。储存于 -20°C 的温度下。请不要分装抗体。

产品说明

PTMScan® 技术采用 Cell Signaling Technology (CST) 的专有方法通过免疫沉淀实现肽富集,这种方法使用一种特殊微珠接合抗体以及液相色谱法 (LC)-质谱法 (MS/MS) 对细胞蛋白中的翻译后修饰 (PTM) 位点进行定量分析。这包括磷酸化 (PhosphoScan®)、泛素化 (UbiScan®)、乙酰化 (AcetylScan®) 和甲基化 (MethylScan®) 等等。PTMScan® 技术能让研究人员分离、鉴定以及定量大量翻译后修饰的细胞肽,具有高特异性和灵敏度,从而可以全面了解细胞和组织样品中的 PTM,对这些修饰位点发生于何处不会具有偏好性 (1)。如需了解更多有关 PTMScan® 蛋白质组服务的信息,请访问 www.cellsignal.com/common/content/content.jsp?id=ptmscan-services

背景

Akt 在介导关键细胞反应(包括细胞生长与存活、血管生成和转录调节)中发挥核心作用 (2-4)。它是重要激酶类别中的一员,即 Arg 定向激酶或 AGC 家族激酶,包括 cAMP-依赖性蛋白激酶 (PKA)、cGMP-依赖性蛋白激酶 (PKG)、蛋白激酶 C、Akt、p70 S6 激酶和 RSK。这些激酶具有相同的底物特异性,其特征为相对于磷酸化的 Ser 或 Thr 位点,具有在位置 -3 处 的 Arg (5,6)。Akt、p70 S6 激酶和 RSK 另外还对位点 -5(识别序列 RXRXXS/T)上的 Arg 具有特异性 (7)。在一项由 CST 位点发现组的科学家合著的近期磷蛋白质组研究 (8) 中,

使用 PhosphoScan 技术和 Phospho-Akt substrate antibodies 发现了能识别 RXRXXS/T 基序的 AGC 家族激酶的 300 多种下游底物。这些 CST™ 抗体可作为强大的工具来研究 Akt 和其他 Arg 定向激酶的磷酸化调控,也可用于高通量激酶药物发现。

在该检测中,PTMScan® (RXRXXS*/T*) Motif Antibody 微珠接合物用于使包含 (RXRXXS*/T*) 基序(S*= 磷酸化丝氨酸,T*= 磷酸化苏氨酸)的磷酸肽达到特异性富集。

  1. Rush, J. et al. (2005) Nat Biotechnol 23, 94-101.
  2. Marte, B.M. and Downward, J. (1997) Trends Biochem Sci 22, 355-8.
  3. Jiang, B.H. et al. (2000) Proc Natl Acad Sci USA 97, 1749-53.
  4. Scheid, M.P. and Woodgett, J.R. (2000) Curr Biol 10, R191-4.
  5. Montminy, M. (1997) Annu Rev Biochem 66, 807-22.
  6. Pearson, R.B. and Kemp, B.E. (1991) Methods Enzymol 200, 62-81.
  7. Manning, B.D. and Cantley, L.C. (2007) Cell 129, 1261-74.
  8. Moritz, A. et al. (2010) Sci Signal 3, ra64.
仅供研究使用。不得用于诊断流程。
AcetylScan 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
MethylScan 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
PTMScan 是 Cell Signaling Technology,Inc. 的商标
UbiScan 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
在某些方法中,使用 Cell Signaling Technology (CST) 基序抗体(例如,美国专利号 7,198,896 和 7,300,753)可能要求获得 CST 的许可证。关于学术许可条款信息,请您的技术转移办公室按照 CST_ip@cellsignal.com 联系 CST 法律部门。关于商业许可条款信息,请按照 ptmscan@cellsignal.com 联系 CST Pharma 服务部门。
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