| 产品包括 | 容量（计数） | ||||
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| PTMScan® Phospho-Akt Substrate Motif (RXRXXS*/T*) Immunoaffinity Beads | 10 x 80 µl | ||||
| PTMScan® IAP Buffer (10X) 9993 | 10 x 600 µl |
产品信息
细胞在含尿素的缓冲液中进行裂解，细胞蛋白被蛋白酶消化，所产生的肽通过反相固相提取进行纯化。肽段随后使用接合 protein A agarose beads 的 PTMScan® Motif antibody 进行免疫亲和纯化。通过洗涤去除未结合的肽，捕获的包含 PTM 的肽用稀酸洗脱。在浓缩富集肽进行 LC-MS/MS 分析前，先在微探针尖端进行反相纯化使肽脱盐，并将肽与抗体分离。CST 建议用试剂盒中包含的 PTMScan® IAP Buffer #9993。该试剂盒还包含详细的实验步骤以及允许使用获专利的 PTMScan® 方法的有限使用许可。
Akt 在介导关键细胞反应（包括细胞生长与存活、血管生成和转录调节）中发挥核心作用 (2-4)。它是重要激酶类别中的一员，即 Arg 定向激酶或 AGC 家族激酶，包括 cAMP-依赖性蛋白激酶 (PKA)、cGMP-依赖性蛋白激酶 (PKG)、蛋白激酶 C、Akt、p70 S6 激酶和 RSK。这些激酶具有相同的底物特异性，其特征为相对于磷酸化的 Ser 或 Thr 位点，具有在位置 -3 处 的 Arg (5,6)。Akt、p70 S6 激酶和 RSK 另外还对位点 -5（识别序列 RXRXXS/T）上的 Arg 具有特异性 (7)。在一项由 CST 位点发现组的科学家合著的近期磷蛋白质组研究 (8) 中，使用 PhosphoScan 技术和磷酸化 Akt 底物抗体发现了能识别 RXRXXS/T 基序的 AGC 家族激酶的 300 多种下游底物。这些 CST™ 抗体可作为强大的工具来研究 Akt 和其他 Arg 定向激酶的磷酸化调控，也可用于高通量激酶药物发现。在此检测中，PTMScan® (RXRXXS
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