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12724
Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit
一抗
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Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit #12724

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Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit: 图像 1

对 HT-29 细胞提取物 CUL4A 进行免疫沉淀。泳道 1 为 CUL4A Antibody，泳道 2 为 Normal Rabbit IgG #2729，泳道 3 为 10% input。使用 CUL4A Antibody 进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。

Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit: 图像 2

使用 CYLD (D6O5O) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。

Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit: 图像 3

使用 DDB-1 (D4C8) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。

Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit: 图像 4

使用 DDB-2 (D4C4) Rabbit mAb 对 Raji 细胞和 HL-60 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit: 图像 5

在有对照肽（左图）或抗原特异性肽（右图）的情况下，使用 RBX1 (D3J5I) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌细胞进行免疫组织化学分析。

Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit: 图像 6

使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（泳道 2）或 Skp1 (D3J4N) Rabbit mAb（泳道 3），对 293T 细胞提取物 Skp1 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 Skp1 (D3J4N) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。

Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit: 图像 7

使用 Skp2 (D3G5) XP® Rabbit mAb（绿色），对表达非靶向 shRNA（shNT；左图）或 Skp2（右图）的 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 DY-554 phalloidin（红色）标记（细胞系由哈佛大学医学院的 Wenyi Wei 博士惠赠）。

Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit: 图像 8

使用 β-TrCP (D12C8) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。

Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit: 图像 9

一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。

Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit: 图像 10

使用 CUL4A Antibody 对 COS 和 SK-MEL-28 细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。

Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit: 图像 11

使用 DDB-1 (D4C8) Rabbit mAb 对转染空载 (-) 或转染带有 Myc 标签、编码全长人 DDB-1 (+) 的 cDNA 表达载体的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit: 图像 12

使用 RBX1 (D3J5I) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠前列腺细胞进行免疫组织化学分析。

Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit: 图像 13

使用 Skp1 (D3J4N) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。

Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit: 图像 14

使用 Skp2 (D3G5) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌细胞进行免疫组织化学分析。

Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit: 图像 15

使用 RBX1 (D3J5I) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。

Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit: 图像 16

使用 Skp1 (D3J4N) Rabbit mAb 对转染空载 (-) 或转染带有 Myc/DDK 标签的全长人 Skp1 同工型 b (hSkp1-Myc/DDK; +) 表达载体的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit: 图像 17

使用 Skp2 (D3G5) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人淋巴瘤细胞进行免疫组织化学分析。

Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit: 图像 18

使用 Skp2 (D3G5) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人卵巢癌细胞进行免疫组织化学分析。

Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit: 图像 19

使用 Skp2 (D3G5) XP® Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。

Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit: 图像 20

使用 Skp2 (D3G5) XP® Rabbit mAb， 对转染空载 (-) 或转染能编码全长人 Skp2 的带有 Myc/DDK 标签的 cDNA 表达载体 (hSkp2-Myc/DDK, +) 的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit: 图像 21

使用 Skp2 (D3G5) XP® Rabbit mAb（上图）和 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图），对表达非靶向 shRNA (shNT) 或 shSkp2 的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

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产品说明

Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit 是一种高性价比产品，用于研究泛素 E3 连接酶复合体的多种蛋白组分。试剂盒包含足量的抗体，每种一抗可以进行 2 次蛋白质印迹实验。

特异性/敏感性

Ubiquitin E3 Ligase Complex Antibody Sampler Kit 中的每种抗体均可识别内源水平的各自靶标蛋白，但不与其他家族成员发生交叉反应。Skp2 (D3G5) XP® Rabbit mAb 预测会与 Skp2a 和 Skp2B 蛋白发生交叉反应。

来源/纯化

使用人 CYLD 蛋白特异性重组蛋白、人 DDB-1 蛋白的 Gly832 周围残基、人 DDB-2 蛋白的 Ala174 周围残基、人 RBX1 蛋白的羧基末端、人 Skp1 蛋白的羧基末端和人 Skp2 蛋白的氨基末端相对应的合成肽以及人 β-TrCP 蛋白特异性重组蛋白，对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人 CUL4A 蛋白的 Ser12 周围残基相对应的合成肽，对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。使用蛋白 A 和肽亲和力色谱对多克隆抗体进行纯化。

背景

泛素可通过泛素化过程共价连接许多细胞蛋白，在这个过程中，26S 蛋白酶体降解靶标蛋白。泛素首先通过与激活组分 E1 形成硫酯复合体而被激活。激活的泛素继而被转运到泛素载体蛋白 E2，然后从 E2 转运到泛素连接酶 E3，最后被转运到靶标蛋白赖氨酸残基的 ε-NH2 (1-3)。研究表明，激活的 E2 与 E3 瞬时结合，并且其解离是泛素化的一个关键步骤 (4)。

S 期激酶相关蛋白 1 (Skp1) 是 Skp1/CUL1/F-盒 (SCF) E3 泛素连接酶蛋白复合体的一个关键支架蛋白。多种 F 盒蛋白（如 β-TrCP、Skp2）通过它们的界定性保守结构域（包含 40 个氨基酸）介导与 Skp1 的相互作用，同时还介导与即将被泛素化的底物所进行的相互作用 (5)。RING 盒蛋白 1（RBX1 或 ROC1）是 SCF 复合体的另一个基本组分 (6)。RBX1 能介导 CUL1 类泛素化修饰，这可促进泛素从 E2 转移到底物来激活 SCF E3 连接酶 (7-9)。泛素连接需要 RBX1 的 RING 指形结构域 (10)。

Cullin-4 (CUL4) 是 Cullin 家族的一员，该家族包含相关的泛素连接酶 (11)。CUL4 的羧基末端结构域与 Rbx1 和 E2 酶相互作用，而 CUL4 的氨基末端结构域则与紫外线损伤的 DNA 结合蛋白 DDB1 的 BPB 结构域相互作用，从而形成 CUL4-DDB1 泛素连接酶复合体 (12)。损伤的 DNA 结合蛋白 (DDB) 由一个 127 kDa 亚基 (DDB-1) 和一个 48 kDa 亚基 (DDB-2) 组成，两个亚基有助于紫外线损伤的 DNA 结合蛋白复合体 (UV-DDB)的形成 (13-15)。UV-DDB 复合体与 CUL4A 和 RBX1 形成能够检测各自 DNA 损伤的 E3 泛素连接酶。该复合体使核苷酸切除修复通路的组分多泛素化 (16-18)。

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通路和蛋白

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