对促销感兴趣? | 点击此处 >>
14680
Tri-Methyl Lysine Motif [tme-K] (D1L1X) Rabbit mAb
一抗
单克隆抗体

Tri-Methyl Lysine Motif [tme-K] (D1L1X) Rabbit mAb #14680

引用 (4)
筛选器:
  1. WB
Western Blotting Image 1: Tri-Methyl Lysine Motif [tme-K] (D1L1X) Rabbit mAb

使用 Tri-Methyl Lysine Motif [tme-K] (D1L1X) Rabbit mAb(上图)和 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图),对未经处理 (-) 或经腺苷-2'、3'二醛(AdOx,100 μM,24 小时;+)处理的 HeLa 细胞进行蛋白质印迹分析。

Product Image 1: Tri-Methyl Lysine Motif [tme-K] (D1L1X) Rabbit mAb

使用肽 ELISA 检测 Tri-Methyl Lysine Motif [tme-K] (D1L1X) Rabbit mAb 的特异性。数据表明该抗体对三甲基化赖氨酸有特异性,不会与单甲基化、二甲基化的赖氨酸或精氨酸发生交叉反应。

购买 # 14680S
产品货号 规格 价格 库存
14680S
100 µl

我们的中国办事处关闭

为庆祝中国农历新年,我们的中国办事处将于2021年2月11日至2021年2月20日关闭。

感谢您的耐心等待。

支持数据

反应性 所有物种
敏感性 内源性
MW (kDa)
来源/亚型 兔 IgG

应用缩写:

  • W-Western
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Vir- Virus
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品使用信息

应用 稀释度
蛋白质印迹法 1:1000

保存

存储在 10 mM HEPES 钠 (pH 为 7.5 ),150 mM NaCl、100 µg/ml BSA,50 % 甘油中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。

实验步骤

打印

查看 > 折叠 >

蛋白质印迹法实验步骤

要进行蛋白质印迹法分析,在 4°C 下,将膜与稀释的一抗放在 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中一起孵育,轻晃孵育一整夜。

注意:请参阅一抗产品网页了解建议使用的抗体稀释度。

A. 溶液和试剂

从样品制备至检测,蛋白质印迹法需要用到的试剂在一个套装试剂盒中提供:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 20X 磷酸盐缓冲液 (PBS):(#9808) 要制备 1 L 1X PBS:加入 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 并混合。
  2. 10 X Tris 盐缓冲液 (TBS):(#12498) 要制备 1 L 1X TBS:加入 100 ml 10X 至 900 ml dH2O 并混合。
  3. 1X SDS 上样缓冲液:Blue Loading Pack (#7722) 或 Red Loading Pack (#7723) 通过添加 1/10 体积的 30X DTT 至 1 体积的 3X SDS 上样缓冲液,以制备新鲜的 3X 还原性上样缓冲液。用 dH2O 将其稀释至 1X。
  4. 10X Tris-Glycine SDS 电泳缓冲液:(#4050) 要制备 1 L 1X 电泳缓冲液:添加 100 ml 10X 电泳缓冲液至 900 ml dH2O 中并混合。
  5. 10X Tris-Glycine 转移缓冲液:(#12539) 要制备 1 L 1X 转移缓冲液:将 100 ml 10X 转移缓冲液添加至 200 ml 甲醇 + 700 ml dH2O 中,并混合。
  6. 含有 Tween® 20 (TBST) 的 10 X Tris 盐缓冲液:(#9997) 要制备 1 L 1X TBST: 将 100 ml 10X TBST 添加至 900 ml dH2O 中并混合。
  7. 脱脂奶粉:(#9999)。
  8. 封闭缓冲液:含 5% w/v 脱脂奶粉的 1X TBST;要制备 150 ml,将 7.5 g 脱脂奶粉添加至 150 ml 1X TBST 中并充分混匀。
  9. 洗涤缓冲液:(#9997) 1X TBST。
  10. 牛血清白蛋白 (BSA): (#9998)。
  11. 一抗稀释缓冲液:含 5% BSA 的 1X TBST;要制备 20 ml,添加 1.0 g BSA 至 20 ml 1X TBST,然后充分混匀。
  12. Biotinylated Protein Ladder Detection Pack:(#7727)。
  13. Blue Prestained Protein Marker, Broad Range (11-250 kDa): (#59329)。
  14. 印迹膜:(#12369) 本实验步骤针对硝酸纤维素膜进行了优化。通常推荐 0.2 µm 孔径。
  15. HRP 偶联二抗:Anti-rabbit IgG、HRP-linked Antibody (#7074)。
  16. 检测试剂:SignalFire™ ECL Reagent (#6883)。

B. 蛋白质印迹

制备样品的常规流程。

  1. 添加含有调节因子的新鲜培养基,使其对细胞进行处理一段时间。
  2. 从培养物中吸出培养基;用 1X PBS 洗涤细胞;吸出。
  3. 加入 1X SDS 样品缓冲液(6 孔板每孔 100 µl 或 10 cm 直径的平板 500 µl)来裂解细胞。立即从板上刮下细胞并将提取物转移至微量离心管。置于冰上。
  4. 超声处理 10–15 秒以完成细胞裂解并剪切 DNA(以降低样品粘度)。
  5. 取 20 µl 样品,在 95–100°C 下加热 5 分钟;放在冰上冷却。
  6. 微量离心机内离心 5 分钟。
  7. 上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。

    注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。

  8. 电转至硝酸纤维素膜 (#12369)。

C. 膜封闭和抗体孵育

注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。

I. 膜封闭

  1. (可选)转移之后,在室温下用 25 ml TBS 将硝酸纤维素膜洗涤 5 分钟。
  2. 将膜置于 25 ml 封闭缓冲液中,在室温下孵育 1 小时。
  3. 用 15ml TBST 洗涤三次,每次 5 分钟。

II. 一抗孵育

  1. 将膜和一抗(按照产品网页中建议的适当稀释度和稀释液)置于 10 ml 一抗稀释缓冲液中在 4°C 下孵育过夜并不时轻轻晃动。
  2. 用 15ml TBST 洗涤三次,每次 5 分钟。
  3. 使用 10 ml 封闭缓冲液稀释 Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody (#7074,按 1:2000 的比例)和 anti-biotin, HRP-linked Antibody (#7075,按 1:1000–1:3000 的比例)用以检测生物素化蛋白标准品。将膜与稀释液一起孵育,在室温下轻轻摇晃孵育 1 小时。
  4. 用 15ml TBST 洗涤三次,每次 5 分钟。
  5. 继续进行检测(D 部分)。

D. 蛋白质检测

使用说明:

  1. 在 TBST 中清洗与膜结合的 HRP (Antibody Conjugate) 三次,持续 5 分钟。
  2. 通过稀释一部分 2X 试剂 A 和一部分 2X 试剂 B(例如:要制备 10 ml,则添加 5 ml 试剂 A 和 5 ml 试剂 B),来制备 1X SignalFire™ ECL Reagent (#6883)。混匀。
  3. 将底物与膜一起孵育 1 分钟,倒掉多余溶液(膜将保持湿润),然后包裹在塑料中并在 X 线胶片下曝光。

* 避免反复接触皮肤。

发布​于 2005 年 6 月 

修订于 2020 年 6 月

实验步骤编号:10

特异性/敏感性

Tri-Methyl Lysine Motif [tme-K] (D1L1X) Rabbit mAb 可识别内源水平的仅在赖氨酸残基位点被三甲基化的蛋白。该抗体不会与内源水平的含单甲基化或二甲基化赖氨酸或精氨酸残基的蛋白发生交叉反应。

物种反应性:

预期的所有物种

基于 100% 序列同源性预测发生反应的物种:

预期的所有物种

来源/纯化

使用包含三甲基化赖氨酸的合成肽文库对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

赖氨酸残基的甲基化作用是一种常见的调控翻译后修饰 (PTM),会导致 ε 氨基组赖氨酸被蛋白赖氨酸甲基转移酶 (PKMT) 单甲基化、二甲基化或三甲基化。这两种 PKMT 组是根据结构和催化反应机制确定的;I 类甲基转移酶或七种 β 链酶以及含有 V 类甲基转移酶的 SET 结构域。两者均使用甲基供体 S 腺苷基 L 蛋氨酸实现组蛋白和非组蛋白甲基化。I 类甲基转移酶可使氨基酸、DNA 和 RNA 甲基化 (1,2)。六种甲基赖氨酸结合蛋白家族按结合域划分为:MBT、PHD 结构域、 Tudor、PWWP、WD40 复制和染色质域。许多蛋白会根据基于赖氨酸甲基化状态表现出不同的结合性 (3)。KDM1 亚科赖氨酸脱甲基酶可催化单甲基化和二甲基化赖氨酸脱甲基化,同时戊邻酮二酸盐依赖型 JmjC (KDM2-7) 亚科酶也可修饰三甲基化赖氨酸残基 (4)。

大多数 PKMT 底物均为组蛋白和转录因子,重点凸显出赖氨酸甲基化在调控染色质结构和基因表达中发挥的重要作用。G9A/GLP 可使组蛋白 H3 的 Lys9 单或二甲基化,SETDB1 可使组蛋白 H3 Lys9 三甲基化,以激活转录。相同残基的 JHDM3A 介导的脱甲基化作用可生成单甲基化 Lys9,并抑制基因转录 (5)。抑癌基因 p53 可由至少四个位点的甲基化作用调控。可通过 SMYD2 Lys370 P53 单甲基化抑制 p53 介导的转录;相同残基处的二甲基化可通过阻碍 53BP1 结合来进一步抑制 p53。在 Lys382 位点二甲基化可抑制 DNA 损伤后的 P53 泛素化。由 SET8 在 Lys382 位点单甲基化,可抑制 p53 转录活性,同时在 Lys372 位点 SET7/9 单甲基化可抑制在 Lys370 位点的 SMYD2 甲基化作用,使 p53 蛋白保持稳定。G9A/GLP 在 Lys373 位点二甲基化,可抑制 p53 介导的凋亡,并且与 p21 启动子处的组蛋白 H3 Lys9 三甲基化相关 (1,6)。PKMT 过表达与多种人类癌症相关,这对药物研发中靶定蛋白赖氨酸甲基转移酶发挥了重要作用。

  1. Lanouette, S. et al. (2014) Mol Syst Biol 10, 724.
  2. Clarke, S.G. (2013) Trends Biochem Sci 38, 243-52.
  3. Herold, J.M. et al. (2011) Curr Chem Genomics 5, 51-61.
  4. Thinnes, C.C. et al. (2014) Biochim Biophys Acta 1839, 1416-32.
  5. Klose, R.J. et al. (2006) Nature 442, 312-6.
  6. Yost, J.M. et al. (2011) Curr Chem Genomics 5, 72-84.

限制使用

除非 CST 的合法授书代表以书面形式书行明确同意,否书以下条款适用于 CST、其关书方或分书商提供的书品。 任何书充本条款或与本条款不同的客书条款和条件,除非书 CST 的合法授书代表以书面形式书独接受, 否书均被拒书,并且无效。

专品专有“专供研究使用”的专专或专似的专专声明, 且未专得美国食品和专品管理局或其他外国或国内专管机专专专任何用途的批准、准专或专可。客专不得将任何专品用于任何专断或治专目的, 或以任何不符合专专声明的方式使用专品。CST 专售或专可的专品提供专作专最专用专的客专,且专用于研专用途。将专品用于专断、专防或治专目的, 或专专售(专独或作专专成)或其他商专目的而专专专品,均需要 CST 的专独专可。客专:(a) 不得专独或与其他材料专合向任何第三方出售、专可、 出借、捐专或以其他方式专专或提供任何专品,或使用专品制造任何商专专品,(b) 不得复制、修改、逆向工程、反专专、 反专专专品或以其他方式专专专专专品的基专专专或技专,或使用专品开专任何与 CST 的专品或服专专争的专品或服专, (c) 不得更改或专除专品上的任何商专、商品名称、徽专、专利或版专声明或专专,(d) 只能根据 CST 的专品专售条款和任何适用文档使用专品, (e) 专遵守客专与专品一起使用的任何第三方专品或服专的任何专可、服专条款或专似专专

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
XP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。
Tween 是 ICI Americas, Inc. 的注册商标。
在某些方法中,使用 Cell Signaling Technology (CST) 基序抗体(例如,美国专利号 7,198,896 和 7,300,753)可能要求获得 CST 的许可证。关于学术许可条款信息,请您的技术转移办公室按照 CST_ip@cellsignal.com 联系 CST 法律部门。关于商业许可条款信息,请按照 ptmscan@cellsignal.com 联系 CST Pharma 服务部门。
Powered by Translations.com GlobalLink OneLink SoftwarePowered By OneLink