反应性 | 所有物种 |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | |
来源/亚型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
存储在 10 mM HEPES 钠 (pH 为 7.5 ),150 mM NaCl、100 µg/ml BSA,50 % 甘油中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。
要进行蛋白质印迹法分析,在 4°C 下,将膜与稀释的一抗放在 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中一起孵育,轻晃孵育一整夜。
注意:请参阅一抗产品网页了解建议使用的抗体稀释度。
从样品制备至检测,蛋白质印迹法需要用到的试剂在一个套装试剂盒中提供:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布于 2005 年 6 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
Tri-Methyl Lysine Motif [tme-K] (D1L1X) Rabbit mAb 可识别内源水平的仅在赖氨酸残基位点被三甲基化的蛋白。该抗体不会与内源水平的含单甲基化或二甲基化赖氨酸或精氨酸残基的蛋白发生交叉反应。
预期的所有物种
预期的所有物种
使用包含三甲基化赖氨酸的合成肽文库对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
赖氨酸残基的甲基化作用是一种常见的调控翻译后修饰 (PTM),会导致 ε 氨基组赖氨酸被蛋白赖氨酸甲基转移酶 (PKMT) 单甲基化、二甲基化或三甲基化。这两种 PKMT 组是根据结构和催化反应机制确定的;I 类甲基转移酶或七种 β 链酶以及含有 V 类甲基转移酶的 SET 结构域。两者均使用甲基供体 S 腺苷基 L 蛋氨酸实现组蛋白和非组蛋白甲基化。I 类甲基转移酶可使氨基酸、DNA 和 RNA 甲基化 (1,2)。六种甲基赖氨酸结合蛋白家族按结合域划分为:MBT、PHD 结构域、 Tudor、PWWP、WD40 复制和染色质域。许多蛋白会根据基于赖氨酸甲基化状态表现出不同的结合性 (3)。KDM1 亚科赖氨酸脱甲基酶可催化单甲基化和二甲基化赖氨酸脱甲基化,同时戊邻酮二酸盐依赖型 JmjC (KDM2-7) 亚科酶也可修饰三甲基化赖氨酸残基 (4)。
大多数 PKMT 底物均为组蛋白和转录因子,重点凸显出赖氨酸甲基化在调控染色质结构和基因表达中发挥的重要作用。G9A/GLP 可使组蛋白 H3 的 Lys9 单或二甲基化,SETDB1 可使组蛋白 H3 Lys9 三甲基化,以激活转录。相同残基的 JHDM3A 介导的脱甲基化作用可生成单甲基化 Lys9,并抑制基因转录 (5)。抑癌基因 p53 可由至少四个位点的甲基化作用调控。可通过 SMYD2 Lys370 P53 单甲基化抑制 p53 介导的转录;相同残基处的二甲基化可通过阻碍 53BP1 结合来进一步抑制 p53。在 Lys382 位点二甲基化可抑制 DNA 损伤后的 P53 泛素化。由 SET8 在 Lys382 位点单甲基化,可抑制 p53 转录活性,同时在 Lys372 位点 SET7/9 单甲基化可抑制在 Lys370 位点的 SMYD2 甲基化作用,使 p53 蛋白保持稳定。G9A/GLP 在 Lys373 位点二甲基化,可抑制 p53 介导的凋亡,并且与 p21 启动子处的组蛋白 H3 Lys9 三甲基化相关 (1,6)。PKMT 过表达与多种人类癌症相关,这对药物研发中靶定蛋白赖氨酸甲基转移酶发挥了重要作用。
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