试剂盒使用信息
实验步骤
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3709: 蛋白印迹实验
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5339: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法(磁珠), 免疫荧光法, 流式细胞术, ChIP(磁珠)
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7074: 蛋白印迹实验
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8685: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法(琼脂糖), 免疫荧光法, 流式细胞术, ChIP(磁珠), ChIP-seq
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8828: 蛋白印迹实验
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18338: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法(琼脂糖), 免疫荧光法, 流式细胞术, ChIP(磁珠)
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19245: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法(磁珠), 免疫组织化学 (Leica® Bond™), 免疫组织化学(石蜡), 免疫荧光法
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41896: 蛋白印迹实验
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47066: 蛋白印迹实验, 免疫组织化学(石蜡), 免疫荧光法
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91144: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法(琼脂糖)
产品说明
TGF-β 纤维化通路抗体小包装组合提供了一种经济的方法,用于研究细胞或组织中 TGF-β/ SMAD2/3 信号转导通路的激活,从而促使纤维化基因的表达,包括活化纤维细胞中 α-平滑肌肌动蛋白的表达,以及胶原 1A1、Col11A1 和 YKL-40 的上调。该试剂盒包含的抗体足以针对每种一抗进行至少两次蛋白质印迹实验。
特异性/灵敏度
α-Smooth Muscle Actin (D4K9N) XP® Rabbit mAb 可识别内源水平的总 α-平滑肌蛋白。COL1A1 (E8I9Z) Rabbit mAb 可检测 COL1A1 总蛋白的内源水平。Smad2/3 (D7G7) XP® Rabbit mAb 可识别内源水平的 Smad2/3 总蛋白。Smad2 (D43B4) XP® Rabbit mAb 可检测内源水平的 Smad2 总蛋白。该抗体不会与 Smad3 发生交叉反应。Phospho-Smad2 (Ser465/467) (E8F3R) Rabbit mAb 可识别在 Ser465 和 Ser467 处被磷酸化的 Smad2 蛋白的内源水平。YKL-40 (E2L1M) 兔单克隆抗体可检测 YKL-40 总蛋白的内源水平。Phospho-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) Rabbit mAb 可识别内源水平的在 Ser465 和 Ser467 位点被磷酸化的 Smad2 蛋白。该抗体还能识别仅在 Ser422 位点被磷酸化或在 Ser423 和 Ser425 位点同时被磷酸化的内源水平的 Smad3 蛋白。TGF-β (56E4) Rabbit mAb 可识别重组 TGF-β1 与 TGF-β3 蛋白。该抗体也可检测内源水平的 TGF-β 前体蛋白。TGF-β Receptor II (E5M6F) Rabbit mAb 可识别 TGF-β 受体 II 总蛋白的内源水平。该抗体不与 TGF-β 受体 I 蛋白发生交叉反应。
来源/纯化
使用与人 α-平滑肌肌动蛋白中氨基末端周围的残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人 COL1A1 蛋白 Phe1197 周围残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人 Smad2/3 蛋白中 His198 周围残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与小鼠 Smad2 蛋白的氨基末端附近残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人 Smad2 蛋白中 Ser465/467 周围残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人源 YKL-40 蛋白中氨基末端周围的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人 Smad2 蛋白中 Ser465/467 周围残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人 TGF-β1 蛋白的羧基末端区域残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用人 TGF-β 受体 II 蛋白氨基末端特异性重组蛋白对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
背景
转化生长因子-β (TGF-β) 超家族成员为细胞增殖、分化、发育模式决定与形态发生,以及疾病病理发生过程的重要调节分子 (1-4)。在纤维化的背景下,SMAD2/3 的 TGF-β 信号转导 是促进纤维化程序的最大驱动因素(5)。
TGF-B 通过三种细胞表面受体引发信号转导:I 型(RI)、II 型(RII)和 III 型(RIII)。为了响应配体结合,II 型受体与 I 型受体形成稳定的异二聚体复合体,以便于 I 型受体激酶进行磷酸化和激活 。活化型 I 受体与 SMAD2/3 有关,并且可在保守的羧基末端 SSXS 模序磷酸化它们。磷酸化的 SMAD 从受体上分离,并产生带 co-Smad (Smad4) 的异二聚体复合体,使得复合体移位至胞核。进入胞核后,磷酸化的 SMAD2/3 靶向 DNA 结合蛋白的一个子集,以调节转录程序(6-8)。
在纤维化的背景下,SMAD2/3 激活会上调促纤维化基因的表达,例如
COL1A1 和其他修饰组织细胞外基质的 ECM 调节剂。(9). TGF-β/ Smad2/3 信号转导还诱导纤维细胞中的 α-Smooth 肌动蛋白表达,从而导致这些细胞转化成肌成纤维细胞(10)。肌成纤维细胞进一步修改 ECM,从而导致胶原蛋白和其他 ECM 组分积聚过多。组织受伤可吸引巨噬细胞和其他免疫细胞,并且纤维化组织很快成为炎症部位(11)。在这种促纤维化、促炎性的环境中,会分泌 YKL-40(也称为 Chitinase-3-like protein 1 (CHI3L1))。YKL-40 是一种促炎性糖蛋白,也有助于纤维化的进展(12)。胶原蛋白含量、α-平滑肌肌动蛋白的测定以及 YKL-40 的释放可预测纤维化活性。
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Massagué, J. et al. (2000) Cell 103, 295-309.
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通路与蛋白质
探索与本产品相关的通路 + 蛋白质。
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