反应性 | H M |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
免疫荧光法(冰冻) | 1:800 - 1:3200 |
免疫荧光法(免疫细胞化学) | 1:3200 - 1:12800 |
流式细胞术(固定/通透) | 1:1600 |
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
建议使用偶联荧光素的抗兔二抗:
注意:首次使用一抗或荧光物质标记的二抗时,用滴定法检测抗体,以确定哪种稀释度会在最低的背景下为您的样品产生最强的特定信号。
切片用 1X PBS 中稀释的 4% 甲醛浸没。
注意:甲醛有毒性,仅可在通风橱中使用。
注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。
发布时间 2006 年 11 月
修订时间 2016 年 7 月
实验步骤编号:151
注意:用反渗透去离子 (RODI) 水或等效净化水制备溶液。
建议使用偶联荧光素的抗兔二抗:
注意:细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。
注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。
发布时间 2006 年 11 月
修订时间 2010 年 12 月
实验步骤编号:32
本实验步骤中所需的所有试剂可与我们的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 一起高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。
注:固定前,贴壁细胞或组织应予以解离并处于单细胞悬液中。
注:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。
注:如果使用全血,则在固定前裂解红细胞并通过离心来洗涤。
注:如果表位被甲醛和/或甲醇破坏,可以在固定前添加靶向 CD 标记物或其他胞外蛋白质的抗体。在固定和透化过程期间,这类抗体将保持与目的靶标结合。但注意,某些荧光团(包括 PE 和 APC)会被甲醇损坏,因此不应在透化前添加。如果您不确定,请进行小规模实验。
注:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。
发布时间 2009 年 7 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:404
人, 小鼠
单克隆抗体通过用人 STING 重组蛋白免疫接种动物来产生并且与羧基末端附近的表位反应。
干扰素基因刺激蛋白 (STING, TMEM173, MITA) 是一种跨膜接头蛋白,它是细胞病原细胞浆 DNA 的天然免疫应答的一个关键组分 (1,2)。STING 是一种被发现主要在内质网中普遍表达的蛋白 (1)。在细胞浆 DNA 的刺激下,酶 cGAMP 合成酶 (cGAS) 会产生第二信使环-GMP-AMP (cGAMP) (3,4)。cGAMP 结合并激活 STING (3,4)。此外,通过 DDX41 和 IFI16 等核酸感应蛋白检测细胞浆 DNA 会导致 STING 激活 (5,6)。激活后,STING 与 TBK1 转位至核周内体,并在 Ser366(小鼠内为 Ser365)位点被 ULK1 磷酸化(7, 8)。TBK1 激酶磷酸化并激活 IRF-3 和 NF-κB,从而诱导 I 型干扰素和其他免疫应答基因 (1,2,7)。
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