产品说明
SARS-CoV-2 Virus-Host Interaction Antibody Sampler Kit 提供了一种经济的方法来检测与 SARS-CoV-2 感染人类宿主细胞有关的关键病毒和宿主蛋白。该试剂盒包含的抗体足以使用每种一抗进行两次蛋白印迹实验。
特异性/灵敏度
SARS-CoV-2 Virus-Host Interaction Antibody Sampler Kit 中的每种抗体都能检测其靶标蛋白的内源水平。对于病毒蛋白,内源表达定义为感染 SARS-CoV-2 病毒后宿主细胞中存在的靶标蛋白水平。SARS-CoV-2 Spike Protein (S1) (E5S3V) Rabbit mAb 和 SARS-CoV-2 Spike Protein (RBD) (E7B3E) Rabbit mAb 可检测全长 SARS-CoV-2 刺突蛋白和由弗林蛋白酶裂解产生的 S1 片段(包含受体结合域)。Cleaved SARS-CoV-2 Spike Protein (Ser686) Antibody 仅在 S1/S2 连接处裂解后才可特异性地检测 SARS-CoV-2 刺突蛋白的 S2 片段。针对 SARS-CoV-2 蛋白的抗体无法检测到来自 SARS 或 MERS 冠状病毒的直系同源刺突蛋白。Neuropilin-1 (D62C6) Rabbit mAb 可检测神经纤毛蛋白 1 总蛋白的内源水平,也可检测未知来源的 80 kDa 蛋白。
来源/纯化
使用与人 EMMPRIN 蛋白的 Ala254、人 ACE2 蛋白的 Asp201 和 SARS-CoV-2 刺突蛋白的 Ser459 周围残基对应的合成肽、与 SARS-CoV-2 的 S1 结构域相对应的重组蛋白 以及与小鼠神经纤毛蛋白 1 蛋白的残基相对应的 GST 融合蛋白对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与 SARS-CoV-2 刺突蛋白 S2 结构域的氨基末端 (Ser668)、人组织蛋白酶 L 的 Pro229 和人弗林蛋白酶的 Ala237 相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。
背景
COVID-19 大流行的病因是一种新型的高致病性冠状病毒,称为 SARS-CoV-2(严重急性呼吸系统综合症冠状病毒 2)。SARS-CoV-2 是冠状病毒家族的成员(1)。SARS-CoV-2 病毒粒子由四种关键结构蛋白组成:刺突蛋白(S)、包膜蛋白(E)、膜蛋白(M)和核衣壳蛋白( N)(2)。冠状病毒刺突蛋白是 I 类融合蛋白,具有胞外域、跨膜域和胞内尾巴(3,4)。高度糖基化的胞外域从病毒包膜表面突出,并促进与宿主细胞质膜的附着和融合。胞外域可以进一步细分为受体结合域 (RBD) S1 和膜融合 (S2) 亚基,它们在宿主蛋白酶的蛋白水解作用下产生。S1 和 S2 亚基在切割后重新关联,组装成冠状同源三聚体 (2,4)。
SARS-CoV-2 刺突蛋白在 S1/S2 连接处包含一个新的四基“弗林蛋白酶裂解位点”(FCS)。研究表明该位点被前蛋白转化酶(例如弗林蛋白酶)或溶酶体蛋白酶(例如组织蛋白酶 L)(5,6)切割。S1/S2 切割引发刺突蛋白的构象变化,将三聚体 RBD 的元素定位在暴露的“向上”位置,使其与宿主受体蛋白相互作用。切割可发生在病毒生命周期的多个阶段,包括病毒包装期间,或完整病毒粒子与宿主细胞表面接触时。这种新的切割事件被认为有助于 SARS-CoV-2 病毒的高感染率 (7)。
SARS-CoV-2 病毒已被证明利用血管紧张素转换酶 2 (ACE2) 蛋白作为其进入细胞的主要受体 (8)。然而,研究表明其他细胞表面蛋白可能作为 SARS-CoV-2 的受体或共同受体。这些包括神经纤毛蛋白-1 (NPN1)(一种单程跨膜受体,可作为信号素受体复合物的一部分),以及血管内皮生长因子 (VEGF) 受体 (9) 和 Basigin/EMMPRIN (CD147) (一种免疫球蛋白超家族的 I 型整合膜受体)(10) 。
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Zhou, P. et al. (2020) Nature 579, 270-273.
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Tortorici, M.A. and Veesler, D. (2019) Adv Virus Res 105, 93-116.
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Li, F. et al. (2006) J Virol 80, 6794-800.
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Coutard, B. et al. (2020) Antiviral Res 176, 104742.
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Jaimes, J.A. et al. (2020) iScience 23, 101212.
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Hasan, A. et al. (2021) J Biomol Struct Dyn 39, 3025-3033.
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Shang, J. et al. (2020) Nature 581, 221-224.
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Cantuti-Castelvetri, L. et al. (2020) Science 370, 856-860.
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Wang, K. et al. (2020) Signal Transduct Target Ther 5, 283.
通路与蛋白质
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