反应性 | H |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | |
来源/亚型 | Mouse IgG2a kappa |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
IHC-Leica® Bond™ | 1:800 - 1:3200 |
免疫组织化学(石蜡) | 1:400 - 1:1600 |
保存在含 〜1% BSA和少于 0.1% 叠氮化钠的 PBS 缓冲液中。保存在 4°C 时,可保持稳定 12 个月。不要分装抗体。
注:请参阅产品数据表或产品网页,了解合适的抗体稀释度^。
步骤 | 试剂 | 时间/温度 | |
---|---|---|---|
1 | 脱蜡 | BOND™ Dewax Solution、100% 乙醇、BOND™ Wash Solution | 预编程的 Leica® BOND™ |
2 | 抗原修复 | BOND™ Epitope Retrieval ER2 Solution | 20 分钟,100˚C | 实验步骤:用 ER2 进行 HIER 20 分钟 |
3 | 过氧化物封闭液 | Polymer Refine Detection Kit Peroxide Block* | 5 分钟 |
洗涤 | BOND™ Wash Solution | 3x 0:00 分钟 | |
4 | 蛋白封闭液(可选) | #5425 NGS 或 #15019 Animal-Free Blocking Solution | 20 分钟 |
5 | 一抗^ | 用 #8112 SignalStain® Antibody Diluent 稀释 | 30 分钟 |
洗涤 | BOND™ Wash Solution | 3x 2:00 分钟 | |
6 | Post Primary Mouse Linker | Polymer Refine Detection Kit Post Primary* | 10 分钟 |
洗涤 | BOND™ Wash Solution | 3x 2:00 分钟 | |
7 | 二次检测 | Polymer Refine Detection Kit Polymer* | 10 分钟 |
洗涤 | BOND™ Wash Solution/Deionized Water | 定制(参见下文) | |
8a | 可视化 | Polymer Refine Detection Kit Mixed DAB Refine* | 0:00 分钟 |
8b | 可视化 | Polymer Refine Detection Kit Mixed DAB Refine* | 10 分钟 |
洗涤 | 去离子水 | 3x 0:00 分钟 | |
9 | 复染 | Polymer Refine Detection Kit Hematoxylin* | 5 分钟 |
洗涤 | 去离子水 | 0:00 分钟 | |
洗涤 | BOND™ Wash Solution | 0:00 分钟 | |
洗涤 | 去离子水 | 0:00 分钟 | |
10 | 脱水(离线): | ||
在 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 秒。 | |||
在 100% 乙醇中重复孵育 2 次,每次 10 秒。 | |||
在二甲苯中重复孵育 2 次,每次 10 秒。 | |||
11 | 用盖玻片和 #14177 SignalStain® Mounting Medium 封片。 | ||
可选订制洗涤: | BOND™ Wash Solution | 2:00 | |
BOND™ Wash Solution | 分配器类型:打开 0:00 | ||
BOND™ Wash Solution | 2:00 | ||
BOND™ Wash Solution | 分配器类型:打开 0:00 | ||
BOND™ Wash Solution | 0:00 | ||
去离子水 | 0:00 |
*BOND™ Polymer Refine Detection Kit(货号:DS9800)中所含的试剂
LEICA® 是 Leica Microsystems IR GmbH 的注册商标。
BOND™ 是 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 的商标。CST 和 Leica Microsystems IR GmbH 或 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 之间没有附属或赞助关系。
发布于 2018 年 8 月
修订于 2018 年 9 月
实验步骤编号:1445
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
注意:在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。
对于柠檬酸盐:将切片浸入 1 X 柠檬酸盐修复液,再放入微波炉中加热直至沸腾;继续保持亚沸腾温度 10 分钟 (95°-98°C)。在实验台上冷却切片 30 分钟。
推荐的 检测试剂 |
SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Mouse) #8125 | SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (AP, Mouse) #31926 |
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兼容的 色原 |
SignalStain® DAB Substrate Kit #8059 | SignalStain® Vibrant Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit #76713 |
SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit #96632 |
注意:使用本实验步骤中未指定的检测试剂可能需要进一步优化一抗,考虑到检测试剂的不同灵敏度。
发布于 2010 年 2 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:280
S100A1 (4C4.9) Mouse mAb 可识别 S100A1 蛋白的内源水平。
人
使用纯化牛脑的 S100A1 蛋白对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
虽然 S100 蛋白的尺寸相对较小 (8-12 kDa),结构简单,但可调节细胞生长和运动、细胞周期进程、转录和分化等各种细胞进程。 到目前为止,已发现了 25 个成员,包括 S100A1-S100A18、毛透明蛋白、聚丝蛋白、repetin、S100P 和 S100Z,使得它成为 EF 手形钙结合蛋白家族中最大的一个亚家族。有趣的是,14 S100 基因聚集在一个基因组不稳定的区域人染色体 1q21 上。研究表明,S100 蛋白异常表达与癌症进展显著相关。S100 蛋白主要介导各种组织类型的免疫应答,同时还与神经元发育有关 (1-4)。
每种 S100 单体有两个 EF 手形基序,可结合多达两个钙分子(在某些情况下,可结合其他二价阳离子)。有结构性证据表明,S100 蛋白可形成反向平行同源或异源二聚体,这些二聚体可以钙依赖(有时不依赖钙)的方式协调结合伴侣亲和力。虽然在结构和功能上相似,但个别组织分布受限的成员位于特定细胞区室,并且有唯一的蛋白结合伴侣,表明每个成员在不同的信号转导通路中发挥特定作用。除了胞内作用,某些 S100 蛋白经证实可作为胞外配体的受体,或被分泌出来并且有类细胞因子活性 (1-4)。
S100A1 在心肌和骨骼肌中高表达,并在调节钙依赖的收缩性方面发挥主要作用 (5,6)。S100A1 和钙调素可结合并以不同方式调控兰尼碱受体 (RyR),从而调节骨骼肌和心肌功能 (7)。除了 RyR(RyR1 和 RyR2),S100A1 经证实还会与钙依赖性心肌信号转导级联的其他组分相互作用,包括 SERCA2a 和受磷蛋白 (8)。动物模型研究明确证实,S100A1 在心衰的发生中发挥重要作用 (1)。在非心肌组织中,S100A1 经证实可通过直接相互作用或调节每个通路中的支架和信号转导组分,从而调节细胞骨架信号转导、神经递质释放、酶活性、转录因子和其他钙结合蛋白 (4)。
探索与本品相关的通路 + 蛋白。
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