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64095
S100A1 (4C4.9) Mouse mAb
一抗
单克隆抗体
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S100A1 (4C4.9) Mouse mAb #64095

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筛选器：
  1. IHC
Immunohistochemistry Image 1: S100A1 (4C4.9) Mouse mAb

在 Leica® BOND™ Rx 上使用 S100A1 (4C4.9) Mouse mAb 对石蜡包埋的人黑素瘤细胞进行免疫组织化学分析。

Immunohistochemistry Image 1: S100A1 (4C4.9) Mouse mAb

使用 S100A1 (4C4.9) Mouse mAb 对石蜡包埋的正常人脑进行免疫组织化学分析。

Immunohistochemistry Image 2: S100A1 (4C4.9) Mouse mAb

使用 S100A1 (4C4.9) Mouse mAb 对石蜡包埋的正常人乳腺进行免疫组织化学分析。

Immunohistochemistry Image 3: S100A1 (4C4.9) Mouse mAb

使用 S100A1 (4C4.9) Mouse mAb 对石蜡包埋的人黑色素瘤进行免疫组织化学分析。注意：使用 SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit #96632。

Immunohistochemistry Image 4: S100A1 (4C4.9) Mouse mAb

以浓度匹配的 Mouse (E5Y6Q) mAb IgG2a Isotype Control #61656（右图）作为对照，使用 S100A1 (4C4.9) Mouse mAb（左图）对石蜡包埋的人卵巢颗粒细胞瘤进行免疫组织化学分析。

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64095S		 100 µl

定制制剂

支持数据

反应性 H
敏感性 内源性
MW (kDa)
来源/亚型 Mouse IgG2a kappa

应用缩写：

  • W-Western
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写：

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品使用信息

应用 稀释度
IHC-Leica® Bond™ 1:800 - 1:3200
免疫组织化学（石蜡） 1:400 - 1:1600

保存

保存在含 〜1％ BSA和少于 0.1％ 叠氮化钠的 PBS 缓冲液中。保存在 4°C 时，可保持稳定 12 个月。不要分装抗体。‭

实验步骤

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免疫组织化学法 (Leica®BOND™)

注：请参阅产品数据表或产品网页，了解合适的抗体稀释度^。

  步骤 试剂 时间/温度
1 脱蜡 BOND™ Dewax Solution、100% 乙醇、BOND™ Wash Solution 预编程的 Leica® BOND™ 
2 抗原修复  BOND™ Epitope Retrieval ER2 Solution 20 分钟，100˚C | 实验步骤：用 ER2 进行 HIER 20 分钟
3 过氧化物封闭液 Polymer Refine Detection Kit Peroxide Block* 5 分钟
  洗涤 BOND™ Wash Solution  3x 0:00 分钟
4 蛋白封闭液（可选） #5425 NGS 或 #15019 Animal-Free Blocking Solution   20 分钟 
5 一抗^ 用 #8112 SignalStain® Antibody Diluent 稀释 30 分钟 
  洗涤 BOND™ Wash Solution  3x 2:00 分钟
6 Post Primary Mouse Linker Polymer Refine Detection Kit Post Primary*  10 分钟 
  洗涤 BOND™ Wash Solution  3x 2:00 分钟
7 二次检测 Polymer Refine Detection Kit Polymer*  10 分钟 
  洗涤 BOND™ Wash Solution/Deionized Water 定制（参见下文）
8a 可视化 Polymer Refine Detection Kit Mixed DAB Refine*  0:00 分钟 
8b 可视化 Polymer Refine Detection Kit Mixed DAB Refine*  10 分钟 
  洗涤 去离子水 3x 0:00 分钟
9 复染 Polymer Refine Detection Kit Hematoxylin*  5 分钟 
  洗涤 去离子水 0:00 分钟 
  洗涤 BOND™ Wash Solution  0:00 分钟 
  洗涤 去离子水 0:00 分钟 
10 脱水（离线）：    
  在 95% 乙醇中孵育切片 2 次，每次 10 秒。  
  在 100% 乙醇中重复孵育 2 次，每次 10 秒。  
  在二甲苯中重复孵育 2 次，每次 10 秒。  
11 用盖玻片和 #14177 SignalStain® Mounting Medium 封片。  
       
  可选订制洗涤： BOND™ Wash Solution 2:00
    BOND™ Wash Solution 分配器类型：打开 0：00
    BOND™ Wash Solution 2:00
    BOND™ Wash Solution 分配器类型：打开 0：00
    BOND™ Wash Solution 0:00
    去离子水 0:00

*BOND™ Polymer Refine Detection Kit（货号：DS9800）中所含的试剂

LEICA® 是 Leica Microsystems IR GmbH 的注册商标。

BOND™ 是 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 的商标。CST 和 Leica Microsystems IR GmbH 或 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 之间没有附属或赞助关系。

发布​于 2018 年 8 月 

修订于 2018 年 9 月

实验步骤编号：1445

免疫组织化学（石蜡）

A. 溶液和试剂

注意：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 二甲苯。
  2. 无水变性乙醇，组织级（100% 和 95%）。
  3. 去离子水 (dH2O)。
  4. 苏木精（可选）。
  5. 洗涤缓冲液：
    1. 含 Tween® 20 (TBST) 的 1X Tris 盐缓冲液：要制备 1L 1X TBST，添加 100 ml 含 Tween® 20 的 10 X Tris 盐缓冲液 (#9997) 至 900 ml dH20 中并混合。
  6. SignalStain® Antibody Diluent (#8112).
  7. 1X 柠檬酸盐修复液：要制备 250 mL 的 1X 柠檬酸盐修复液，将 25 ml 的 SignalStain® Citrate Unmasking Solution (10X) (#14746) 稀释到 225 mL 的 dH2O 中。
  8. 3% 过氧化氢：要制备 100 ml，添加 10 ml 30% H2O2 至 90 ml dH2O 中。
  9. 封闭液：TBST/5% Normal Goat Serum 或 1X Animal-Free Blocking Solution。
    1. TBST/5% Normal Goat Serum：要制备 5 ml 1X TBST，添加 250 µl Normal Goat Serum (#5425)。
    2. 1X Animal-Free Blocking Solution：要制备 4 mL of dH2O，添加 1 ml 的 Animal-Free Blocking Solution (5X) (#15019)。
  10. 检测系统：SignalStain® Boost IHC Detection Reagents (HRP, Mouse #8125)。
  11. 底物：SignalStain® DAB Substrate Kit (#8059)。
  12. 苏木精： Hematoxylin (#14166)。
  13. 封片剂： SignalStain® Mounting Medium (#14177)。

B. 脱蜡/复水

注意：在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。

  1. 脱蜡/水化合步骤：
    1. 将切片放入二甲苯的洗液中孵育 3 次，每次 5 分钟。
    2. 将切片放入 100% 乙醇中孵育切片 2 次，每次 10 分钟。
    3. 将切片放入 95% 乙醇中孵育切片 2 次，每次 10 分钟。
  2. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

C. 抗原修复

对于柠檬酸盐：将切片浸入 1 X 柠檬酸盐修复液，再放入微波炉中加热直至沸腾；继续保持亚沸腾温度 10 分钟 (95°-98°C)。在实验台上冷却切片 30 分钟。

D. 染色

  1. 用 dH2O 清洗切片三次，每次 5 分钟。
  2. 切片放入 3 % 过氧化氢水溶液中，孵育 10 分钟。
  3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
  4. 用洗涤缓冲液清洗切片持续 5 分钟。
  5. 使用 100–400 µl 封闭液将每张切片在室温下封闭 1 小时。
  6. 去除封闭液，并给每块切片添加 100–400 µl 在 SignalStain® Antibody Diluent (#8112) 中稀释过的一抗。4°C 孵育过夜。
  7. 让 SignalStain® Boost Detection Reagent (HRP, Mouse #8125) 平衡至室温。
  8. 清除抗体溶液，用洗涤缓冲液清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
  9. 按需在切片上滴 1–3 滴 SignalStain® Boost Detection Reagent (HRP, Mouse #8125)。在加湿箱中室温孵育 30 分钟。
  10. 用洗涤缓冲液清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
  11. 加入 1 滴 (30 µl) SignalStain® DAB Chromogen Concentrate 至 1 ml 的 SignalStain® DAB Diluent 中，使用前充分混合。
  12. 在每张切片上应用 100–400 µl SignalStain® DAB，并密切观察，通常 1–10 分钟即可得到合适的染色强度。
  13. 将切片浸入 dH2O 中。
  14. 如果需要，使用 hematoxylin (#14166) 复染切片。
  15. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
  16. 使切片脱水：
    1. 在 95% 乙醇中孵育切片 2 次，每次 10 秒。
    2. 在 100% 乙醇中重复孵育 2 次，每次 10 秒。
    3. 在二甲苯中重复孵育 2 次，每次 10 秒。
  17. 使用盖玻片和封片剂 (#14177) 封片。

检测试剂/底物兼容性
推荐的
检测试剂		 SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Mouse) #8125 SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (AP, Mouse) #31926
兼容的
色原		 SignalStain® DAB Substrate Kit #8059 SignalStain® Vibrant Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit #76713
SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit #96632  

注意：使用本实验步骤中未指定的检测试剂可能需要进一步优化一抗，考虑到检测试剂的不同灵敏度。


发布​于 2010 年 2 月 

修订于 2020 年 6 月

实验步骤编号：280

特异性/敏感性

S100A1 (4C4.9) Mouse mAb 可识别 S100A1 蛋白的内源水平。

物种反应性：

人

来源/纯化

使用纯化牛脑的 S100A1 蛋白对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

虽然 S100 蛋白的尺寸相对较小 (8-12 kDa)，结构简单，但可调节细胞生长和运动、细胞周期进程、转录和分化等各种细胞进程。 到目前为止，已发现了 25 个成员，包括 S100A1-S100A18、毛透明蛋白、聚丝蛋白、repetin、S100P 和 S100Z，使得它成为 EF 手形钙结合蛋白家族中最大的一个亚家族。有趣的是，14 S100 基因聚集在一个基因组不稳定的区域人染色体 1q21 上。研究表明，S100 蛋白异常表达与癌症进展显著相关。S100 蛋白主要介导各种组织类型的免疫应答，同时还与神经元发育有关 (1-4)。

每种 S100 单体有两个 EF 手形基序，可结合多达两个钙分子（在某些情况下，可结合其他二价阳离子）。有结构性证据表明，S100 蛋白可形成反向平行同源或异源二聚体，这些二聚体可以钙依赖（有时不依赖钙）的方式协调结合伴侣亲和力。虽然在结构和功能上相似，但个别组织分布受限的成员位于特定细胞区室，并且有唯一的蛋白结合伴侣，表明每个成员在不同的信号转导通路中发挥特定作用。除了胞内作用，某些 S100 蛋白经证实可作为胞外配体的受体，或被分泌出来并且有类细胞因子活性 (1-4)。

S100A1 在心肌和骨骼肌中高表达，并在调节钙依赖的收缩性方面发挥主要作用 (5,6)。S100A1 和钙调素可结合并以不同方式调控兰尼碱受体 (RyR)，从而调节骨骼肌和心肌功能 (7)。除了 RyR（RyR1 和 RyR2），S100A1 经证实还会与钙依赖性心肌信号转导级联的其他组分相互作用，包括 SERCA2a 和受磷蛋白 (8)。动物模型研究明确证实，S100A1 在心衰的发生中发挥重要作用 (1)。在非心肌组织中，S100A1 经证实可通过直接相互作用或调节每个通路中的支架和信号转导组分，从而调节细胞骨架信号转导、神经递质释放、酶活性、转录因子和其他钙结合蛋白 (4)。

  1. Heizmann, C.W. et al. (2002) Front Biosci 7, d1356-68.
  2. Donato, R. (2003) Microsc Res Tech 60, 540-51.
  3. Marenholz, I. et al. (2004) Biochem Biophys Res Commun 322, 1111-22.
  4. Santamaria-Kisiel, L. et al. (2006) Biochem J 396, 201-14.
  5. Ritterhoff, J. and Most, P. (2012) Gene Ther , .
  6. Völkers, M. et al. (2010) J Biomed Biotechnol 2010, 178614.
  7. Prosser, B.L. et al. (2011) Cell Calcium 50, 323-31.
  8. Wright, N.T. et al. (2009) Curr Chem Biol 3, 138-145.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

限制使用

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