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9920
Phospho-(Ser/Thr) Kinase Substrate Antibody Sampler Kit
一抗
抗体小包装组合

Phospho-(Ser/Thr) Kinase Substrate Antibody Sampler Kit #9920

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Phospho-(Ser/Thr) Kinase Substrate Antibody Sampler Kit: 图像 1

使用 Phospho-AMPK Substrate Motif [LXRXX(pS/pT) MultiMab™ Rabbit mAb mix 对 H1650 细胞提取物进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input。使用相同抗体进行蛋白质印迹分析。

Phospho-(Ser/Thr) Kinase Substrate Antibody Sampler Kit: 图像 2

使用 Phospho-Akt Substrate (RXXS*/T*) (110B7E) Rabbit mAb 对经对照(左)或经 λ 磷酸酶处理(右)的石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

Phospho-(Ser/Thr) Kinase Substrate Antibody Sampler Kit: 图像 3

使用 Phospho-PKA Substrate (RRXS*/T*) (100G7E) Rabbit mAb 对在体外被 PKA 激酶磷酸化或在 Forskolin/IBMX 培养基中处理的血清饥饿 A431 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。裂解缓冲液:1.0% Triton X-100(泳道 1 和 2)、2.0% SDS(泳道 3 和 4)。

Phospho-(Ser/Thr) Kinase Substrate Antibody Sampler Kit: 图像 4

使用 Phospho-ATM/ATR Substrate Motif [(pS/pT) QG] MultiMab™ Rabbit mAb mix(泳道 50 和 ),对未经处理 (-) 或经紫外线处理(+,22,mJ/cm,小时)

的 Hela 细胞进行免疫沉淀。泳道 1 和 2 为 10% input。使用相同抗体(上)和 p95/NBS1 Antibody #3002(下)进行蛋白质印迹检测分析。

Phospho-(Ser/Thr) Kinase Substrate Antibody Sampler Kit: 图像 5

使用 Phospho-PKC Substrate Motif [(R/K)XpSX(R/K)] MultiMab™ Rabbit mAb mix 对未经 (-) 或已经 TPA(200 nM,30 分钟;+)处理(泳道 3 和 4)的 Jurkat 细胞提取物进行免疫沉淀 (IP)。泳道 1 和 2 为 10% input。使用相同抗体进行蛋白质印迹分析。

Phospho-(Ser/Thr) Kinase Substrate Antibody Sampler Kit: 图像 6

使用 Phospho-CDK Substrate Motif [(K/H)pSP] MultiMab™ Rabbit mAb mix,对细胞周期 G1/S、G2/M 和 G0 期同步处理的 COS-7 细胞提取物

进行蛋白质印迹分析。

Phospho-(Ser/Thr) Kinase Substrate Antibody Sampler Kit: 图像 7

一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。

Phospho-(Ser/Thr) Kinase Substrate Antibody Sampler Kit: 图像 8

使用 Phospho-AMPK Substrate Motif [LXRXX(pS/pT) MultiMab™ Rabbit mAb mix 对不同小鼠组织提取物进行蛋白质印迹分析。

Phospho-(Ser/Thr) Kinase Substrate Antibody Sampler Kit: 图像 9

使用 Phospho-Akt Substrate (RXXS*/T*) (110B7E) Rabbit mAb 对石蜡包埋的肺癌进行免疫组织化学分析。

Phospho-(Ser/Thr) Kinase Substrate Antibody Sampler Kit: 图像 10

使用 Phospho-ATM/ATR Substrate Motif [(pS/pT) QG] MultiMab™ Rabbit mAb mix,对未经处理 (-) 或经紫外线处理(+,50 mJ/cm2,2 小时)的 HeLa 细胞提取物

进行蛋白质印迹分析。使用 Odyssey® Infrared Imaging System (LI-COR® Biotechnologies) 进行蛋白质印迹显影。

Phospho-(Ser/Thr) Kinase Substrate Antibody Sampler Kit: 图像 11

使用 Phospho-PKC Substrate Motif [(R/K)XpSX(R/K)] MultiMab™ Rabbit mAb mix 对未经 (-) 或已经 TPA(200 nM,30 分钟;+)处理的 Jurkat 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。使用 Odyssey® Infrared Imaging System (LI-COR® Biotechnologies) 进行蛋白质印迹显影。

Phospho-(Ser/Thr) Kinase Substrate Antibody Sampler Kit: 图像 12

使用 Phospho-AMPK Substrate Motif [LXRXX(pS/pT) MultiMab™ Rabbit mAb mix,对未经处理或经苯乙双胍处理(5 mM,1 小时)的 H1650 细胞提取物

进行蛋白质印迹分析。使用 Odyssey® Infrared Imaging System (LI-COR® Biosciences) 进行蛋白质印迹显影。

Phospho-(Ser/Thr) Kinase Substrate Antibody Sampler Kit: 图像 13

使用 Phospho-Akt Substrate (RXXS*/T*) (110B7E) Rabbit mAb 对石蜡包埋的肾细胞癌进行免疫组织化学分析。

Phospho-(Ser/Thr) Kinase Substrate Antibody Sampler Kit: 图像 14

使用 Phospho-PKC Substrate Motif [(R/K)XpSX(R/K)] MultiMab™ Rabbit mAb mix 对不同小鼠组织的提取物进行蛋白质印迹分析。

Phospho-(Ser/Thr) Kinase Substrate Antibody Sampler Kit: 图像 15

使用 Phospho-Akt Substrate (RXXS*/T*) (110B7E) Rabbit mAb 对未经处理或经 FBS/Calyculin A 处理的血清饥饿 NIH/3T3 细胞提取物进行免疫沉淀,随后使用相同抗体进行蛋白质印迹分析。

Phospho-(Ser/Thr) Kinase Substrate Antibody Sampler Kit: 图像 16

使用 Phospho-Akt Substrate (RXXS*/T*) (110B7E) Rabbit mAb 对在体外被 Akt 激酶磷酸化或在 PDGF 或 FBS/Calyculin A 培养基中处理的血清饥饿 NIH/3T3 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

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产品说明

Phospho-(Ser/Thr) Kinase Substrate Antibody Sampler Kit 是一种经济合算的方式,可用来研究特定丝氨酸/苏氨酸激酶的下游活性。该试剂盒包含的一抗足以针对每种抗体进行 两 次蛋白质印迹实验。

特异性/敏感性

Phospho-(Ser/Thr) Akt Substrate (110B7E) Rabbit mAb 会以在很大程度上不依赖于周围氨基酸序列的方式优先检测包含磷酸-丝氨酸/苏氨酸(

在位点 -5 和 -3 之前是精氨酸)的肽和蛋白。已观察到与包含磷酸-丝氨酸/苏氨酸(在位点 -3 之前是精氨酸)的肽存在某些交叉反应性。但未观察到与相应非磷酸化序列或其他包含磷酸-丝氨酸/苏氨酸的基序具有交叉反应性。ELISA 表明,该抗体可识别各种带有磷酸-苏氨酸或磷酸-丝氨酸(在 -3 和 -5 位点为精氨酸)的肽。

只有当细胞蛋白在 Ser 残基(在 -2 和 +2 位点被 Arg 或 Lys 包围)上被磷酸化时,Phospho-(Ser) PKC Substrate (P-S3-101) Rabbit mAb 方可检测内源水平的多个细胞蛋白。该抗体还会与包含 S*X(R/K) 基序的蛋白发生交叉反应。该抗体不会与非磷酸化 Ser 残基、相同基序中的磷酸 Thr 或其他基序中的磷酸 Ser 发生交叉反应。

Phospho-PKA Substrate (RRXS*/T*) (100G7E) Rabbit mAb 可检测包含磷酸 Ser/Thr 残基(在-3 和 -2 位点有精氨酸)的肽和蛋白。这是一个有用的工具,可用来识别 PKA 的新底物。该抗体可在较小程度上识别其他包含 -3 精氨酸的磷酸 Ser/Thr 肽,如 Akt 和 PKC 的底物基序。它不可识别非磷酸化底物基序肽。

Phospho-(Ser/Thr) AMPK Substrate (P-S/T2-102) Rabbit mAb 优先识别包含 LXRXXpS/pT 基序的内源性蛋白和肽。该抗体也可与只携带 RXXpS/pT 基序的蛋白和肽发生交叉反应。

Phospho-(Ser) CDKs Substrate (P-S2-100) Rabbit mAb 可识别 KS*P 基序的磷酸-丝氨酸。该抗体不与含磷酸化苏氨酸或磷酸化酪氨酸的肽/蛋白发生交叉反应。

Phospho-(Ser/Thr) ATM/ATR Substrate (S*/T*QG) (P-S/T2-100) Rabbit mAb 可识别包含后跟 Gln 和 Gly 残基的磷酸-Ser 或磷酸-Thr 的蛋白。该抗体某种程度也可识别带有 S*/T*Q 基序的蛋白。

来源/纯化

使用合成磷酸肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

磷酸-(Ser/Thr) 激酶和磷酸酶在各种生物进程中发挥关键作用。每种磷酸-(Ser/Thr) 激酶磷酸化特定基序内的丝氨酸或苏氨酸。Akt 磷酸化仅在保守基序中的丝氨酸或苏氨酸底物,该保守基序在位点 -5 和 -3 有精氨酸 (1)。常见 PKC 同工酶会磷酸化包含丝氨酸或苏氨酸的底物,这些底物在 -3、-2 和 +2 位点有精氨酸或赖氨酸,在位点 +1 有一个疏水性氨基酸 (2,3)。PKA 的共有磷酸化位点是在 -2 和 -3 位点伴有精氨酸的丝氨酸或苏氨酸 (3)。AMPK 磷酸化共有基序 (L/M) XRXX (S/T) XXXL (6)。可识别 LXRXX (S/T) 基序的抗体在 AMPK 底物鉴别时十分有用。CDK 底物的共有氨基酸序列是 (K/R)(S*)PX(K/R),表示 20 个氨基酸中的任何一个,S* 表示磷酸化位点 (4-6)。ATM 和相关激酶 ATR 可磷酸化 S*/T*Q 基序的丝氨酸或苏氨酸 (7,8)。

对特定激酶底物具有特异性的抗体可用作有价值的试剂来确定激酶活性并识别潜在新激酶底物。CST 已开发出能识别蛋白基序中磷酸化丝氨酸或苏氨酸的抗体,其中这种蛋白基序被 Akt、PKC、PKA、MAPK/CDK、CDK 或 ATM/ATR 磷酸化。肽配对 ELISA 表明,该小包装组合中的每种 phospho-(Ser/Thr) kinase substrate antibody 对其激酶底物基序均具有特异性。

  1. Alessi, D.R. et al. (1996) FEBS Lett 399, 333-8.
  2. Nishikawa, K. et al. (1997) J Biol Chem 272, 952-60.
  3. Pearson, R.B. and Kemp, B.E. (1991) Methods Enzymol 200, 62-81.
  4. Songyang, Z. et al. (1996) Mol Cell Biol 16, 6486-93.
  5. Songyang, Z. (1999) Prog Biophys Mol Biol 71, 359-72.
  6. Holmes, J.K. and Solomon, M.J. (1996) J Biol Chem 271, 25240-6.
  7. Kastan, M.B. and Lim, D.S. (2000) Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 1, 179-186.
  8. Zhao, H. and Piwnica-Worms, H. (2001) Mol Cell Biol 21, 4129-39.

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