反应性 | R |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | 100 |
来源 | 兔 |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
保存在 10mM sodium HEPES(pH 为 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA 和 50% 甘油中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。
要进行蛋白质印迹法分析,在 4°C 下,将膜与稀释的一抗放在 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中一起孵育,轻晃孵育一整夜。
注意:请参阅一抗产品网页了解建议使用的抗体稀释度。
从样品制备至检测,蛋白质印迹法需要用到的试剂在一个套装试剂盒中提供:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布于 2005 年 6 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
Phospho-Na,K-ATPase α1 (Ser23) Antibody 仅在 Ser23 磷酸化后可识别内源水平的 Na,K-ATPase α1。Ser23 残基编号是基于蛋白质未成熟形式的序列,对应于成熟切割形式的 Ser18。
大鼠
使用与大鼠 Na,K-ATPase α1 的 Ser23 周围残基相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。使用蛋白 A 和肽亲和力色谱对抗体进行纯化。
Na,K-ATP 酶属于 P 型 ATP 酶家族的整合型膜异二聚体。这种离子通道使用来自 ATP 水解的能量,通过逆电化学梯度跨质膜驱动钠输出和钾输入而维持膜电位。它由催化性 α 亚基和 β 亚基组成(综述参见 1)。已经鉴定出 α1 亚基的几个磷酸化位点。Tyr10 由一种尚未确定的激酶磷酸化 (2),Ser16 和 Ser23 由 PKC 磷酸化,而 Ser943 由 PKA 磷酸化 (3-5)。所有这些位点均已涉及在激素和神经递质刺激下对酶活性的调节,从而改变 Na, K-ATP 酶的转运和动力学特性。血管紧张素 II 作用下改变的磷酸化可刺激大鼠近端小管中的活性 (6)。Na, K-ATP 酶还涉及其他信号转导通路。胰岛素调节其在分化的原代人骨骼肌细胞中的定位,并且这种调节作用取决于 α 亚基的 ERK1/2 磷酸化 (7)。Na, K-ATP 酶和 Src 可形成影响 Src 激酶活性调节过程并进而影响其下游效应物的信号转导受体复合体 (8,9)。
探索与本品相关的通路 + 蛋白。
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