反应性 | H |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | 450 |
来源/亚型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。
要进行蛋白质印迹法分析,在 4°C 下,将膜与稀释的一抗放在 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中一起孵育,轻晃孵育一整夜。
注意:请参阅一抗产品网页了解建议使用的抗体稀释度。
从样品制备至检测,蛋白质印迹法需要用到的试剂在一个套装试剂盒中提供:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#13953,5 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布于 2005 年 6 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
Phospho-DNA-PKcs (Ser2056) (E9J4G) 兔单克隆抗体可检测仅在 Ser2056 位点被磷酸化的 DNA-PKcs 蛋白的内源水平。
人
使用与人 DNA-PKcs 蛋白中 Ser2056 周围的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
DNA 依赖性蛋白激酶 (DNA-PK) 是修复 DNA 双链断裂的一种重要因子。DNA-PK 缺失或 DNA-PK 受抑制的细胞无法进行正确的非同源性末端连接 (NHEJ) (1-7)。DNA-PK 包含两个 DNA 结合亚基(Ku70 和 Ku86)和一个 450 kda 催化亚基 (DNA-PKcs) (8)。据认为,Ku70 和 Ku86 的异二聚体在 DNA-PKcs 结合之前结合 DNA 双联断裂末端,随后被激活 (1,9)。激活 DNA-PKcs 是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,研究表明,它会在体外磷酸化许多蛋白,包括 p53、转录因子、RNA 聚合酶和 Ku70/Ku86 (10,11)。DNA-PKcs 在多个位点(包括 Thr2609 和 Ser2056)的自磷酸化会使 DNA-PK 激酶活性和 NHEJ 能力失活 (12,13)。但研究表明,DNA-PK 在自磷酸化之前会优先磷酸化底物,表明 DNA-PK 自磷酸化可能在 DNA 修复机制的分解过程中起作用 (14,15)。Thr2609 自磷酸化还显示是 DNA-PK 介导的双链断裂修复所必需的,并且磷酸化 DNA-PK 与 H2A.X 和 53BP1 共同位于 DNA 损伤位点 (16)。DNA 双链断裂和 ATM 激活时会在 Ser2056 位点发生磷酸化 (17)。
探索与本品相关的通路 + 蛋白。
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