反应性 | H |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 31 |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
蛋白质印迹法就是将膜与 5% w/v 脱脂奶粉、1X TBS 以及 0.1% Tween® 20 中的稀释的一抗在 4°C 下进行夜间孵育,同时轻轻晃动。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:263
人
使用与人周期素 D3 蛋白中 Thr283 周围的残基相对应的合成磷酸肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
细胞周期素依赖性激酶 CDK4 和 CDK6 的活性受到 T-loop 磷酸化,它们的细胞周期素伴侣(D 型细胞周期素)的丰度,以及与 Cip/Kip 或 INK 家族蛋白的 CDK 抑制子的结合调控 (1)。失活的三聚复合体cyclin D/CDK4 和 p27 Kip1 需要细胞外有丝分裂原刺激以释放和降解 p27,cyclin D 水平升高,影响限制点的通过和 Rb 依赖的 S 期进入 (2)。cyclin D/CDK4 的活性复合体靶向视网膜母细胞瘤蛋白以将其磷酸化,从而释放可激活 G1/S 期基因表达的转录因子 E2F (3)。生长因子消失后,通过蛋白表达下调和磷酸化依赖性的降解,下调cylin D 的表达水平 (4)。
虽然 D 型 cyclin 并不完全冗余,但是 cyclin D3 像 D1 一样,在分化和增殖中发挥显著作用,这与 cyclin D3 在多个癌症中的表达水平更高相关 (5)。伯基特淋巴瘤细胞中会出现周期素 D3 基因突变,这种突变会影响 Thr283 磷酸化、蛋白质稳定性以及细胞周期进程 (6)。
探索与本品相关的通路。
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