反应性 | H M R |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 240 |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
免疫荧光法(免疫细胞化学) | 1:50 |
为了进行蛋白质印迹,在 4°C 将膜与 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中稀释的一抗孵育过夜,同时柔和振摇。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
从样品制备至检测,进行蛋白质印迹所需要的试剂现归于一个便利的试剂盒:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
若想获得高质量的免疫荧光图片,请使用我们 #12727 Immunofluorescence Application Solutions Kit 中高效且划算的预制试剂。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
建议使用偶联荧光素的抗兔二抗:
注意:细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。
吸干液体,随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。
注意:甲醛有毒性,需在通风橱中使用。
注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。
发布时间 2006 年 11 月
修订时间 2013 年 11 月
实验步骤编号:24
人, 小鼠, 大鼠
使用与人 CAD 蛋白中 Ser1859 周围残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
CAD 为重新合成嘧啶核苷酸所必需,并且拥有以下酶活性:谷氨酰胺转移酶、氨甲酰磷酸合成酶、天冬氨酸转氨甲酰酶和二氢乳清酸酶。因此,酶可将谷氨酰胺转化为单磷酸尿苷(所有嘧啶碱基的一种共同前体),这也是核酸合成所必需的 (1)。在静息细胞中,CAD 主要位于细胞浆中,其中细胞可进行合成嘧啶。当增殖细胞进入 S 期时,MAP 激酶 (Erk1/2) 在 Thr456 位点可磷酸化 CAD,进而可导致 CAD 转位到细胞核。细胞退出 S 期时,CAD 的 Thr456 位点去磷酸化,而 Ser1406 位点被 PKA 磷酸化,从而使通路返回基础活性 (2)。各项研究表明,CAD 在多种癌细胞类型中表达升高,这促进了药理学抑制蛋白(如 PALA)的发展。根据进一步研究,已将 CAD 鉴定为前列腺癌复发的一个潜在早期预测标志物 (3)。
mTORC1 是一种蛋白激酶,可以通过感应和整合各种生长信号来调节细胞的生长和增殖。S6 激酶 1 (S6K1) 是一种 mTORC1 的下游核糖体蛋白靶标,直接在 CAD 上磷酸化 Ser1859。这种磷酸化会刺激嘧啶重新合成的前三个步骤,因此,有助于促进细胞整体进入细胞周期的 S 期 (4,5)。
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