产品货号 | 规格 | 价格 | 库存 |
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8869T | 20 µl | ||
8869S | 100 µl |
为庆祝中国农历新年,我们的中国办事处关闭。我们将于星期四(2 月 18 日 )开放。
感谢您的耐心等待。
反应性 | H |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | 120 |
来源/亚型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
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蛋白质印迹法 | 1:1000 |
免疫沉淀 | 1:50 |
保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。
要进行蛋白质印迹法分析,在 4°C 下,将膜与稀释的一抗放在 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中一起孵育,轻晃孵育一整夜。
注意:请参阅一抗产品网页了解建议使用的抗体稀释度。
从样品制备至检测,蛋白质印迹法需要用到的试剂在一个套装试剂盒中提供:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#13953,5 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布于 2005 年 6 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
本实验步骤适用于使用蛋白 A 磁珠分离法对天然蛋白进行免疫沉淀,以进行蛋白质免疫印迹或激酶活性分析。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
10X 细胞裂解缓冲液:(#9803) 要制备 10 ml 的 1X 细胞裂解缓冲液,将 1 ml 细胞裂解缓冲液添加至 9 ml dH2O,并混合。
注意:使用前,请立即添加 1 mM PMSF (#8553)。
强烈建议进行细胞裂解物预清除步骤,以减少结合 Protein A Magnetic beads 的非特异性蛋白。为检测样品和同型对照预澄清足够裂解物。
重要提示:使用前,预先洗涤 #73778 磁珠:
一旦溶液变澄清,便小心清除缓冲液。添加 500 μl 1X 细胞裂解缓冲液到磁珠沉淀物中,稍微涡旋以洗涤珠子。将试管放回磁分离架。一旦溶液变澄清,便清除缓冲液。再次进行洗涤步骤。
重要提示:最佳裂解物浓度将取决于目的蛋白的表达水平。建议起始浓度为 250 μg/ml-1.0 mg/ml。
重要提示:强烈建议使用相应的同型对照,以便在你的一抗免疫沉淀中显示特异性结合。使用 Normal Rabbit IgG #2729、Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 和 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415 分别进行兔多克隆一抗、兔单克隆一抗和小鼠单克隆一抗的对照检测。同型对照的浓度应匹配,并与一抗样品同时进行。
继续下述其中一项的具体步骤。
注意:为了最大限度减少变性 IgG 重链 (~50 kDa) 产生的遮盖作用,我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Light-Chain Specific) (D4W3E) mAb (#45262) 或 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP 缀合物 #5127)。为了最大限度减少变性 IgG 轻链产生的遮盖作用 (~25 kDa),我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP conjugate #5127)
发布于 2008 年 12 月
修订于 2018 年 4 月
实验步骤编号:410
Phospho-c-Cbl (Tyr700) (D16D7) Rabbit mAb 仅当 Tyr700 磷酸化后可识别内源水平的 c-Cbl 蛋白。
人
小鼠
使用与人 c-Cbl 蛋白 Tyr700 周围残基相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
c-Cbl 原癌基因是一种广泛表达的细胞质接头蛋白,主要分布在造血细胞中 (1,2)。c-Cbl 在多种细胞表面受体的刺激下可快速被酪氨酸磷酸化,且可结合许多胞内信号转导分子,如蛋白酪氨酸激酶、磷脂酰肌醇-3 激酶、Crk 以及 14-3-3 蛋白 (3,4)。c-Cbl 有一个高度保守的氨基末端磷酸酪氨酸结合域 (TKB) 和一个 C3HC4 RING 指结构基序。TKB 可识别激活受体酪氨酸激酶 (RTKs) 上磷酸化的酪氨酸以及其它非受体酪氨酸激酶。RING 指基序会募集泛素结合酶。这两种结构域主要负责 c-Cbl 的泛素连接酶活性以及 RTKs 的下调 (3)。研究表明,在人癌症组织中,c-Cbl 以一种肿瘤特异的方式频繁被酪氨酸磷酸化 (5)。c-Cbl 在 Tyr731 位点的磷酸化为下游信号转导组分(如 p85 和 Fyn)提供了一个锚定位点 (6)。
已经证明,C-Cbl 通过 Fyn、Yes 和 Syk (4) 在 Tyr700 磷酸化,以及一种造血限制的 Rac 鸟嘌呤核苷酸交换因子 Vav 在募集到磷酸化 Tyr700 (5) 后进行 c-Cbl 依赖性泛素化。
探索与本品相关的通路 + 蛋白。
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