反应性 | H M R Mk |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | 49 |
来源/亚型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
免疫沉淀 | 1:50 |
保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。
要进行蛋白质印迹法分析,在 4°C 下,将膜与稀释的一抗放在 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中一起孵育,轻晃孵育一整夜。
注意:请参阅一抗产品网页了解建议使用的抗体稀释度。
从样品制备至检测,蛋白质印迹法需要用到的试剂在一个套装试剂盒中提供:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#13953,5 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布于 2005 年 6 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
本实验步骤适用于使用 Protein A agarose beads 对天然蛋白进行免疫沉淀,以进行蛋白质免疫印迹或激酶活性分析。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
10X 细胞裂解缓冲液:(#9803) 要制备 10 ml 的 1X 细胞裂解缓冲液,将 1 ml 细胞裂解缓冲液添加至 9 ml dH2O,并混合。
注意:使用前,请立即添加 1 mM PMSF (#8553)。
继续下述其中一项的具体步骤。
注意:为了最大限度减少变性 IgG 重链产生的遮盖作用 (~50 kDa),我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Light-Chain Specific) (L57A3) mAb (#3677) 或 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP conjugate #5127)。为了最大限度减少变性 IgG 轻链产生的遮盖作用 (~25 kDa),我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP conjugate #5127)
发布于 2008 年 12 月
修订于 2018 年 4 月
实验步骤编号:409
Phospho-BCKDH-E1α (Ser293) (E2V6B) 兔单克隆抗体可检测仅在成熟人源 BCKDH-E1α 的 Ser292 位点、成熟小鼠 BCKDH-E1α 的 Ser293 位点或成熟大鼠 BCKDH-E1α 的 Ser293 位点被磷酸化的 BCKDH-E1α 蛋白的内源水平。
人, 小鼠, 大鼠, 猴
使用与成熟人源 BCKDH-E1α 蛋白中 Ser292(对应成熟小鼠 BCKDH-E1α 蛋白中的 Ser293 和成熟大鼠 BCKDH-E1α 蛋白中的 Ser293)周围的残基相对应的合成磷酸肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
支链氨基酸 (BCAA) 亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸是哺乳动物中的重要氨基酸,但 BCAA 水平升高与心血管和代谢疾病有关 (1)。支链 α-酮酸脱氢酶复合体 (BCKDH) 可催化 BCAA 降解通路中的限速步骤 (2,3)。支链 α-酮酸脱羧酶 (BCKDH-E1) 是该复合体中三种酶组分的一种 (3)。BCKDH-E1 的 α 亚基 (BCKDH-E1α) 对 BCKDH 调节很重要。BCKDH-E1α 磷酸化经证实对调节该复合体的酶活性起着关键作用 (3-5)。
BCKDH-E1α 在 Ser293 位点的磷酸化会使 BCKDH 失活 (3,4)。据报道,血浆 BCAA 水平显著升高与 BCKDH-E1α 在 Ser293 位点的磷酸化增强以及糖尿病小鼠肝细胞中 BCKDH 活性受抑制有关 (5)。
探索与本品相关的通路 + 蛋白。
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