反应性 | H |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | 350 |
来源/亚型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
流式细胞术 | 1:1600 |
保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。
要进行蛋白质印迹法分析,在 4°C 下,将膜与稀释的一抗放在 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中一起孵育,轻晃孵育一整夜。
注意:请参阅一抗产品网页了解建议使用的抗体稀释度。
从样品制备至检测,蛋白质印迹法需要用到的试剂在一个套装试剂盒中提供:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#13953,5 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布于 2005 年 6 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
本实验步骤中所需的所有试剂可与我们的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 一起高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
注意:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活性染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经流式细胞术验证的细胞染料完整列表。
注:固定前,应分离黏附细胞或组织,并放在单细胞悬浮液中。
注意:理想的离心条件根据细胞类型和试剂容量有所不同。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀。
注意:如果使用全血,则需在固定前裂解红细胞并通过离心洗涤。
注意:如果表位被甲醛和/或甲醇破坏,可以在固定前添加靶向 CD 标记物或其他胞外蛋白的抗体。在固定和透化过程中,这类抗体保持结合目的靶标。但注意,某些荧光团(包括 PE 和 APC)会被甲醇损坏,因此不应在透化前添加。如果您不确定,请进行小规模实验。
注:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。
发布于 2009 年 7 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:404
Phospho-ATM (Ser1981) (D25E5) Rabbit mAb 仅当 Ser1981 磷酸化后可识别内源水平的 ATM 蛋白。
人
猴
使用与人 ATM 蛋白的 Ser1981 周围残基相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
共济失调毛细血管扩张症突变激酶 (ATM) 是调节细胞周期检查点和 DNA 修复的丝氨酸/苏氨酸激酶 (1)。在暴露的 DNA 双链断口应激下,ATM 通过自磷酸化在 Ser1981 位点上激活。ATM 激酶可调节多种涉及细胞周期检查点控制、凋亡和 DNA 修复的蛋白质。已知的底物包括 p53、Chk2、Chk1、CtIP、4E-BP1、BRCA1、RPA3、H2A.X、SMC1、FANCD2、Rad17、Artemis、Nbs1 和 PP1 的 I-2 调节亚基 (1,2)。相应ATM 基因中的突变会导致共济失调毛细血管扩张症 (AT),该病是一种以肌肉运动不协调和神经变性为特征的常染色体隐性疾病。来自 AT 患者的细胞显示缺陷性 DNA 损伤诱导的检查点激活、辐射敏感性和更高的染色体断裂频率 (3,4)。
探索与本品相关的通路 + 蛋白。
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