反应性 | H |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | 120 |
来源/亚型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
免疫沉淀 | 1:100 |
保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。存储温度为 -20℃。不要分装抗体。
要进行蛋白质印迹法分析,在 4°C 下,将膜与稀释的一抗放在 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中一起孵育,轻晃孵育一整夜。
注意:请参阅一抗产品网页了解建议使用的抗体稀释度。
从样品制备至检测,蛋白质印迹法需要用到的试剂在一个套装试剂盒中提供:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布于 2005 年 6 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
本实验步骤适用于使用 Protein A agarose beads 对天然蛋白进行免疫沉淀,以进行蛋白质免疫印迹或激酶活性分析。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
10X 细胞裂解缓冲液:(#9803) 要制备 10 ml 的 1X 细胞裂解缓冲液,将 1 ml 细胞裂解缓冲液添加至 9 ml dH2O,并混合。
注意:使用前,请立即添加 1 mM PMSF (#8553)。
继续下述其中一项的具体步骤。
注意:为了最大限度减少变性 IgG 重链产生的遮盖作用 (~50 kDa),我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Light-Chain Specific) (L57A3) mAb (#3677) 或 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP conjugate #5127)。为了最大限度减少变性 IgG 轻链产生的遮盖作用 (~25 kDa),我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP conjugate #5127)
发布于 2008 年 12 月
修订于 2018 年 4 月
实验步骤编号:409
仅在 Ser12 位点被磷酸化时,Phospho-α-Adducin (Ser12) (E5X8Y) Rabbit mAb 才能识别 α-adducin 蛋白的内源水平。在某些细胞系中,该抗体可能会与未知来源的 150 kDa 条带发生交叉反应。该条带似乎在有丝分裂中被上调。
人
小鼠, 大鼠
使用与人 α-adducin 蛋白的 Ser12 周围残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
内收蛋白 (ADD) 为细胞骨架相关的蛋白,可帮助盖帽肌动蛋白丝的末端,促进血影蛋白与肌动蛋白之间的结合并参与突触组合。三种密切相关的基因 ADD1、ADD2 和 ADD3 可编码 α-adducin、β-adducin 和 γ-adducin 蛋白 (1)。研究表明,β-adducin 在脑和造血组织的水平较高,而 α-adducin 和 γ-adducin 均广泛表达 (2)。内收蛋白功能受多个位点的磷酸化调节。PKA 和 PKC 均可在 Ser726 位点(β-adducin 在 Ser713 位点)磷酸化 α-adducin,从而抑制钙调蛋白结合和内收蛋白活性 (3-5)。此外,PKA(而非 PKC)可在 Ser408、Ser436 和 Ser481 位点磷酸化 β-adducin,从而对血影蛋白-肌动蛋白相互作用造成消极影响 (3)。α-adducin 在 Thr445 和 Thr480 位点被 Rho-kinase 磷酸化可调节细胞运动和膜边缘波动 (6)。最后,有丝分裂期间 CDK-1 在 Ser12 和 Ser355 位点对 α-adducin 的磷酸化导致 α-adducin 与有丝分裂纺锤体结合,说明 α-adducin 可能在有丝分裂调节中发挥作用 (7)。由于 α-adducin 在调节肾钠重吸收中发挥作用,因此许多研究表明 ADD1 基因多态性和高血压发病有关并不足为奇 (8-10)。
探索与本品相关的通路 + 蛋白。
除非 CST 的合法授书代表以书面形式书行明确同意,否书以下条款适用于 CST、其关书方或分书商提供的书品。 任何书充本条款或与本条款不同的客书条款和条件,除非书 CST 的合法授书代表以书面形式书独接受, 否书均被拒书,并且无效。
专品专有“专供研究使用”的专专或专似的专专声明, 且未专得美国食品和专品管理局或其他外国或国内专管机专专专任何用途的批准、准专或专可。客专不得将任何专品用于任何专断或治专目的, 或以任何不符合专专声明的方式使用专品。CST 专售或专可的专品提供专作专最专用专的客专,且专用于研专用途。将专品用于专断、专防或治专目的, 或专专售(专独或作专专成)或其他商专目的而专专专品,均需要 CST 的专独专可。客专:(a) 不得专独或与其他材料专合向任何第三方出售、专可、 出借、捐专或以其他方式专专或提供任何专品,或使用专品制造任何商专专品,(b) 不得复制、修改、逆向工程、反专专、 反专专专品或以其他方式专专专专专品的基专专专或技专,或使用专品开专任何与 CST 的专品或服专专争的专品或服专, (c) 不得更改或专除专品上的任何商专、商品名称、徽专、专利或版专声明或专专,(d) 只能根据 CST 的专品专售条款和任何适用文档使用专品, (e) 专遵守客专与专品一起使用的任何第三方专品或服专的任何专可、服专条款或专似专专