Interested in promotions? | Click here >>
32770
PHGDH (D3D5E) Rabbit mAb (IF Formulated)
一抗
单克隆抗体

PHGDH (D3D5E) Rabbit mAb (IF Formulated) #32770

引用 (0)
筛选器:
  1. IF
Immunofluorescence Image 1: PHGDH (D3D5E) Rabbit mAb (IF Formulated)

使用 PHGDH (D3D5E) Rabbit mAb(绿色)对高表达的 293T(左图)、HeLa(中图)或阴性 786-0(右图)细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

购买 # 32770S
产品货号 规格 价格 库存
32770S
100 µl

支持数据

反应性 H
敏感性 内源性
MW (kDa)
来源/亚型 兔 IgG

应用缩写:

  • W-Western
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品使用信息

应用 稀释度
免疫荧光法(免疫细胞化学) 1:100

保存

保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。

实验步骤

打印

查看 > 折叠 >

免疫荧光法(免疫细胞化学)

A. 溶液和试剂

若想获得高质量的免疫荧光图片,请使用我们 #12727 Immunofluorescence Application Solutions Kit 中高效且划算的预制试剂。

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS): (9808) 要制备 1L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛:16%,无甲醇,Polysciences 公司生产。(cat# 18814),使用新鲜制剂,小瓶打开后在 4°C 避光保存,同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭缓冲液(1X PBS / 5% 正常血清 / 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 0.5 ml 与二抗同一物种来源的正常血清(例如 Normal Goat Serum (#5425))和 0.5 mL 20X PBS 至 9.0 mL dH2O 中并充分混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液 (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton X-100):要制备 10 ml,添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后,添加 0.1 g BSA (9998),并混合。
  5. 建议使用偶联荧光素的抗兔二抗:

  6. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071),Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 标本制备 - 培养细胞系 (IF-IC)

注意:细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。

  1. 吸干液体,随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。

    注意:甲醛有毒性,需在通风橱中使用。

  2. 室温下固定细胞 15 分钟。
  3. 吸干固定液,用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭时,按产品网页中列出的抗体稀释缓冲液中稀释来制备一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液,加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  6. 用抗体稀释缓冲液将荧光物质标记的二抗稀释后,室温下避光孵育标本 1–2 小时。
  7. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  8. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ,用盖玻片盖住切片。
  9. 要达到最佳效果,使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布​于 2006 年 11 月 

修订于 2013 年 11 月

实验步骤编号:24

特异性/敏感性

PHGDH (D3D5E) Rabbit mAb 可识别内源水平的 PHGDH 总蛋白。

物种反应性:

来源/纯化

使用与人 PHGDH 蛋白中 Val304 周围的残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

哺乳动物细胞可将部分糖酵解中间物 3-磷酸甘油酸转运到磷酸化的丝氨酸合成通路,从而重新合成丝氨酸。这种转移可为蛋白、核苷酸、肌酸、卟啉、磷脂和谷胱甘肽的生物合成提供前体,因此可支持合成代谢。磷酸甘油酸脱氢酶 (PHGDH) 将 3-磷酸甘油酸转化成磷酸羟基丙酮酸,进而催化丝氨酸生物合成的第一步 (1)。

研究表明,丝氨酸生物合成增加会支持癌细胞生长和增殖 (2-4),这种结果与许多黑色素瘤和乳腺癌细胞中 PHGDH 的扩增和过表达一致 (5,6)。在 PHGDH 水平升高的细胞系中,抑制 PHGDH 表达会导致细胞增殖急剧减弱,并会在体内抑制肿瘤生长 (5)。其他证据表明,PHGDH 可稳定 FoxM1 并与其相互作用,从而促进胶质瘤细胞的增殖、侵袭和致瘤性 (7)。

  1. Locasale, J.W. (2013) Nat Rev Cancer 13, 572-83.
  2. Amelio, I. et al. (2013) Oncogene, [Epub ahead of print].
  3. Ma, L. et al. (2013) Cell 152, 599-611.
  4. Maddocks, O.D. et al. (2013) Nature 493, 542-6.
  5. Possemato, R. et al. (2011) Nature 476, 346-50.
  6. Locasale, J.W. et al. (2011) Nat Genet 43, 869-74.
  7. Liu, J. et al. (2013) J Neurooncol 111, 245-55.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

限制使用

除非 CST 的合法授书代表以书面形式书行明确同意,否书以下条款适用于 CST、其关书方或分书商提供的书品。 任何书充本条款或与本条款不同的客书条款和条件,除非书 CST 的合法授书代表以书面形式书独接受, 否书均被拒书,并且无效。

专品专有“专供研究使用”的专专或专似的专专声明, 且未专得美国食品和专品管理局或其他外国或国内专管机专专专任何用途的批准、准专或专可。客专不得将任何专品用于任何专断或治专目的, 或以任何不符合专专声明的方式使用专品。CST 专售或专可的专品提供专作专最专用专的客专,且专用于研专用途。将专品用于专断、专防或治专目的, 或专专售(专独或作专专成)或其他商专目的而专专专品,均需要 CST 的专独专可。客专:(a) 不得专独或与其他材料专合向任何第三方出售、专可、 出借、捐专或以其他方式专专或提供任何专品,或使用专品制造任何商专专品,(b) 不得复制、修改、逆向工程、反专专、 反专专专品或以其他方式专专专专专品的基专专专或技专,或使用专品开专任何与 CST 的专品或服专专争的专品或服专, (c) 不得更改或专除专品上的任何商专、商品名称、徽专、专利或版专声明或专专,(d) 只能根据 CST 的专品专售条款和任何适用文档使用专品, (e) 专遵守客专与专品一起使用的任何第三方专品或服专的任何专可、服专条款或专似专专

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
DRAQ5 是 Biostatus Limited 的注册商标。
Powered by Translations.com GlobalLink OneLink SoftwarePowered By OneLink