反应性 | All |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
一个独立实验室的实验表明,该抗体在 RNA-IP-seq 中有效。请按实验决定的稀释度使用。
保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。-20℃ 保存。切勿分装抗体。
注:编写本实验步骤是为了使用 96 孔点印迹仪,将纯化的总 RNA 或 poly A 纯化的 mRNA(滴定度为 2 ng、1 μg、500 ng、250 ng、125 ng、62.5 ng 和 31.25 ng)点样到带正电荷的尼龙膜上。根据 RNA 的来源,用抗体检测可能需要更多或更少的 RNA。
启动前:
• RNA 对 RNase 降解敏感,RNA 降解会影响样品的完整性。建议所有表面和设备都经过 RNase 净化处理。• 使用 RNA 分离试剂盒从细胞沉淀物中纯化总 RNA 和/或 mRNA。通过在 1% 琼脂糖凝胶上进行凝胶电泳来评估总 RNA 的质量。28S 和 18S RNA 应该呈现为不同的条带。涂片表明 RNA 降解。参见图 1。• 将一片尼龙膜切割成点印迹多管吸印仪的尺寸。
• 用 10X SSC 缓冲液润湿尼龙膜。• 通过在 96 孔点印迹仪中放置尼龙膜并施加真空,使其干燥。
可选:要使用亚甲基蓝标准化样品加载,请在 C 节第 1 步之前涂上染色剂并拍摄图像。用 15 mL dH 2 O 漂洗三次,每次 5 分钟。染色不影响抗体结合或检测。
注:由于检测反应的动力学,信号在孵育后最强并且在后续 2 小时内减弱。
图 1. 分离的、完整的总 RNA 的代表性图像。28S 和 18S RNA 应迁移为不同的条带。如果 RNA 表现为涂片,则样品可能会降解,不适合用于下游测定。泳道 1 是 NEB 100 bp DNA 阶梯,泳道 2 是从 293T 细胞分离的总 RNA。
发布时间 2018 年 11 月
实验步骤编号:1784
预期的所有物种
使用 N6-甲基腺苷对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
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