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70934
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit
一抗
抗体小包装组合

Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit #70934

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Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 1
使用 Cleaved Gasdermin D (Asp276) (E3E3P) Rabbit mAb(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对未经 (-) 或经Lipopolysaccharides (LPS) #14011(50 ng/ml,4 小时;+)处理后再用 Nigericin (sodium salt) #66419(15 μM,指定时间;+)处理的小鼠骨髓源性巨噬细胞 (mBMDM) 的提取物进行蛋白质印迹分析。
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使用 IL-1β (D3H1Z) Rabbit mAb (Mouse Specific) 对未经处理 (-) 或经 LPS 处理(1 μg/ml,过夜;+)的 Raw264.7 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
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使用 Caspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAb (上)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (下)对未处理 (-) 或经 Staurosporine #9953 (1 μM;3小时) 或 Etoposide #2200 (25 μM,过夜) 处理的不同细胞系进行蛋白质印迹分析。MCF7 细胞对 caspase-3 表达呈阴性。
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使用 Phospho-MLKL (Ser345) (D6E3G) Rabbit mAb(上图)、总 MLKL (D6W1K) Rabbit mAb (Mouse Specific) #37705(中图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对未经处理的 (-) 或经过以下组合处理方法处理的 L-929 细胞提取物进行蛋白质印迹分析:Z-VAD(20 μM,先于其他混合物 30 分钟添加;+)、Mouse Tumor Necrosis Factor-α (mTNF-α) #5178(20 ng/ml,4 小时;+)、SM-164(100 nM,4 小时;+)和 necrostatin-1(Nec-1,50 μM,4 小时;+)。
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使用 MLKL (D6W1K) Rabbit mAb (Mouse Specific) 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
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使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对对照小鼠骨髓衍生的巨噬细胞(泳道 1)或 Gasdermin D 基因剔除小鼠(泳道 2) mBMDM 的提取物进行蛋白印迹分析。Gasdermin D 基因敲除细胞中无信号证实了抗体对 Gasdermin D 的特异性。来自 Gasdermin D 基因敲除小鼠的 mBMDM 由马萨诸塞州大学伍斯特分校马萨诸塞大学医学院的 Douglas Golenbock 博士提供。
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使用 Cleaved-IL-1β (Asp117) (D7V2A) Rabbit mAb (Mouse Specific)(上图)或总 IL-1β (E3H1Z) Rabbit mAb (Mouse Specific) #12507(下图),对未经处理 (-) 或已经过 LPS #14011(50 ng/ml,4 小时)处理后用尼日利亚菌素(15 μM,45 分钟)处理 (+) 的小鼠骨髓源性巨噬细胞 (mBMDM) 的细胞提取物和培养基进行蛋白质印迹分析。
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一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
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使用 Phospho-RIP3 (Thr231/Ser232) (E7S1R) Rabbit mAb(上图)、RIP3 (D8J3L) Rabbit mAb #15828(中图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对未经处理 (-) 或经过以下所示的处理方法组合处理的 L-929 细胞 进行蛋白质印迹分析:Z-VAD (20 μM,先于其他化合物之前 30 分钟添加;+)、SM-164(100 nM,3 小时;+)和 mouse TNF-α(20 ng/ml,3 小时;+)。
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使用 RIP3 (D4G2A) Rabbit mAb 对转染空载 (-) 或转染全长小鼠 RIP3 (mRIP3; +) 的表达载体的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
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使用 IL-1β (D3H1Z) Rabbit mAb (Mouse Specific) 对 Mouse Interleukin-1β (mIL-1β) #5204 进行蛋白质印迹分析。
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使用 Caspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAb #14220(上图)和 α-Actinin (D6F6) XP® Rabbit mAb #6487(下图)对 HCT116 细胞(泳道 1)或 CASP3 敲除型细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白质印迹分析。CASP3 敲除型 HCT116 细胞中没有信号,这证实了该抗体对 CASP3 的特异性。
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使用 Phospho-MLKL (Ser345) (D6E3G) Rabbit mAb(绿色)对未处理的(左图)、已经 Z-VAD(20 μM,30 分钟)预处理后再用 SM-164 (100 nM) 和 Mouse Tumor Necrosis Factor-α (mTNF-α) #5178(20 ng/mL,2.5 小时;中间)处理,随后用 λ 磷酸酶处理(右图)的 L-929 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。红色 = Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution #4087(DNA 荧光染料)。
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对 BaF3 细胞的 MLKL 蛋白进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input,泳道 2 使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control # 3900 进行免疫沉淀,泳道 3 为 MLKL (D6W1K) Rabbit mAb (Mouse Specific)。使用 MLKL (D6W1K) Rabbit mAb (Mouse Specific) 进行蛋白质印迹分析。构象特异性二抗用于避免与 IgG 的反应性。
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使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174 (下图)对对照 PC-3 细胞(泳道 1)或 Gasdermin D 敲除型 PC-3 细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白印迹分析。Gasdermin D 敲除型 PC-3 细胞中没有信号,这证实了抗体对 Gasdermin D 的特异性。
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对经 LPS #14011(50 ng/ml,4 小时)处理,然后用尼日利亚菌素(15 μM,45 分钟)处理的小鼠骨髓源性巨噬细胞 (mBMDM) 的培养基提取物中剪切活化的 IL-1β (Asp117) 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% 输入,泳道 2 为兔 (DA1E) 单克隆抗体 IgG XP® 同型对照 #3900,泳道 3 为 Cleaved-IL-1β (Asp117) (E7V2A) 兔单克隆抗体(特定小鼠)。使用 Cleaved-IL-1β (Asp117) (E7V2A) 兔单克隆抗体(特定小鼠)进行蛋白印迹实验。抗兔 IgG, HRP-链接抗体 #7074 用作二抗。
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使用 Phospho-RIP3 (Thr231/Ser232) (E7S1R) 兔单克隆抗体(绿色)对未处理的(左图)、经 Z-VAD(20 μM,30 分钟)预处理后再经 SM-164 (100 nM) 和 Mouse Tumor Necrosis Factor-α (mTNF-α) #5178(20 ng/mL,2.25 小时;中间)处理,或经 Z-VAD 预处理后再经 SM-164 和 hTNF-α 处理,随后经 λ 磷酸酶处理(右图)的 L-929 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封片。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 18
使用 RIP3 (D4G2A) Rabbit mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 19
使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb(上图)、Cleaved Gasdermin D (Asp276) (E3E3P) Rabbit mAb #10137(中图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对未经 (-) 或经 Lipopolysaccharides (LPS) #14011(50 ng/ml,4 小时;+)处理后再用 Nigericin (sodium salt) #66419(15 μM,指定时间)处理的小鼠骨髓源性巨噬细胞 (mBMDM) 的提取物进行蛋白印迹分析。
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使用 RIP3 (D4G2A) Rabbit mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对野生型 (+) 或 RIP3 敲除型 (-) 小鼠脾脏细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。数据由马萨诸塞州波士顿哈佛大学医学院的 Junying Yuan 博士惠赠。
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使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对不同细胞系提取物进行蛋白印迹分析。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 22
对 L-929 细胞提取物 RIP3 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 RIP3 (D4G2A) Rabbit mAb。使用 RIP3 (D4G2A) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。构象特异性二抗用于避免与 IgG 的交叉反应性。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 23
使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对转染空载 (-) 或转染表达带有 Myc/DDK 标签的全长小鼠 Gasdermin D 蛋白 (mGSDMD-Myc/DDK; +) 的表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白印迹分析。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 24
使用 RIP3 (D4G2A) Rabbit mAb(绿色)对 L-929(左图)和 Neuro-2a(右图)细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 25
使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb(上图)、Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb #36425(中图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对通过 TPA (12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate) #4174 分化(50 ng/ml,过夜)然后经过脂多糖 (LPS) #14011 处理 (5 μg/ml,6 小时)的 THP-1 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 26
对 J774A.1 细胞提取物的 Gasdermin D 蛋白进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb。使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb 进行蛋白印迹分析。Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (HRP Conjugate) #5127 用作二抗。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 27
以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)作为对照,使用 RIPK3 mouse (D4G2A) Rabbit mAb(实线)对 Neuro2A 细胞(蓝色)和 L-929 细胞(绿色)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 28
使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb 对 J774A.1、CHO 和 BHK-211 细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
To Purchase # 70934T
目录# 规格 价格 库存
70934T
1 个试剂盒

产品包括 数量 应用 反应性 MW (kDa) 同型
MLKL (D6W1K) Rabbit mAb (Mouse Specific) 37705 20 µl
  • WB
  • IP
M 54 兔 IgG
Phospho-MLKL (Ser345) (D6E3G) Rabbit mAb 37333 20 µl
  • WB
  • IF
M 54 兔 IgG
Caspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAb 14220 20 µl
  • WB
  • IP
H M R Mk 35, 19, 17 兔 IgG
Phospho-RIP3 (Thr231/Ser232) (E7S1R) Rabbit mAb 91702 20 µl
  • WB
  • IF
M 46-62 兔 IgG
Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb 39754 20 µl
  • WB
  • IP
H M R Hm 53, 30 兔 IgG
Cleaved Gasdermin D (Asp276) (E3E3P) Rabbit mAb 10137 20 µl
  • WB
M 31 兔 IgG
IL-1β (D3H1Z) Rabbit mAb (Mouse Specific) 12507 20 µl
  • WB
M 17,31 兔 IgG
Cleaved-IL-1β (Asp117) (E7V2A) Rabbit mAb (Mouse Specific) 63124 20 µl
  • WB
  • IP
M 17 兔 IgG
RIP3 (D4G2A) Rabbit mAb 95702 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
  • F
M 46-62 兔 IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl
  • WB
山羊 

产品说明

Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit 提供了一种经济的方法来检测小鼠样品中 PANoptosis 的激活。该试剂盒包含的抗体足以使用每种一抗进行两次蛋白印迹实验。

特异性/灵敏度

Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit 中的每种抗体均可检测其靶标蛋白的内源水平。仅当 MLKL 蛋白在 Ser345 位点被磷酸化时,Phospho-MLKL (Ser345) (D6E3G) Rabbit mAb 才可检测小鼠 MLKL 蛋白的内源水平。在免疫荧光 (IF-IC) 实验中观察到微弱、非特异性胞核染色。Caspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAb 可识别 caspase-3 总蛋白的内源水平。该抗体可检测全长 Caspase-3 以及在凋亡过程中剪切产生的 Caspase-3 的大亚基 (p20)。Phospho-RIP3 (Thr231/Ser232) (E7S1R) 兔单克隆抗体可检测仅在 Thr231/Ser232 位点被磷酸化的 RIP3 蛋白的内源水平。该抗体可能无法检测仅在 Thr231 或 Ser232 被单磷酸化的 RIP3。Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb 可检测 Gasdermin D 总蛋白的内源水平。该抗体可识别在 caspase-1 焦亡期间产生的 30 kDa 氨基末端片段。仅当在 Asp276 位点裂解时,Cleaved Gasdermin D (Asp276) (E3E3P) Rabbit mAb 才可检测小鼠 Gasdermin D 蛋白的内源水平。IL-1β (D3H1Z) Rabbit mAb (Mouse Specific) 可检测小鼠 IL-1β 总蛋白的内源水平。这种抗体可检测到 500pg 的重组成熟小鼠 IL-1β。Cleaved-IL-1β (Asp117) (E7V2A) 兔单克隆抗体(特定小鼠)可检测仅在 Asp117 位点被剪切活化的小鼠 IL-1β 蛋白的内源水平。

来源/纯化

使用与小鼠 MLKL 羧基末端附近残基相对应的合成肽,或与小鼠 Gasdermin D 的 Leu60、小鼠 Gasdermin D 的 Asp276、小鼠 IL-1β 的 His124、小鼠 IL-1β的 Asp117、小鼠 RIP3 的 Val370 周围的残基相对应的合成肽,或与小鼠 MLKL 的 Ser345 和小鼠 RIP3 的 Thr231/Ser232 周围残基相对应的合成磷酸肽,或对人 caspase-3 蛋白的 p20 亚基具有特异性的重组蛋白,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

程序性细胞死亡 (PCD) 在机体发育和免疫反应中发挥重要作用。有三种主要的 PCD 通路:凋亡、焦亡和坏死性凋亡。凋亡是一种非炎症性细胞死亡,其特征在于一系列蛋白水解裂解,从启动型 caspase (caspase-8/9) 开始,然后是执行型 caspase (caspase-3/6/7),接着是裂解底物蛋白以驱动凋亡细胞死亡 (1,2)。在细胞焦亡期间,caspase-1 通过称为炎性体的蛋白质复合物被蛋白水解激活,然后激活的 caspase-1 可以裂解 Gasdermin D (GSDMD)、IL-1β 和 IL-18。从裂解中释放的 GSDMD N 端结构域在质膜中形成孔,以驱动裂解和成熟的 IL-1β 和 IL-18 的热解细胞裂解和释放,以及损伤相关分子模式 (DAMP) (3,4)。坏死性凋亡的关键步骤包括受体相互作用蛋白激酶 3 (RIPK3) 依赖的混合谱系激酶域样蛋白 (MLKL) 磷酸化、磷酸化 MLKL 易位至质膜和破坏质膜完整性 (5,6)。与细胞凋亡的非炎症性质相反,细胞焦亡和坏死性凋亡都是促炎性的方式 (7)。虽然对这些 PCD 通路的早期研究集中在它们独特的个体特征和潜在机制上,但最近的研究结果指出,在某些条件下,这些过程之间存在串扰和冗余,其中三种通路被激活,而不是相互独立,并且当一个通路被阻塞时,就会出现代偿反应。这种具有焦亡、凋亡和/或坏死性凋亡关键特征的新型 PCD 被称为 PANoptosis (8,9)。PANoptosis 是一种由称为 PANoptosome 的细胞质蛋白复合物驱动的协同细胞死亡途径,其成分提供支架和催化功能以参与焦亡、凋亡和/或坏死性凋亡 (10,11)。
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  10. Christgen, S. et al. (2020) Front Cell Infect Microbiol 10, 237.
  11. Samir, P. et al. (2020) Front Cell Infect Microbiol 10, 238.

通路与蛋白质

探索与本产品相关的通路 + 蛋白质。

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