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70934
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit
一抗
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Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit #70934

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使用 Caspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAb #14220 对经过细胞色素 C 处理的 Jurkat 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例在 1:10 和 1:50 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 2
使用 Cleaved Gasdermin D (Asp276) (E3E3P) Rabbit mAb（上图）或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图）对未经 (-) 或经Lipopolysaccharides (LPS) #14011（50 ng/ml，4 小时；+）处理后再用 Nigericin (sodium salt) #66419（15 μM，指定时间；+）处理的小鼠骨髓源性巨噬细胞 (mBMDM) 的提取物进行蛋白质印迹分析。
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使用 IL-1β (D3H1Z) Rabbit mAb 对未经处理 (-) 或经过 LPS（1 μg/ml，过夜；+）处理的 Raw 264.7 细胞提取物进行蛋白质印迹法分析。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 4
使用 Caspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAb （上）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 （下）对未处理 (-) 或经 Staurosporine #9953 (1 μM；3小时) 或 Etoposide #2200 (25 μM，过夜) 处理的不同细胞系进行蛋白质印迹分析。MCF7 细胞对 caspase-3 表达呈阴性。
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使用 Phospho-MLKL (Ser345) (D6E3G) Rabbit mAb（上图）、总 MLKL (D6W1K) Rabbit mAb (Mouse Specific) #37705（中图）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对未经处理的 (-) 或经过以下组合处理方法处理的 L-929 细胞提取物进行蛋白质印迹分析：Z-VAD（20 μM，先于其他混合物 30 分钟添加；+）、Mouse Tumor Necrosis Factor-α (mTNF-α) #5178（20 ng/ml，4 小时；+）、SM-164（100 nM，4 小时；+）和 necrostatin-1（Nec-1，50 μM，4 小时；+）。
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使用 MLKL (D6W1K) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹法分析。
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使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb（上图）或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图）对对照小鼠骨髓衍生的巨噬细胞（泳道 1）或 Gasdermin D 基因剔除小鼠（泳道 2） mBMDM 的提取物进行蛋白印迹分析。Gasdermin D 基因敲除细胞中无信号证实了抗体对 Gasdermin D 的特异性。来自 Gasdermin D 基因敲除小鼠的 mBMDM 由马萨诸塞州大学伍斯特分校马萨诸塞大学医学院的 Douglas Golenbock 博士提供。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 8
使用 Cleaved-IL-1β (Asp117) (D7V2A) Rabbit mAb（上图）或全部 IL-1β (E3H1Z) Rabbit mAb #12507（下图），对未经处理 (-) 或经过 LPS #14011（50 ng/ml，4 小时）处理后再用尼日利亚菌素（15 μM，45 分钟）处理 (+) 的小鼠骨髓源性巨噬细胞 (mBMDM) 的细胞提取物和培养基进行蛋白质印迹法分析。
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一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
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使用 Phospho-RIP3 (Thr231/Ser232) (E7S1R) Rabbit mAb（上图）、RIP3 (D8J3L) Rabbit mAb #15828（中图）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对未经处理 (-) 或经过以下所示的处理方法组合处理的 L-929 细胞 进行蛋白质印迹分析：Z-VAD （20 μM，先于其他化合物之前 30 分钟添加；+）、SM-164（100 nM，3 小时；+）和 mouse TNF-α（20 ng/ml，3 小时；+）。
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使用 RIP3 (D4G2A) Rabbit mAb 对转染空载 (-) 或转染全长小鼠 RIP3 (mRIP3; +) 的表达载体的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
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使用 IL-1β (D3H1Z) Rabbit mAb 对 Mouse Interleukin-1β (mIL-1β) #5204 进行蛋白质印迹法分析。
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使用 Caspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAb #14220（上图）和 α-Actinin (D6F6) XP® Rabbit mAb #6487（下图）对 HCT116 细胞（泳道 1）或 CASP3 敲除型细胞（泳道 2）的提取物进行蛋白质印迹分析。CASP3 敲除型 HCT116 细胞中没有信号，这证实了该抗体对 CASP3 的特异性。
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使用 Phospho-MLKL (Ser345) (D6E3G) Rabbit mAb（绿色）对未处理的（左图）、已经 Z-VAD（20 μM，30 分钟）预处理后再用 SM-164 (100 nM) 和 Mouse Tumor Necrosis Factor-α (mTNF-α) #5178（20 ng/mL，2.5 小时；中间）处理，随后用 λ 磷酸酶处理（右图）的 L-929 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。红色 = Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution #4087（DNA 荧光染料）。
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对 BaF3 细胞的 MLKL 蛋白进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input，泳道 2 使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control # 3900 进行免疫沉淀，泳道 3 为 MLKL (D6W1K) Rabbit mAb。使用 MLKL (D6W1K) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹法分析。构象特异性二抗用于避免与 IgG 的反应性。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 16
使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb（上图）或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174 （下图）对对照 PC-3 细胞（泳道 1）或 Gasdermin D 敲除型 PC-3 细胞（泳道 2）的提取物进行蛋白印迹分析。Gasdermin D 敲除型 PC-3 细胞中没有信号，这证实了抗体对 Gasdermin D 的特异性。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 17
对经 LPS #14011（50 ng/ml，4 小时）处理，然后用尼日利亚菌素（15 μM，45 分钟）处理的小鼠骨髓源性巨噬细胞 (mBMDM) 的培养基提取物中剪切活化的 IL-1β (Asp117) 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 Cleaved-IL-1β (Asp117) (E7V2A) Rabbit mAb。使用 Cleaved-IL-1β (Asp117) (E7V2A) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹法分析。抗兔 IgG, HRP-链接抗体 #7074 用作二抗。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 18
使用 Phospho-RIP3 (Thr231/Ser232) (E7S1R) 兔单克隆抗体（绿色）对未处理的（左图）、经 Z-VAD（20 μM，30 分钟）预处理后再经 SM-164 (100 nM) 和 Mouse Tumor Necrosis Factor-α (mTNF-α) #5178（20 ng/mL，2.25 小时；中间）处理，或经 Z-VAD 预处理后再经 SM-164 和 hTNF-α 处理，随后经 λ 磷酸酶处理（右图）的 L-929 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961（蓝色）封片。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 19
使用 RIP3 (D4G2A) Rabbit mAb（上图）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图），对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 20
使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb（上图）、Cleaved Gasdermin D (Asp276) (E3E3P) Rabbit mAb #10137（中图）或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图）对未经 (-) 或经 Lipopolysaccharides (LPS) #14011（50 ng/ml，4 小时；+）处理后再用 Nigericin (sodium salt) #66419（15 μM，指定时间）处理的小鼠骨髓源性巨噬细胞 (mBMDM) 的提取物进行蛋白印迹分析。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 21
使用 RIP3 (D4G2A) Rabbit mAb（上图）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图），对野生型 (+) 或 RIP3 敲除型 (-) 小鼠脾脏细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。数据由马萨诸塞州波士顿哈佛大学医学院的 Junying Yuan 博士惠赠。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 22
使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb（上图）或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图）对不同细胞系提取物进行蛋白印迹分析。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 23
对 L-929 细胞提取物 RIP3 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 RIP3 (D4G2A) Rabbit mAb。使用 RIP3 (D4G2A) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。构象特异性二抗用于避免与 IgG 的交叉反应性。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 24
使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb（上图）或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图）对转染空载 (-) 或转染表达带有 Myc/DDK 标签的全长小鼠 Gasdermin D 蛋白 (mGSDMD-Myc/DDK; +) 的表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白印迹分析。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 25
使用 RIP3 (D4G2A) Rabbit mAb（绿色）对 L-929（左图）和 Neuro-2a（右图）细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 26
使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb（上图）、Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb #36425 （中图）或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图），对通过 TPA (12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate) #4174 分化（50 ng/ml，过夜）然后经过脂多糖 (LPS) #14011 处理 （5 μg/ml，6 小时）的 THP-1 细胞提取物进行蛋白印迹分析。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 27
对 J774A.1 细胞提取物的 Gasdermin D 蛋白进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb。使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb 进行蛋白印迹分析。Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (HRP Conjugate) #5127 用作二抗。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 28
以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）作为对照，使用 RIPK3 mouse (D4G2A) Rabbit mAb（实线）对 Neuro2A 细胞（蓝色）和 L-929 细胞（绿色）进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 29
使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb 对 J774A.1、CHO 和 BHK-211 细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
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定制制剂

产品包括 数量 应用 反应性 MW (kDa) 同型
MLKL (D6W1K) Rabbit mAb 37705 20 µl
  • WB
  • IP
 M 54 兔 IgG
Phospho-MLKL (Ser345) (D6E3G) Rabbit mAb 37333 20 µl
  • WB
  • IF
 M 54 兔 IgG
Caspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAb 14220 20 µl
  • WB
  • IP
 H M R Mk 35, 19, 17 兔 IgG
Phospho-RIP3 (Thr231/Ser232) (E7S1R) Rabbit mAb 91702 20 µl
  • WB
  • IF
 M 46-62 兔 IgG
Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb 39754 20 µl
  • WB
  • IP
 H M R Hm 53, 30 兔 IgG
Cleaved Gasdermin D (Asp276) (E3E3P) Rabbit mAb 10137 20 µl
  • WB
 M 31 兔 IgG
IL-1β (D3H1Z) Rabbit mAb 12507 20 µl
  • WB
 M 17,31 兔 IgG
Cleaved-IL-1β (Asp117) (E7V2A) Rabbit mAb 63124 20 µl
  • WB
  • IP
 M 17 兔 IgG
RIP3 (D4G2A) Rabbit mAb 95702 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
  • F
 M 46-62 兔 IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl
  • WB
 Rab 山羊 

产品说明

Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit 提供了一种经济的方法来检测小鼠样品中 PANoptosis 的激活。该试剂盒包含的抗体足以使用每种一抗进行两次蛋白印迹实验。

特异性/灵敏度

Mouse Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit 中的每种抗体均可检测其靶标蛋白的内源水平。仅当 MLKL 蛋白在 Ser345 位点被磷酸化时，Phospho-MLKL (Ser345) (D6E3G) Rabbit mAb 才可检测小鼠 MLKL 蛋白的内源水平。在免疫荧光 (IF-IC) 实验中观察到微弱、非特异性胞核染色。Caspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAb 可识别 caspase-3 总蛋白的内源水平。该抗体可检测全长 Caspase-3 以及在凋亡过程中剪切产生的 Caspase-3 的大亚基 (p20)。Phospho-RIP3 (Thr231/Ser232) (E7S1R) 兔单克隆抗体可检测仅在 Thr231/Ser232 位点被磷酸化的 RIP3 蛋白的内源水平。该抗体可能无法检测仅在 Thr231 或 Ser232 被单磷酸化的 RIP3。Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb 可检测 Gasdermin D 总蛋白的内源水平。该抗体可识别在 caspase-1 焦亡期间产生的 30 kDa 氨基末端片段。仅当在 Asp276 位点裂解时，Cleaved Gasdermin D (Asp276) (E3E3P) Rabbit mAb 才可检测小鼠 Gasdermin D 蛋白的内源水平。IL-1β (D3H1Z) Rabbit mAb (Mouse Specific) 可检测小鼠 IL-1β 总蛋白的内源水平。这种抗体可检测到 500pg 的重组成熟小鼠 IL-1β。Cleaved-IL-1β (Asp117) (E7V2A) 兔单克隆抗体（特定小鼠）可检测仅在 Asp117 位点被剪切活化的小鼠 IL-1β 蛋白的内源水平。

来源/纯化

使用与小鼠 MLKL 羧基末端附近残基相对应的合成肽，或与小鼠 Gasdermin D 的 Leu60、小鼠 Gasdermin D 的 Asp276、小鼠 IL-1β 的 His124、小鼠 IL-1β的 Asp117、小鼠 RIP3 的 Val370 周围的残基相对应的合成肽，或与小鼠 MLKL 的 Ser345 和小鼠 RIP3 的 Thr231/Ser232 周围残基相对应的合成磷酸肽，或对人 caspase-3 蛋白的 p20 亚基具有特异性的重组蛋白，对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

程序性细胞死亡 (PCD) 在机体发育和免疫反应中发挥重要作用。有三种主要的 PCD 通路：凋亡、焦亡和坏死性凋亡。凋亡是一种非炎症性细胞死亡，其特征在于一系列蛋白水解裂解，从启动型 caspase (caspase-8/9) 开始，然后是执行型 caspase (caspase-3/6/7)，接着是裂解底物蛋白以驱动凋亡细胞死亡 (1,2)。在细胞焦亡期间，caspase-1 通过称为炎性体的蛋白质复合物被蛋白水解激活，然后激活的 caspase-1 可以裂解 Gasdermin D (GSDMD)、IL-1β 和 IL-18。从裂解中释放的 GSDMD N 端结构域在质膜中形成孔，以驱动裂解和成熟的 IL-1β 和 IL-18 的热解细胞裂解和释放，以及损伤相关分子模式 (DAMP) (3,4)。坏死性凋亡的关键步骤包括受体相互作用蛋白激酶 3 (RIPK3) 依赖的混合谱系激酶域样蛋白 (MLKL) 磷酸化、磷酸化 MLKL 易位至质膜和破坏质膜完整性 (5,6)。与细胞凋亡的非炎症性质相反，细胞焦亡和坏死性凋亡都是促炎性的方式 (7)。虽然对这些 PCD 通路的早期研究集中在它们独特的个体特征和潜在机制上，但最近的研究结果指出，在某些条件下，这些过程之间存在串扰和冗余，其中三种通路被激活，而不是相互独立，并且当一个通路被阻塞时，就会出现代偿反应。这种具有焦亡、凋亡和/或坏死性凋亡关键特征的新型 PCD 被称为 PANoptosis (8,9)。PANoptosis 是一种由称为 PANoptosome 的细胞质蛋白复合物驱动的协同细胞死亡途径，其成分提供支架和催化功能以参与焦亡、凋亡和/或坏死性凋亡 (10,11)。
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  11. Samir, P. et al. (2020) Front Cell Infect Microbiol 10, 238.

通路与蛋白质

探索与本产品相关的通路 + 蛋白质。

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