试剂盒使用信息
实验步骤
7074: 蛋白印迹实验
9664: 蛋白印迹实验 , 免疫沉淀法(琼脂糖) , 免疫组织化学(石蜡) , 免疫荧光法 , 流式细胞术
10137: 蛋白印迹实验
23214: 蛋白印迹实验 , 免疫沉淀法(琼脂糖) , 免疫组织化学(石蜡) , 免疫荧光法*
37333: 蛋白印迹实验 , 免疫荧光法
53286: 蛋白印迹实验 , 免疫沉淀法(琼脂糖)
63124: 蛋白印迹实验 , 免疫沉淀法(琼脂糖)
83506: 蛋白印迹实验 , 免疫沉淀法(磁珠) , 免疫组织化学(石蜡) , IF-F 柠檬酸盐检索(小鼠) , 免疫荧光法* , 流式细胞术、用于兔子的甲醇固定
91702: 蛋白印迹实验 , 免疫荧光法
94885: 蛋白印迹实验 , 免疫沉淀法(琼脂糖) , 免疫组织化学(石蜡) , 免疫荧光法 , 流式细胞术
产品说明
Mouse Reactive Cell Death and Autophagy Antibody Sampler Kit 提供了一种经济的方法来检测细胞凋亡、坏死性凋亡、细胞焦亡和自噬中的常见读出。该试剂盒包含的抗体足以使用每种一抗进行两次蛋白印迹实验。
特异性/灵敏度
Mouse Reactive Cell Death 和 Autophagy Antibody Sampler Kit 中的每种抗体均可检测其靶标蛋白的内源水平。Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 可检测 Asp175 附近裂解活化产生的内源水平的活化 caspase-3 中大片段 (17/19 kDa) 。该抗体无法检测全长 caspase-3 或其他剪切的半胱天冬酶。Cleaved PARP (Asp214) (D6X6X) Rabbit mAb 仅在 Asp214 位点被裂解时才可识别 PARP 大片段 (89 kDa) 的内源水平。仅当在 Asp276 位点裂解时,Cleaved Gasdermin D (Asp276) (E3E3P) Rabbit mAb 才可检测小鼠 Gasdermin D 蛋白的内源水平。Cleaved-IL-1β (Asp117) (E7V2A) 兔单克隆抗体(特定小鼠)可检测仅在 Asp117 位点被剪切活化的小鼠 IL-1β 蛋白的内源水平。Phospho-RIP3 (Thr231/Ser232) (E7S1R) 兔单克隆抗体可检测仅在 Thr231/Ser232 位点被磷酸化的 RIP3 蛋白的内源水平。该抗体可能无法检测仅在 Thr231 或 Ser232 被单磷酸化的 RIP3。Phospho-RIP (Ser166) (E7G6O) Rabbit mAb 仅在 RIP 蛋白在 Ser166 位点被磷酸化时方可识别内源水平的 RIP 蛋白。仅当 MLKL 蛋白在 Ser345 位点被磷酸化时,Phospho-MLKL (Ser345) (D6E3G) Rabbit mAb 才可检测小鼠 MLKL 蛋白的内源水平。在免疫荧光 (IF-IC) 实验中观察到微弱、非特异性胞核染色。LC3B (E5Q2K) Mouse mAb 可检测 LC3B 的 I 型和 II 型。检测不到与其他家族成员的交叉反应性。SQSTM1/p62 (D6M5X) Rabbit mAb (Rodent Specific) 可识别内源水平的啮齿类 SQSTM1/p62 总蛋白。
来源/纯化
使用与人 caspase-3 的 Asp175、啮齿动物 PARP 的 Asp214、小鼠 Gasdermin D 的 Asp276、小鼠 IL-1β 的 Asp117、小鼠 SQSTM1/p62 的 Gly300 周围残基、人 LC3B 氨基末端附近的残基相对应的合成肽以及鼠 RIP 的 Ser166、鼠 RIP3 的 Thr231/Ser232、鼠 MLKL 的 Ser345 相对应的合成磷酸肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
背景
已根据不同的形态学和生化途径对受调节的细胞死亡进行了分类 (1)。I 型细胞死亡或凋亡的特征在于胞质收缩、染色质凝集、核碎裂、质膜起泡和死细胞吞噬更新。凋亡可通过涉及细胞外因子的外在途径发生,包括死亡受体的激活,或者通过涉及细胞内扰动的内在途径发生,包括线粒体外膜通透性 (2)。这两种凋亡途径均导致 caspase 的激活,caspase 是一类半胱氨酸蛋白酶,被合成为含有原结构域的无活性酶原,随后是大的 (p20) 和小的 (p10) 亚基,它们以级联方式被蛋白水解激活。Caspase-3 是一种关键的下游蛋白酶,可通过外在和内在的凋亡途径激活,并裂解与细胞分解有关的大量蛋白质,包括聚(腺苷二磷酸 -核糖)聚合酶 (PARP),即与 DNA 损伤应答有关的蛋白质。
II 型细胞死亡或自噬表现为广泛的细胞质空泡化,并像凋亡一样,可能包括吞噬更新。自噬是一种分解代谢过程,可降解包括蛋白质聚集体、受损细胞器和病原体在内的细胞组分 (3)。该过程涉及将这些组分吞噬入双层膜结构,即自噬小体,其与溶酶体融合以降解。自噬需要并可以通过 LC3 家族成员(如 LC3B)从 I 型转化为脂化的 II 型形式的转化来监测,该脂化 II 型形式并入自噬体膜并与多种运货受体结合。SQSTM1/p62 等运货受体将 LC3 与靶向降解的泛素化蛋白结合在一起。在此过程中,SQSTM1/p62也会降解,因此它的表达经常用于监测此过程。
III 型细胞死亡或坏死表现为质膜通透性以及细胞肿胀和碎裂,缺乏明显的吞噬反应,继而导致炎症信号传导,并伴随着损伤相关分子模式 (DAMP) 的释放。坏死可由多种调控途径触发,包括坏死性凋亡和细胞焦亡。坏死性凋亡受 RIP 和 RIP3 激酶活性和 MLKL 的孔形成能力的调节 (4)。坏死性凋亡需要激活 RIP3,然后 RIP3 磷酸化 Ser358(小鼠中的 Ser345)的 MLKL。MLKL 的磷酸化导致与细胞膨胀和 DAMP 的分泌有关的孔复合物的产生。RIP3 激活是通过几个 RIP 同型相互作用基序 (RHIM) 结构域相互作用触发的,包括 RIP、TRIF 和 ZBP1,并导致 RIP3 在 Ser227(小鼠中的 Thr231/Ser232)的磷酸化。典型坏死性凋亡信号转导是由 RIP 介导的,它可以被 necrostatin(一种直接抑制 RIP 激酶活性的小分子)抑制。RIP 激活可通过包括 Ser166 在内的自磷酸化位点监测。细胞焦亡通常在先天免疫系统的细胞中被诱导,其特征是对 Gasdermin D 的裂解 (5)。在被炎性 caspase (Caspase-1, -4, -5) 剪切后产生的 Gastermin D 的氨基末端片段低聚形成孔。Gasdermin D 的典型剪切通过两步过程进行。第一步涉及靶标如 NLRP3 以及 IL-1β 和 IL-18 前体的转录调控。在第二个执行步骤中,通过形成炎性体复合物激活 Caspase-1。活化的 Caspase-1 将 Gasdermin D 以及 IL-1β 和 IL-18 裂解为它们的成熟形式,并且这些活性细胞因子通过 Gasdermin D 形成的孔分泌。
Galluzzi, L. et al. (2018) Cell Death Differ 25, 486-541.
Green, D.R. (1998) Cell 94, 695-8.
Codogno, P. and Meijer, A.J. (2005) Cell Death Differ 12 Suppl 2, 1509-18.
Shan, B. et al. (2018) Genes Dev 32, 327-40.
Shi, J. et al. (2017) Trends Biochem Sci 42, 245-54.
通路与蛋白质
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选择您的通路/蛋白质
阿尔茨海默病
凋亡调控
自噬信号转导
死亡受体信号转导
ErbB/HER 信号传导
凋亡的抑制
凋亡的线粒体控制
蛋白质:P10749
蛋白质:P11103
蛋白质:P42574
蛋白质:Q60855
蛋白质:Q64337
蛋白质:Q9D2Y4
蛋白质:Q9D8T2
蛋白质:Q9GZQ8
蛋白质:Q9QZL0
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