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34596
Mouse CD28 Activating (37.51) Hamster mAb (Low Endotoxin, Azide-free)
一抗
单克隆抗体

Mouse CD28 Activating (37.51) Hamster mAb (Low Endotoxin, Azide-free) #34596

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To Purchase # 34596S
目录# 规格 价格 库存
34596S
100 µg

支持性数据

反应性 M
灵敏度
MW (kDa)
来源/同种型 Hamster (syrian) IgG

应用关键词:

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品说明

内毒素 小于或等于 0.01 EU/μg,通过 LaL 测定来确定。

剂型

在 10 mM NaH2PO4、150 mM NaCl(pH 为 7.2)中供应,内毒素低,无叠氮化物。

保存

保存在 4°C 时,可保持稳定 12 个月。切勿分装抗体。‭

实验步骤

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A. 溶液与试剂

  1. Mouse CD3ε Activating (145-2C11) Hamster mAb (Low Endotoxin, Azide-free) #35425
  2. Mouse CD28 Activating (37.51) Hamster mAb (Low Endotoxin, Azide-free) #34596

B. 刺激实验步骤:基于平板

  • 在无菌 PBS 中配制 CD3ε Activating (145-2C11) Hamster mAb (Low Endotoxin, Azide-free) #35425 的 10 µg/ml 溶液。准备足够的体积以覆盖孔底部,用于刺激 T 细胞(96 孔板大约为 50 µl,6 孔板为 1 ml)。
  • 将稀释的 CD3ε (145-2C11) 抗体溶液添加到选择用于处理的孔中。将等量的无菌 PBS 添加到选择作为处理对照的孔中。
  • 盖上平板并在 37 °C 孵育至少 2 小时。如果需要,可以允许平板孵育过夜。
  • 根据需要制备细胞,以在足够体积的完整培养基中生成大约 1 x 106 细胞/ml 的细胞悬液(对于 96 孔板,每孔 100 µl;{ut6 } ml 用于 6 孔板)。最佳细胞密度可以使用待研究的细胞进行预实验来确定。对于 T 细胞扩充,将 Mouse IL-2 Recombinant Protein #68966 添加到细胞悬液中,以产生 20 ng/ml 终浓度。
  • 从孔中吸出 CD3ε (145-2C11) 抗体溶液,并将孔用过量的无菌 PBS 冲洗 2 次,以移除未结合的抗体。
  • 按步骤 4 中指定的体积或通过实验确定的体积,将细胞悬浮液添加到所有孔中。
  • 添加 Mouse CD28 Activating (37.51) Hamster mAb (Low Endotoxin, Azide-free) #34596 以产生 2 µg/ml 的浓度。如果需要,在完全培养基中预稀释 CD28 (37.51) 抗体。如果需要,也可以将 CD28 抗体添加到一部分对照孔中。
  • 将细胞在加湿的培养箱,37°C,5% CO2孵育所需的时间。根据 T 细胞扩充需要,添加含 IL-2 的新鲜培养基。
  • 收集细胞,然后根据需要进行免疫染色或分析。

实验步骤编号:2865

特异性/灵敏度

Mouse CD28 Activating (37.51) Hamster mAb (Low Endotoxin, Azide-free) 可识别内源水平的 CD28 蛋白。

物种反应性:

小鼠

来源/纯化

产生针对小鼠 T 细胞淋巴瘤 EL4 细胞的单克隆抗体,并通过亲和层析法纯化。

背景

CD28 是一种由 T 细胞及一些其他造血细胞表达的跨膜糖蛋白 (1,2)。T 细胞激活需要 T 细胞受体 (TCR) 识别 MHC 分子环境中存在的抗原。CD28 是一种 T 细胞协同刺激受体,CD28 与其配体 CD80 或 CD86 的相互作用可提供初始 T 细胞激活所需的第二信号 (3-5)。在没有 CD28 刺激的情况下,激活初始 T 细胞会导致出现 T 细胞无能或无反应的状态 (3)。CD28 通过细胞浆磷酸酪氨酸基序发送信号,这些基序可结合参与 T 细胞激活的且包含多个 SH2 或 SH3 结构域的蛋白 (2)。目前,研究表明 CD28 是 PD-1 介导的去磷酸化过程中的一个首选靶标。一致地,PD-1 阻断后,T 细胞增殖需要 CD28 表达,并且小鼠中有效的抗 PD-1 癌症免疫治疗需要 CD28 刺激 (6,7)。选择性剪切会产生许多 CD28 同工型 (8)。
  1. Aruffo, A. and Seed, B. (1987) Proc Natl Acad Sci U S A 84, 8573-7.
  2. Esensten, J.H. et al. (2016) Immunity 44, 973-88.
  3. Harding, F.A. et al. (1992) Nature 356, 607-9.
  4. Azuma, M. et al. (1993) Nature 366, 76-9.
  5. Linsley, P.S. et al. (1990) Proc Natl Acad Sci U S A 87, 5031-5.
  6. Hui, E. et al. (2017) Science 355, 1428-1433.
  7. Kamphorst, A.O. et al. (2017) Science 355, 1423-1427.
  8. Magistrelli, G. et al. (1999) Biochem Biophys Res Commun 259, 34-7.

通路与蛋白质

探索与本产品相关的通路 + 蛋白质。

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