Mouse CD28 Activating (37.51) Hamster mAb (Low Endotoxin, Azide-free) #34596

A. 溶液与试剂

1. Mouse CD3ε Activating (145-2C11) Hamster mAb (Low Endotoxin, Azide-free) #35425
2. Mouse CD28 Activating (37.51) Hamster mAb (Low Endotoxin, Azide-free) #34596

B. 刺激实验步骤：基于平板

• 在无菌 PBS 中配制 CD3ε Activating (145-2C11) Hamster mAb (Low Endotoxin, Azide-free) #35425 的 10 µg/ml 溶液。准备足够的体积以覆盖孔底部，用于刺激 T 细胞（96 孔板大约为 50 µl，6 孔板为 1 ml）。
• 将稀释的 CD3ε (145-2C11) 抗体溶液添加到选择用于处理的孔中。将等量的无菌 PBS 添加到选择作为处理对照的孔中。
• 盖上平板并在 37 °C 孵育至少 2 小时。如果需要，可以允许平板孵育过夜。
• 根据需要制备细胞，以在足够体积的完整培养基中生成大约 1 x 10⁶ 细胞/ml 的细胞悬液（对于 96 孔板，每孔 100 µl；{ut6 } ml 用于 6 孔板）。最佳细胞密度可以使用待研究的细胞进行预实验来确定。对于 T 细胞扩充，将 Mouse IL-2 Recombinant Protein #68966 添加到细胞悬液中，以产生 20 ng/ml 终浓度。
• 从孔中吸出 CD3ε (145-2C11) 抗体溶液，并将孔用过量的无菌 PBS 冲洗 2 次，以移除未结合的抗体。
• 按步骤 4 中指定的体积或通过实验确定的体积，将细胞悬浮液添加到所有孔中。
• 添加 Mouse CD28 Activating (37.51) Hamster mAb (Low Endotoxin, Azide-free) #34596 以产生 2 µg/ml 的浓度。如果需要，在完全培养基中预稀释 CD28 (37.51) 抗体。如果需要，也可以将 CD28 抗体添加到一部分对照孔中。
• 将细胞在加湿的培养箱，37°C，5% CO₂孵育所需的时间。根据 T 细胞扩充需要，添加含 IL-2 的新鲜培养基。
• 收集细胞，然后根据需要进行免疫染色或分析。