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58970
Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated)
一抗
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Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated) #58970

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筛选器：
  1. IHC
Immunohistochemistry Image 1: Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated)
在 Leica® BOND™ Rx 上使用 Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated) 对石蜡包埋的人肺内分泌神经癌细胞进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 2: Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated)
在 Leica® BOND™ Rx 上使用 IIba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated)（左图）或 Iba1/AIF-1 (E4O4W) XP® Rabbit mAb #17198（右图）对石蜡包埋的人卵巢透明细胞癌组织进行免疫组织化学分析。这两种抗体可检测人 Iba1/AIF-1 上的独立、独特表位。使用两种抗体获得的相似染色模式有助于确认染色特异性。
Immunohistochemistry Image 1: Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated)
使用 Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated) 对石蜡包埋的正常恒河猴脾脏进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 2: Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated)
使用 Iba1/AIF-1 (E5N4J) 对石蜡包埋的正常人脑进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 3: Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated)
使用 Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated) 对石蜡包埋的 THP-1 细胞沉淀物（左图，阳性）或 SH-SY5Y 细胞沉淀物（右图，阴性）进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 4: Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated)
以浓度匹配的 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415（右图）作为对照，Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated)（左图）对石蜡包埋的人结肠腺癌进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 5: Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated)
使用 Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated) 对石蜡包埋的人咽喉粘液表皮样癌进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 6: Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated)
在 Leica® BOND™ Rx上使用 Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated) 对石蜡包埋的人非霍奇金氏淋巴瘤细胞进行免疫组织化学分析。
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58970S		 100 µl

定制制剂

支持性数据

反应性 H Mk
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 小鼠 IgG1、kappa

应用关键词：

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词：

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品使用信息

应用 稀释度
IHC Leica BOND 1:100 - 1:400
免疫组织化学（石蜡） 1:100 - 1:400

保存

保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。保存在 –20°C 下。请不要分装抗体。

有关此产品的无载体（无 BSA 和无叠氮化物）版本，请参阅产品 #26423。

实验步骤

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免疫组织化学法 (Leica®BOND™)

注：请参阅产品数据表或产品网页，了解合适的抗体稀释度^。

  步骤 试剂 时间/温度
1 脱蜡 BOND™ Dewax Solution、100% 乙醇、BOND™ Wash Solution 预编程的 Leica® BOND™ 
2 抗原修复  BOND™ Epitope Retrieval ER2 Solution 20 分钟，100˚C | 实验步骤：用 ER2 进行 HIER 20 分钟
3 过氧化物封闭液 Polymer Refine Detection Kit Peroxide Block* 5 分钟
  洗涤 BOND™ Wash Solution  3x 0:00 分钟
4 蛋白封闭液（可选） #5425 NGS 或 #15019 Animal-Free Blocking Solution   20 分钟 
5 一抗^ 用 #8112 SignalStain® Antibody Diluent 稀释 30 分钟 
  洗涤 BOND™ Wash Solution  3x 2:00 分钟
6 Post Primary Mouse Linker Polymer Refine Detection Kit Post Primary*  10 分钟 
  洗涤 BOND™ Wash Solution  3x 2:00 分钟
7 二次检测 Polymer Refine Detection Kit Polymer*  10 分钟 
  洗涤 BOND™ Wash Solution/Deionized Water 定制（参见下文）
8a 可视化 Polymer Refine Detection Kit Mixed DAB Refine*  0:00 分钟 
8b 可视化 Polymer Refine Detection Kit Mixed DAB Refine*  10 分钟 
  洗涤 去离子水 3x 0:00 分钟
9 复染 Polymer Refine Detection Kit Hematoxylin*  5 分钟 
  洗涤 去离子水 0:00 分钟 
  洗涤 BOND™ Wash Solution  0:00 分钟 
  洗涤 去离子水 0:00 分钟 
10 脱水（离线）：    
  在 95% 乙醇中孵育切片 2 次，每次 10 秒。  
  在 100% 乙醇中重复孵育 2 次，每次 10 秒。  
  在二甲苯中重复孵育 2 次，每次 10 秒。  
11 用盖玻片和 #14177 SignalStain® Mounting Medium 封片。  
       
  可选订制洗涤： BOND™ Wash Solution 2:00
    BOND™ Wash Solution 分配器类型：打开 0：00
    BOND™ Wash Solution 2:00
    BOND™ Wash Solution 分配器类型：打开 0：00
    BOND™ Wash Solution 0:00
    去离子水 0:00

*BOND™ Polymer Refine Detection Kit（货号：DS9800）中所含的试剂

LEICA® 是 Leica Microsystems IR GmbH 的注册商标。

BOND™ 是 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 的商标。CST 和 Leica Microsystems IR GmbH 或 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 之间没有附属或赞助关系。

发布​时间 2018 年 8 月

修订时间 2018 年 9 月

实验步骤编号：1445

免疫组织化学（石蜡）

A. 溶液与试剂

注：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 二甲苯。
  2. 无水变性乙醇，组织级（100% 和 95%）。
  3. 去离子水 (dH2O)。
  4. 苏木精（可选）。
  5. 洗涤缓冲液：
    1. 含 Tween® 20 (TBST) 的 1X Tris 盐缓冲液：要制备 1L 1X TBST，添加 100 ml 含 Tween® 20 的 10 X Tris 盐缓冲液 (#9997) 至 900 ml dH20 中并混合。
  6. SignalStain® Antibody Diluent (#8112)。
  7. 1X 柠檬酸盐修复液：要制备 250 mL 的 1X 柠檬酸盐修复液，将 25 ml 的 SignalStain® Citrate Unmasking Solution (10X) (#14746) 稀释到 225 mL 的 dH2O 中。
  8. 3% 过氧化氢：要制备 100 ml，添加 10 ml 30% H2O2 至 90 ml dH2O 中。
  9. 封闭液：TBST/5% Normal Goat Serum 或 1X Animal-Free Blocking Solution。
    1. TBST/5% Normal Goat Serum：要制备 5 ml 1X TBST，添加 250 µl Normal Goat Serum (#5425)。
    2. 1X Animal-Free Blocking Solution：要制备 4 mL of dH2O，添加 1 ml 的 Animal-Free Blocking Solution (5X) (#15019)。
  10. 检测系统：SignalStain® Boost IHC Detection Reagents (HRP, Mouse #8125)。
  11. 底物：SignalStain® DAB Substrate Kit (#8059)。
  12. 苏木精： Hematoxylin (#14166)。
  13. 封片剂： SignalStain® Mounting Medium (#14177)。

B. 脱蜡/复水

注意：在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。

  1. 脱蜡/水化合步骤：
    1. 将切片放入二甲苯的洗液中孵育 3 次，每次 5 分钟。
    2. 将切片放入 100% 乙醇中孵育切片 2 次，每次 10 分钟。
    3. 将切片放入 95% 乙醇中孵育切片 2 次，每次 10 分钟。
  2. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

C. 抗原修复

对于柠檬酸盐：将切片浸入 1 X 柠檬酸盐修复液，再放入微波炉中加热直至沸腾；继续保持亚沸腾温度 10 分钟 (95°-98°C)。在实验台上冷却切片 30 分钟。

D. 染色

  1. 用 dH2O 清洗切片三次，每次 5 分钟。
  2. 切片放入 3 % 过氧化氢水溶液中，孵育 10 分钟。
  3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
  4. 用洗涤缓冲液清洗切片持续 5 分钟。
  5. 使用 100–400 µl 封闭液将每张切片在室温下封闭 1 小时。
  6. 去除封闭液，并给每块切片添加 100–400 µl 在 SignalStain® Antibody Diluent (#8112) 中稀释过的一抗。4°C 孵育过夜。
  7. 让 SignalStain® Boost Detection Reagent (HRP, Mouse #8125) 平衡至室温。
  8. 清除抗体溶液，用洗涤缓冲液清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
  9. 按需在切片上滴 1–3 滴 SignalStain® Boost Detection Reagent (HRP, Mouse #8125)。在加湿箱中室温孵育 30 分钟。
  10. 用洗涤缓冲液清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
  11. 加入 1 滴 (30 µl) SignalStain® DAB Chromogen Concentrate 至 1 ml 的 SignalStain® DAB Diluent 中，使用前充分混合。
  12. 在每张切片上应用 100–400 µl SignalStain® DAB，并密切观察，通常 1–10 分钟即可得到合适的染色强度。
  13. 将切片浸入 dH2O 中。
  14. 如果需要，使用 hematoxylin (#14166) 复染切片。
  15. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
  16. 使切片脱水：
    1. 在 95% 乙醇中孵育切片 2 次，每次 10 秒。
    2. 在 100% 乙醇中重复孵育 2 次，每次 10 秒。
    3. 在二甲苯中重复孵育 2 次，每次 10 秒。
  17. 使用盖玻片和封片剂 (#14177) 封片。

检测试剂/底物兼容性
推荐的
检测试剂		 SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Mouse) #8125 SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (AP, Mouse) #31926
兼容的
色原		 SignalStain® DAB Substrate Kit #8059 SignalStain® Vibrant Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit #76713
SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit #96632 SignalStain® Ultra Blue Alkaline Phosphatase Substrate Kit #12824
SignalStain® Deep Black Peroxidase Substrate Kit #72986  
SignalStain® Radiant Yellow Peroxidase Substrate Kit #69644  

注意：使用本实验步骤中未指定的检测试剂可能需要进一步优化一抗，考虑到检测试剂的不同灵敏度。


发布​时间 2010 年 2 月

修订时间 2020 年 6 月

实验步骤编号：280

特异性/灵敏度

Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated) 可识别 Iba1/AIF-1 总蛋白的内源水平。

物种反应性：

人, 猴

基于 100% 序列同源性预测发生反应的物种：

人

来源/纯化

使用与人 Iba1/AIF-1 蛋白中 Leu32 周围残基相对应的合成肽，对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

离子钙结合适配器分子 1 (IBA1)，也称为同种异体移植炎症因子 1 (AIF-1)，是一种进化上保守的细胞浆钙结合蛋白，包含一对 EF-HAND 钙结合基序（1,2）。Iba1/AIF-1最初是从经历慢性移植排斥的人动脉粥样硬化同种异体心脏移植物中的活化巨噬细胞以及大鼠单核细胞（3,4）克隆的。它的功能还不是很清楚，但是 Iba1/AIF-1 的表达由于干扰素-γ 的表达而上调，因此可以调节巨噬细胞依赖性免疫应答（3）。作为 F-肌动蛋白结合蛋白，Iba1/AIF-1 可能起着重塑肌动蛋白细胞骨架的作用，并促进与各种小胶质细胞/巨噬细胞状态相关的形态变化（5）。Iba1/AIF-1 在单核细胞系细胞中也表达独特，因此被广泛用作大脑和其他组织中的小胶质细胞/巨噬细胞的标记物（6）。

限制使用

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