反应性 | H Mk |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | |
来源/同种型 | 小鼠 IgG1、kappa |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
IHC Leica BOND | 1:100 - 1:400 |
免疫组织化学(石蜡) | 1:100 - 1:400 |
注:请参阅产品数据表或产品网页,了解合适的抗体稀释度^。
步骤 | 试剂 | 时间/温度 | |
---|---|---|---|
1 | 脱蜡 | BOND™ Dewax Solution、100% 乙醇、BOND™ Wash Solution | 预编程的 Leica® BOND™ |
2 | 抗原修复 | BOND™ Epitope Retrieval ER2 Solution | 20 分钟,100˚C | 实验步骤:用 ER2 进行 HIER 20 分钟 |
3 | 过氧化物封闭液 | Polymer Refine Detection Kit Peroxide Block* | 5 分钟 |
洗涤 | BOND™ Wash Solution | 3x 0:00 分钟 | |
4 | 蛋白封闭液(可选) | #5425 NGS 或 #15019 Animal-Free Blocking Solution | 20 分钟 |
5 | 一抗^ | 用 #8112 SignalStain® Antibody Diluent 稀释 | 30 分钟 |
洗涤 | BOND™ Wash Solution | 3x 2:00 分钟 | |
6 | Post Primary Mouse Linker | Polymer Refine Detection Kit Post Primary* | 10 分钟 |
洗涤 | BOND™ Wash Solution | 3x 2:00 分钟 | |
7 | 二次检测 | Polymer Refine Detection Kit Polymer* | 10 分钟 |
洗涤 | BOND™ Wash Solution/Deionized Water | 定制(参见下文) | |
8a | 可视化 | Polymer Refine Detection Kit Mixed DAB Refine* | 0:00 分钟 |
8b | 可视化 | Polymer Refine Detection Kit Mixed DAB Refine* | 10 分钟 |
洗涤 | 去离子水 | 3x 0:00 分钟 | |
9 | 复染 | Polymer Refine Detection Kit Hematoxylin* | 5 分钟 |
洗涤 | 去离子水 | 0:00 分钟 | |
洗涤 | BOND™ Wash Solution | 0:00 分钟 | |
洗涤 | 去离子水 | 0:00 分钟 | |
10 | 脱水(离线): | ||
在 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 秒。 | |||
在 100% 乙醇中重复孵育 2 次,每次 10 秒。 | |||
在二甲苯中重复孵育 2 次,每次 10 秒。 | |||
11 | 用盖玻片和 #14177 SignalStain® Mounting Medium 封片。 | ||
可选订制洗涤: | BOND™ Wash Solution | 2:00 | |
BOND™ Wash Solution | 分配器类型:打开 0:00 | ||
BOND™ Wash Solution | 2:00 | ||
BOND™ Wash Solution | 分配器类型:打开 0:00 | ||
BOND™ Wash Solution | 0:00 | ||
去离子水 | 0:00 |
*BOND™ Polymer Refine Detection Kit(货号:DS9800)中所含的试剂
LEICA® 是 Leica Microsystems IR GmbH 的注册商标。
BOND™ 是 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 的商标。CST 和 Leica Microsystems IR GmbH 或 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 之间没有附属或赞助关系。
发布时间 2018 年 8 月
修订时间 2018 年 9 月
实验步骤编号:1445
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注意:在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。
对于柠檬酸盐:将切片浸入 1 X 柠檬酸盐修复液,再放入微波炉中加热直至沸腾;继续保持亚沸腾温度 10 分钟 (95°-98°C)。在实验台上冷却切片 30 分钟。
推荐的 检测试剂 |
SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Mouse) #8125 | SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (AP, Mouse) #31926 |
---|---|---|
兼容的 色原 |
SignalStain® DAB Substrate Kit #8059 | SignalStain® Vibrant Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit #76713 |
SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit #96632 | SignalStain® Ultra Blue Alkaline Phosphatase Substrate Kit #12824 | |
SignalStain® Deep Black Peroxidase Substrate Kit #72986 | ||
SignalStain® Radiant Yellow Peroxidase Substrate Kit #69644 |
注意:使用本实验步骤中未指定的检测试剂可能需要进一步优化一抗,考虑到检测试剂的不同灵敏度。
发布时间 2010 年 2 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:280
人, 猴
人
使用与人 Iba1/AIF-1 蛋白中 Leu32 周围残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
离子钙结合适配器分子 1 (IBA1),也称为同种异体移植炎症因子 1 (AIF-1),是一种进化上保守的细胞浆钙结合蛋白,包含一对 EF-HAND 钙结合基序(1,2)。Iba1/AIF-1最初是从经历慢性移植排斥的人动脉粥样硬化同种异体心脏移植物中的活化巨噬细胞以及大鼠单核细胞(3,4)克隆的。它的功能还不是很清楚,但是 Iba1/AIF-1 的表达由于干扰素-γ 的表达而上调,因此可以调节巨噬细胞依赖性免疫应答(3)。作为 F-肌动蛋白结合蛋白,Iba1/AIF-1 可能起着重塑肌动蛋白细胞骨架的作用,并促进与各种小胶质细胞/巨噬细胞状态相关的形态变化(5)。Iba1/AIF-1 在单核细胞系细胞中也表达独特,因此被广泛用作大脑和其他组织中的小胶质细胞/巨噬细胞的标记物(6)。
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