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34886
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit
一抗
抗体小包装组合

Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit #34886

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Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 1
使用 RIP3 (E7A7F) XP® Rabbit mAb(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。从已发表的表观遗传表达损失的报道中可以预测 HeLa 细胞中信号的缺失,并证实了该抗体对 RIP3 的特异性。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 2
使用 IL-1β (D3U3E) Rabbit mAb(上)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb 8457#(下)对未经处理的 (-) 或经 LPS 处理(100ng/ml,3小时;+)的 THP-1 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 3
使用 Caspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAb (上)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (下)对未处理 (-) 或经 Staurosporine #9953 (1 μM;3小时) 或 Etoposide #2200 (25 μM,过夜) 处理的不同细胞系进行蛋白质印迹分析。MCF7 细胞对 caspase-3 表达呈阴性。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 4
使用 MLKL (D2I6N) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。KARPAS 细胞系来源:剑桥大学的 Abraham Karpas 博士。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 5
使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb(上图)、总 Gasdermin D (L60) Antibody #93709(中图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对采用 TPA #4174(50 ng/ml,过夜)分化然后经过 LPS #14011(5 μg/ml,指示时间)处理的 THP-1 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 6
使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对对照小鼠骨髓衍生的巨噬细胞(泳道 1)或 Gasdermin D 基因剔除小鼠(泳道 2) mBMDM 的提取物进行蛋白印迹分析。Gasdermin D 基因敲除细胞中无信号证实了抗体对 Gasdermin D 的特异性。来自 Gasdermin D 基因敲除小鼠的 mBMDM 由马萨诸塞州大学伍斯特分校马萨诸塞大学医学院的 Douglas Golenbock 博士提供。
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一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
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使用 Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb,对重组 Human Interleukin-1β (hIL-1β) # 8900 进行蛋白质印迹分析。
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使用 Phospho-MLKL (Ser358) (D6H3V) Rabbit mAb(上图)或 MLKL (D2I6N) Rabbit mAb #14993(下图)对未经处理 (-) 或经过如下所示的处理组合方法处理的 HT-29 细胞进行蛋白质印迹分析:Z-VAD(20 μM,先于其他混合物 30 分钟添加;+)、人 TNF-α(hTNF-α,20 ng/ml,7 小时;+)、SM-164(100 nM,7 小时;+)和 necrostatin-1(Nec-1,50 μM,7 小时;+)。
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使用 Phospho-RIP3 (Ser227) (D6W2T) Rabbit mAb 对未经处理 (-) 或经过如下所示的处理组合方法处理的 HT-29 细胞进行蛋白质印迹分析:Z-VAD(20 μM,先于其他混合物 30 分钟添加;+)、人 Tumor Necrosis Factor-α #8902(hTNF-α,20 ng/ml,7 小时;+)、SM-164(100 nM,7 小时;+)。膜不用(左图)或用牛小肠磷酸酶处理(CIP;右图),以确定磷酸特异性。
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对 THP-1 细胞提取物的 RIP3 蛋白进行免疫沉淀法分析。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 RIP3 (E7A7F) XP® Rabbit mAb。使用 RIP3 (E7A7F) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (HRP Conjugate) #5127 用作二抗。
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使用 IL-1β (D3U3E) Rabbit mAb 对重组 Human Interleukin-1β (hIL-1β) #8900 进行蛋白印迹分析。
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使用 Caspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAb #14220(上图)和 α-Actinin (D6F6) XP® Rabbit mAb #6487(下图)对 HCT116 细胞(泳道 1)或 CASP3 敲除型细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白质印迹分析。CASP3 敲除型 HCT116 细胞中没有信号,这证实了该抗体对 CASP3 的特异性。
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使用 MLKL (D2I6N) Rabbit mAb (上)或 Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb #2278(下),对转染空载 (-) 转染 Myc/DDK 标签的全长人 MLKL 蛋白表达载体 (hMLKL-Myc/DDK;+) 的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
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对采用 TPA #4174(50 ng/ml,过夜)分化然后经过 LPS #14011(5 μg/ml,6 小时)处理的 THP-1 细胞的 Cleaved Gasdermin D (Asp725) 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% 输入对照,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb。使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
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使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174 (下图)对对照 PC-3 细胞(泳道 1)或 Gasdermin D 敲除型 PC-3 细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白印迹分析。Gasdermin D 敲除型 PC-3 细胞中没有信号,这证实了抗体对 Gasdermin D 的特异性。
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使用 Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb,对收集自 THP-1 细胞的细胞或培养基的提取物进行蛋白质印迹分析,并且这些 THP-1 细胞使用 TPA #4147(80 nM,过夜)进行分化,随后使用 Lipopolysaccharides (LPS) #14011(1 μg/ml,6 小时)处理 (-) 或不用其进行处理 (+)。
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使用 Phospho-RIP3 (Ser227) (D6W2T) Rabbit mAb(上图),RIP3 (E1Z1D) Rabbit mAb #13526(中图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对未经处理 (-) 或经过如下所示的处理组合方法处理的 HT-29 细胞进行蛋白质印迹分析:Z-VAD(20 μM,先于其他混合物 30 分钟添加;+)、人 Tumor Necrosis Factor-α #8902(hTNF-α, 20 ng/ml,7 小时;+)、SM-164(100 nM,7 小时;+)和 necrostatin-1(Nec-1,50 μM, 7小时;+)。
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使用 RIP3 (E7A7F) XP® Rabbit mAb(顶部图)或 RIP3 Rabbit mAb(底部图)对石蜡包埋的人结肠癌组织(左图)、肝细胞癌组织(中图)或正常胸腺组织(右图)细胞进行免疫组织化学分析。这两种抗体可检测人 RIP3 蛋白上的独立、独特表位。使用两种抗体获得的相似染色模式有助于确认染色特异性。
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使用 IL-1β (D3U3E) Rabbit mAb(绿色)对未经处理的(左)或经 LPS 处理(500 ng/ml,2 小时;右)的 THP-1 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin(红色)标记肌动蛋白纤丝。
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使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺导管癌细胞进行免疫组织化学分析。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 22
使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb(上图)、Cleaved Gasdermin D (Asp276) (E3E3P) Rabbit mAb #10137(中图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对未经 (-) 或经 Lipopolysaccharides (LPS) #14011(50 ng/ml,4 小时;+)处理后再用 Nigericin (sodium salt) #66419(15 μM,指定时间)处理的小鼠骨髓源性巨噬细胞 (mBMDM) 的提取物进行蛋白印迹分析。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 23
使用 Phospho-RIP3 (Ser227) (D6W2T) Rabbit mAb(上图)、RIP3 (E1Z1D) Rabbit mAb #13526(中图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对未经处理 (-) 或经过以下所示的处理方法组合处理的 HT-29 细胞 或 HT-29 RIPK1 KO 细胞进行蛋白质印迹分析:Z-VAD (20 μM,先于其他化合物之前 30分钟添加;+)、Human Tumor Necrosis Factor-α #8902(hTNF-α,20 ng/ml,7 小时;+) 和 SM-164(100 nM,7 小时;+)。HT-29 RIPK1 KO 细胞由马萨诸塞州波士顿哈佛大学医学院的 Junying Yuan 博士惠赠。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 24
使用 RIP3 (E7A7F) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺导管癌组织进行免疫组织化学分析。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 25
使用 IL-1β (D3U3E) Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对未经处理(蓝色,阴性)或已经 LPS #14011(100 ug/ml,3 分钟;绿色,阳性)处理的 THP-1 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')₂ Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
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在未裂解 Gasdermin D 肽(左图)或 Asp275 位点特异性裂解的 Gasdermin D 肽(右图)存在的情况下,使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌细胞进行免疫组织化学分析。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 27
使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对不同细胞系提取物进行蛋白印迹分析。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 28
使用 Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb(绿色),对使用 TPA #4174(80 nM, 24 小时)分化,并随后用 Lipopolysaccharides (LPS) #14011(1 μg/ml,6 小时)处理或不用其处理的 THP-1 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight 554 Phalloidin #13054(红色)标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 29
使用 Phospho-RIPK3 (Ser227) (D6W2T) Rabbit mAb(绿色)对未处理的(左图)、经 Z-VAD(20 μM,30 分钟)预处理后再经 SM-164 (100 nM) 和 Human Tumor Necrosis Factor-α (hTNF-α) #8902(20 ng/mL,6 小时;中间)处理,或经 Z-VAD 预处理后再经 SM-164 和 hTNF-α 处理,随后经 λ 磷酸酶后处理(右图)的 HT-29 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight 554 Phalloidin #13054(红色)标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 30
使用 RIP3 (E7A7F) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 HT-29 细胞沉淀物(左图,高表达)或 HeLa 细胞沉淀物(右图,低表达)进行免疫组织化学分析。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 31
使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人鳞状细胞肺癌细胞进行免疫组织化学分析。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 32
使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对转染空载 (-) 或转染表达带有 Myc/DDK 标签的全长小鼠 Gasdermin D 蛋白 (mGSDMD-Myc/DDK; +) 的表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白印迹分析。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 33
使用 RIP3 (E7A7F) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的正常人结肠细胞进行免疫组织化学分析。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 34
使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) 对石蜡包埋的人非霍奇金淋巴瘤细胞进行免疫组织化学分析。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 35
使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb(上图)、Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb #36425(中图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对通过 TPA (12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate) #4174 分化(50 ng/ml,过夜)然后经过脂多糖 (LPS) #14011 处理 (5 μg/ml,6 小时)的 THP-1 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 36
以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(右图)作为对照,使用 RIP3 (E7A7F) XP® Rabbit mAb(左图)对石蜡包埋的人结肠癌组织进行免疫组织化学分析。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 37
使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人前列腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 38
对 J774A.1 细胞提取物的 Gasdermin D 蛋白进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb。使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb 进行蛋白印迹分析。Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (HRP Conjugate) #5127 用作二抗。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 39
使用 RIP3 (E7A7F) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人食管腺癌组织进行免疫组织化学分析。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 40
使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人脾脏细胞(左图,阳性)和骨骼肌细胞(右图,阴性)进行免疫组织化学分析。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 41
使用 RIP3 (E7A7F) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人鳞状细胞癌组织进行免疫组织化学分析。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 42
使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 对经过 TPA #4174(左图)分化后再经过 LPS #14011(右图)处理的石蜡包埋的 THP-1 细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 43
使用 RIP3 (E7A7F) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人子宫内膜样腺癌组织进行免疫组织化学分析。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 44
使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人前列腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 45
使用 RIP3 (E7A7F) XP® Rabbit mAb(绿色)对 HT-29 细胞(左图,阳性)或 HeLa 细胞(右图,阴性)进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight 554 Phalloidin #13054(红色)标记。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封片。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 46
使用 RIP3 (E7A7F) XP® Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对 SU-DHL-4 细胞(蓝色,阴性)和 THP-1 细胞(绿色,阳性)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit: Image 47
使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb 对 J774A.1、CHO 和 BHK-211 细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
To Purchase # 34886T
目录# 规格 价格 库存
34886T
1 个试剂盒(10 x 20 微升)

产品包括 数量 应用 反应性 MW (kDa) 同型
MLKL (D2I6N) Rabbit mAb 14993 20 µl
  • WB
H 54 兔 IgG
Phospho-MLKL (Ser358) (D6H3V) Rabbit mAb 91689 20 µl
  • WB
H 54 兔 IgG
Caspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAb 14220 20 µl
  • WB
  • IP
H M R Mk 35, 19, 17 兔 IgG
RIP3 (E7A7F) XP® Rabbit mAb 10188 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
  • IF
  • F
H 46-62 兔 IgG
Phospho-RIP3 (Ser227) (D6W2T) Rabbit mAb 93654 20 µl
  • WB
  • IF
H 46-62 兔 IgG
Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 36425 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
H 30 兔 IgG
Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb 39754 20 µl
  • WB
  • IP
H M R Hm 53, 30 兔 IgG
IL-1β (D3U3E) Rabbit mAb 12703 20 µl
  • WB
  • IF
  • F
H 17, 31 兔 IgG
Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb 83186 20 µl
  • WB
  • IF
H 17 兔 IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl
  • WB
山羊 

产品说明

Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit 提供一种经济合算的方式来检测人样品中 PANoptosis 的激活。该试剂盒包含的抗体足以使用每种一抗进行两次蛋白印迹实验。

特异性/灵敏度

Human Reactive PANoptosis Antibody Sampler Kit 中的每种抗体可检测其靶标蛋白的内源水平。MLKL (D2I6N) Rabbit mAb 会与某些细胞系中的 130 kDa 的未知蛋白发生交叉反应。未观察到 IL-1β (D3U3E) Rabbit mAb 可检测成熟 IL-1β 的内源水平。它可检测多达 100 pg 的重组成熟 IL-1β。Caspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAb 可检测全长 caspase-3 以及在细胞凋亡过程中剪切产生的 caspase-3 的大亚基 (p20)。Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb 可识别全长 Gasdermin D 和 caspase-1 在细胞焦亡过程中产生的 30 kDa 氨基末端片段。Phospho-MLKL (Ser358) (D6H3V) Rabbit mAb 仅在 Ser358 磷酸化后可识别内源水平的 MLKL 蛋白。该抗体也可与在 Thr357 和 Ser358 位点双磷酸化的 MLKL结合。 Phospho-RIP3 (Ser227) (D6W2T) Rabbit mAb 仅在 RIP3 蛋白在 Ser227 位点被磷酸化时方可识别内源水平的 RIP3 蛋白。还检测到一个似乎是 RIP3 裂解产物的 30 kDa 条带。Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 仅在 Asp275 位点被剪切时可识别 Gasdermin D 蛋白的内源水平。仅当在 Asp116 位点剪切时,Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb 才可识别成熟 IL-1β 蛋白的内源水平。

来源/纯化

使用对人 IL-1β 和人 caspase-3 的 p20 亚基具有特异性的重组蛋白、与人 MLKL 和 RIP3 羧基末端附近或与小鼠 Gasdermin D 的 Leu60 周围、与人 Gasdermin D 的 Asp275、人 IL-1β 的 Asp116、人 MLKL 的 Ser358 和人 RIP3 蛋白的 Ser227 周围的残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

程序性细胞死亡 (PCD) 在机体发育和免疫反应中发挥重要作用。有三种主要的 PCD 通路:凋亡、焦亡和坏死性凋亡。凋亡是一种非炎症性细胞死亡,其特征在于一系列蛋白水解裂解,从启动型 caspase (caspase-8/9) 开始,然后是执行型 caspase (caspase-3/6/7),接着是裂解底物蛋白以驱动凋亡细胞死亡 (1,2)。在细胞焦亡期间,caspase-1 通过称为炎性体的蛋白质复合物被蛋白水解激活,然后激活的 caspase-1 可以裂解 Gasdermin D (GSDMD)、IL-1β 和 IL-18。从裂解中释放的 GSDMD N 端结构域在质膜中形成孔,以驱动裂解和成熟的 IL-1β 和 IL-18 的热解细胞裂解和释放,以及损伤相关分子模式 (DAMP) (3,4)。坏死性凋亡的关键步骤包括受体相互作用蛋白激酶 3 (RIPK3) 依赖的混合谱系激酶域样蛋白 (MLKL) 磷酸化、磷酸化 MLKL 易位至质膜和破坏质膜完整性 (5,6)。与细胞凋亡的非炎症性质相反,细胞焦亡和坏死性凋亡都是促炎性的方式 (7)。虽然对这些 PCD 通路的早期研究集中在它们独特的个体特征和潜在机制上,但最近的研究结果指出,在某些条件下,这些过程之间存在串扰和冗余,其中三种通路被激活,而不是相互独立,并且当一个通路被阻塞时,就会出现代偿反应。这种具有焦亡、凋亡和/或坏死性凋亡关键特征的新型 PCD 被称为 PANoptosis (8,9)。PANoptosis 是一种由称为 PANoptosome 的细胞质蛋白复合物驱动的协同细胞死亡途径,其成分提供支架和催化功能以参与焦亡、凋亡和/或坏死性凋亡 (10,11)。
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  11. Samir, P. et al. (2020) Front Cell Infect Microbiol 10, 238.

通路与蛋白质

探索与本产品相关的通路 + 蛋白质。

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