使用与非特异性的阴性对照抗体(红色)作为 Caspase-3(Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 的对照,对未经(蓝色)或已经(绿色)etoposide #2200 处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞术分析。
使用 Cleaved PARP (Asp214) (D64E10) XP® Rabbit mAb,对未处理(蓝色)或经 etoposide 处理(绿色)的 Jurkat 细胞进行流式细胞术分析。
对未经处理 (-) 或已经以下联合处理方法处理(如图)的 HT-29 细胞进行蛋白质印迹分析:Z-VAD(20 μM,先于其他混合物 30 分钟添加;+)、人 TNF-α(hTNF-α,20 ng/ml,7 小时;+)、SM-164(100 nM,7 小时;+)和 necrostatin-1(Nec-1,50 μM,7 小时;+),使用 Phospho-RIP (Ser166) (D1L3S) Rabbit mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)。
使用 Phospho-RIPK3 (Ser227) (D6W2T) Rabbit mAb(绿色)对未处理的(左图)、经 Z-VAD(20 μM,30 分钟)预处理后再经 SM-164 (100 nM) 和 Human Tumor Necrosis Factor-α (hTNF-α) #8902(20 ng/mL,6 小时;中间)处理,或经 Z-VAD 预处理后再经 SM-164 和 hTNF-α 处理,随后经 λ 磷酸酶后处理(右图)的 HT-29 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight554™13054 Phalloidin #(红色)进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
对未经处理 (-) 或已经以下联合处理方法处理(如图)的 HT-29 细胞进行蛋白质印迹分析:Z-VAD(20 μM,先于其他混合物 30 分钟添加;+)、人 TNF-α(hTNF-α,20 ng/ml,7 小时;+)、SM-164(100 nM,7 小时;+)和 necrostatin-1(Nec-1,50 μM,7 小时;+),使用 Phospho-MLKL (Ser358) (D6H3V) Rabbit mAb(上图)或 MLKL (D2I6N) Rabbit mAb #14993(下图)。
使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺导管癌细胞进行免疫组织化学分析。
使用 Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb(绿色),对使用 TPA #4174(80 nM, 24 小时)分化,并随后用 Lipopolysaccharides (LPS) #14011(1 μg/ml,6 小时)处理或不用其处理的 THP-1 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight554™13054 Phalloidin #(红色)进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
使用 LC3B (E5Q2K) Mouse mAb 或浓度匹配的 Mouse (E7Q5L) mAb IgG2b Isotype Control #53484(虚线)对野生型 HCT-116 细胞(绿色,高表达)或敲除型 LC3B(蓝色,阴性)进行流式细胞分析。Anti-mouse IgG (H+L),F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4408 作为二抗。
使用 SQSTM1/p62 (D5L7G) Mouse mAb(绿色),对未经处理的(左图)或经氯奎宁处理(50 μM,过夜;右图)的 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
使用 SQSTM1/p62 (D5L7G) Mouse mAb #88588(上图)和 β-actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对 HeLa 细胞(泳道 1)或 SQSTM1 敲除型细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白印迹分析。SQSTM1 敲除型 HeLa 细胞中没有信号,这证实了抗体对 SQSTM1 的特异性。
一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb(绿色)标记的且未经(左)或经(右)Staurosporine #9953 处理的 HT-29 细胞的共聚焦免疫荧光图像。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor® 555 phalloidin #8953(红色)进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
使用 Cleaved PARP (Asp214) (D64E10) XP®Rabbit mAb(绿色),对未经(左)或经 Staurosporine #9953(右)处理的 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin 标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
对未经处理 (-) 或已经以下联合处理方法处理的 HT-29 细胞进行蛋白质印迹分析:Z-VAD(20 μM,先于其他化合物 30 分钟添加;+)、Human Tumor Necrosis Factor-α #8902(hTNF-α,20 ng/ml,7 小时;+)和 SM-164(100 nM,7 小时;+),使用 Phospho-RIP3 (Ser227) (D6W2T) Rabbit mAb。膜不用(左图)或用牛小肠磷酸酶处理(CIP;右图),以确定磷酸特异性。
在未裂解 Gasdermin D 肽(左图)或 Asp275 位点特异性裂解的 Gasdermin D 肽(右图)存在的情况下,使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌细胞进行免疫组织化学分析。
对来自 THP-1 细胞提取物的 Cleaved-IL-1β (Asp116) 进行免疫沉淀,且 THP-1 细胞使用 TPA #4147(80 nM,过夜)进行分化,随后用 Lipopolysaccharides (LPS) #14011(1 μg/ml,6小时)处理。泳道 1 是10 % input,泳道 2 用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 沉淀,并且泳道 3 用 Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb 沉淀。使用 Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
使用 LC3B (E5Q2K) Mouse mAb(绿色)对未经处理(左图)或经过 Chloroquine #14774(50 µM,过夜)(中图)处理的 HCT 116 细胞或经过 Chloroquine #14774(50 µM,过夜)(右图)处理的 LC3B HCT 116 敲除型细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 β-Actin (13E5) Rabbit Mab(红色)标记,胞核用 DAPI #4083 标记(蓝色)。
使用 SQSTM1/p62 (D5L7G) Mouse mAb,对石蜡包埋的人结肠癌组织进行免疫组织化学分析。
在对照肽(左)或 Cleaved Caspase-3 (Asp175) Blocking Peptide (#1050)(右)存在的情况下,使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠胚胎进行免疫组织化学分析。
使用 Cleaved PARP (Asp214) (D64E10) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人扁桃体进行免疫组织化学分析。
对未经处理 (-) 或已经以下联合处理方法处理的 HT-29 细胞进行蛋白质印迹分析:Z-VAD(20 μM,先于其他混合物 30 分钟添加;+)、人 Tumor Necrosis Factor-α #8902(hTNF-α, 20 ng/ml,7 小时;+)、SM-164(100 nM,7 小时;+)和 necrostatin-1(Nec-1,50 μM, 7小时;+),使用 Phospho-RIP3 (Ser227) (D6W2T) Rabbit mAb(上图),RIP3 (E1Z1D) Rabbit mAb #13526(中图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)。
使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人鳞状细胞肺癌细胞进行免疫组织化学分析。
使用 Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb,对重组 Human Interleukin-1β (hIL-1β) # 8900 进行蛋白质印迹分析。
使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体对石蜡包埋的人结肠癌细胞进行免疫组织化学分析。
使用 SQSTM1/p62 (D5L7G) Mouse mAb,对石蜡包埋的人肺癌组织进行免疫组织化学分析。
使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 对 SignalSlide® Cleaved Caspase-3 IHC Controls #8104(石蜡包埋的 Jurkat 细胞,未经(左)或经(右)etoposide 处理进行免疫组织化学分析。
使用 Cleaved PARP (Asp214) (D64E10) XP® Rabbit mAb(上)或总 PARP Antibody #9542(下),对未经或经 Staurosporine #9953 (1 μM,3 hr) 处理的 HeLa 细胞、未经或经 etoposide (25 μM, overnight) 处理的 Jurkat 细胞、未经或经 cycloheximide(CHX,10 μg/ml,过夜)处理,然后再进行 TNF-α 8902 (20 ng/ml,4 hr) 处理的 THP-1 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
对未经处理 (-) 或已经以下联合处理方法处理的 HT-29 细胞或 HT-29 RIPK1 KO 细胞进行蛋白质印迹分析:Z-VAD(20 μM,先于其他混合物 30 分钟添加;+)、人 Tumor Necrosis Factor-α #8902(hTNF-α,20 ng/ml, 7 小时;+)和 SM-164(100 nM,7 小时;+)使用 Phospho-RIP3 (Ser227) (D6W2T) Rabbit mAb(上图),RIP3 (E1Z1D) Rabbit mAb #13526(中图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)。HT-29 RIPK1 KO 细胞由马萨诸塞州波士顿哈佛大学医学院的 Junying Yuan 博士惠赠。
使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) 对石蜡包埋的人非霍奇金淋巴瘤细胞进行免疫组织化学分析。
使用 Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb,对收集自 THP-1 细胞的细胞或培养基的提取物进行蛋白质印迹分析,并且这些 THP-1 细胞使用 TPA #4147(80 nM,过夜)进行分化,随后使用 Lipopolysaccharides (LPS) #14011(1 μg/ml,6 小时)处理 (-) 或不用其进行处理 (+)。
使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体对石蜡包埋的人食管癌细胞进行免疫组织化学分析。
使用 SQSTM1/p62 (D5L7G) Mouse mAb,对石蜡包埋的人子宫内膜样腺瘤组织进行免疫组织化学分析。
使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb,对石蜡包埋的小鼠胚胎进行免疫组织化学染色,以显示凋亡细胞细胞浆定位。
使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人前列腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体对石蜡包埋的人肺癌细胞进行免疫组织化学分析。
使用 SQSTM1/p62 (D5L7G) Mouse mAb,对石蜡包埋的 HDLM-2(左图)和 Daudi(右图)细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。
使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 对未经或经 etoposide(25uM, 5 小时)处理的 Jurkat 细胞的提取物进行免疫沉淀法。使用同一抗体进行蛋白质进行印迹分析。
使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人脾脏细胞(左图,阳性)和骨骼肌细胞(右图,阴性)进行免疫组织化学分析。
使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体对石蜡包埋的人非霍奇金氏淋巴瘤细胞进行免疫组织化学分析。
在对照肽(左图)或抗原特异性肽(右图)存在的情况下,使用 SQSTM1/p62 (D5L7G) Mouse mAb, 对石蜡包埋的人胆囊炎组织进行免疫组织化学分析。
使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 对未经或经 staurosporine #9953(1uM,3 小时)或 etoposide #2200(25uM,5 小时)处理的 C6(大鼠)、NIH/3T3(小鼠)和 Jurkat(人源)提取物进行蛋白质印迹分析。
对采用 TPA #4174(50 ng/ml,过夜)分化然后经过 LPS #14011(5 μg/ml,6 小时)处理的 THP-1 细胞的 Cleaved Gasdermin D (Asp725) 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% 输入对照,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb。使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
使用 LC3B (E5Q2K) Mouse mAb 对石蜡包埋的正常人脑细胞进行免疫组织化学分析。
对 PANC-1 细胞提取物 SQSTM1/p62 蛋白进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415,而泳道 3 为 SQSTM1/p62 (D5L7G) Mouse mAb。使用 SQSTM1/p62 (D5L7G) Mouse mAb 进行蛋白质印迹。使用轻链特异性二抗,避免与重链 IgG 反应。
使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb(上图)、总 Gasdermin D (L60) Antibody #93709(中图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对采用 TPA #4174(50 ng/ml,过夜)分化然后经过 LPS #14011(5 μg/ml,指示时间)处理的 THP-1 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 LC3B (E5Q2K) Mouse mAb 对石蜡包埋的 KARPAS 299 细胞沉淀物(左图,高表达)或 VCaP 细胞沉淀物(右图,低表达)进行免疫组织化学分析。
使用 LC3B (E5Q2K) Mouse mAb 对石蜡包埋的未处理的(左图)或经过 Chloroquine #14774 处理的(右图)HeLa 细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。
使用 SQSTM1/p62 (D5L7G) Mouse mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 LC3B (E5Q2K) Mouse mAb 对石蜡包埋的人正常脾进行免疫组织化学分析。
使用 SQSTM1/p62 (D5L7G) Mouse mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对未经处理的 (-)或经 Earles 基础盐溶液 (EBSS;4 小时;+) 饥饿处理的 HCT 116 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
对用氯喹 # 14774(50 μM;过夜)处理的 HeLa 细胞的 LC3B 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% 敲入,泳道 2 为小鼠 (G3A1) 单克隆抗体 IgG1 同型对照,泳道 3 为 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体。使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体进行蛋白印迹实验。Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody #7076 用作二抗。
使用 SQSTM1/p62 (D5L7G) Mouse mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对未经处理的 (-)或经氯奎宁 #14774 (50 μM,过夜;+) 处理的 Hela 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 LC3B (E5Q2K) Mouse mAb #83506(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对未经处理 (-) 或经过 Chloroquine #14774(50 μM,18 小时)处理的 HCT 116 和 HCT 116 LC3B 敲除型细胞进行蛋白质印迹分析。HCT 116 敲除型细胞中没有信号,这证实了抗体对 LC3B 的特异性。
使用 SQSTM1/p62 (D5L7G) Mouse mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对经 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-)、SignalSilence® SQSTM1/p62 siRNA I #6394 (+) 或 SignalSilence® SQSTM1/p62 siRNA II #6399 (+) 转染的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体(上图)或 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457(下图)对未经 (-) 或已经氯喹 #14774(50 μM,过夜;+)处理的 HeLa、C2C12 和 KNRK 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。
使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体(上图)或 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457(下图)对 HeLa 细胞或已敲除 LC3B 的 HeLa 细胞 (HeLa/LC3B KO) 的提取物进行蛋白印迹分析。
使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体(上图)或 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体(下图)对未处理的 (-) 或用 Earle's 平衡盐溶液 (EBSS)(规定时间)饥饿的 A549 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。
使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体(上图)或 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457(下图)对未处理的 (-) 或已经 Torin 1 #14379(250 nM,5 小时;+)处理的 MCF7 和 Raji 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。