对促销活动感兴趣? | 单击此处 >>
91920
Human CD28 Activating (CD28.2) Mouse mAb (Low Endotoxin, Azide-free)
一抗
单克隆抗体

Human CD28 Activating (CD28.2) Mouse mAb (Low Endotoxin, Azide-free) #91920

引用 (0)
Human CD28 Activating (CD28.2) Mouse mAb (Low Endotoxin, Azide-free): Image 1
使用 Phospho-SLP-76 (Ser376) (E3G9U) XP® Rabbit mAb #76384(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对未经处理(蓝色)或经过交联的 Human CD3ε Activating (OKT3) Mouse mAb (Low Endotoxin, Azide-free) #92511和 Human CD28 Activating (CD28.2) Mouse mAb (Low Endotoxin, Azide-free)(各为 10 μg/ml,15 分钟;绿色)处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
Human CD28 Activating (CD28.2) Mouse mAb (Low Endotoxin, Azide-free): Image 2
使用 Phospho-SLP-76 (Ser376) (D7S1K) Rabbit mAb #92711(上图)、SLP-76 (E4N7E) Rabbit mAb #25361(中图)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对未经处理 (1) 或经过交联的 Human CD3ε Activating (OKT3) Mouse mAb (Low Endotoxin, Azide-free) #92511 和 Human CD28 Activating (CD28.2) Mouse mAb (Low Endotoxin, Azide-free)(10 μg/ml,30 分钟)(2) 处理的 Jurkat 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
To Purchase # 91920S
目录# 规格 价格 库存
91920S
100 µg

支持数据

反应性 H
敏感性 内源性
MW (kDa)
来源/亚型 小鼠 IgG1、kappa

应用缩写:

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品说明

内毒素 小于或等于 0.01 EU/μg,通过 LaL 测定来确定。

保存

保存在 10 mM NaH2PO4、150 mM NaCl(pH 为 7.2)中。保存在 4°C 时,可保持稳定 12 个月。切勿分装抗体。‭

实验步骤

打印

查看 > 折叠 >

A. 溶液和试剂

  1. Human CD3ε Activating (OKT3) Mouse mAb (Low Endotoxin, Azide-free) #92511
  2. Human CD28 Activating (CD28.2) Mouse mAb (Low Endotoxin, Azide-free) #91920
  3. 仅用于可溶性刺激:Goat Anti-Mouse Kappa Light Chain, F(ab’)2 Antibody (Low Endotoxin, Azide-free) #75861

B. 刺激实验步骤:可溶性

  1. 通过离心分离采集目标细胞。
  2. 抽吸上清液。
  3. 使用冷无血清培养基,以 106-107 个细胞/ml 重悬细胞。
  4. 以 1:200 的比例把 CD3ε Activating (OKT3) Mouse mAb (Low Endotoxin, Azide-free) #92511 添加到细胞中,以达到 10 µg/ml 的最终浓度。
  5. 可选:以 1:200 的比例把 Human CD28 Activating (CD28.2) Mouse mAb (Low Endotoxin, Azide-free) #91920 添加到细胞中,以达到 10 µg/ml 的最终浓度。
  6. 将带激动剂抗体的细胞置于冰上 30 分钟。
  7. 通过离心收集细胞。
  8. 抽吸上清液。
  9. 使用无血清冷培养基,以 106-107 个细胞/ml 重悬细胞,并置于冰上。
  10. 如果仅使用 CD3ε (OKT3) ,则以 1:50 的比例把 Goat Anti-Mouse Kappa Light Chain, F(ab’)2 Antibody (Low Endotoxin, Azide-free) #75861 二抗添加到细胞中,以达到 10 µg/ml 的最终浓度;如果同时使用 CD3ε (OKT3) 和 CD28 (CD28.2),则以 1:25 的比例添加以达到 20 µg/ml 的最终浓度。
  11. 将含二抗的细胞置于冰上 15 分钟。
  12. 要启动刺激,将细胞转移到 37 °C 水浴维持刺激所需的时间。
  13. 要终止刺激,请遵循为所需分析方法推荐的细胞制备实验步骤。

C. 刺激实验步骤:基于板子

  1. 在无菌 10 PBS 中制备 µg/ml 的 CD3ε Activating (OKT3) Mouse mAb (Low Endotoxin, Azide-free) 92511# 溶液。准备足够的体积以覆盖孔底部,用于刺激 T 细胞(96 孔板大约为 50 µl,6 孔板为 1 ml)。
  2. 将稀释的 CD3ε (OKT3) 抗体溶液添加到选择作为处理组的孔中。将等量的无菌 PBS 添加到选择作为处理对照的孔中。
  3. 盖上反应板并在 37 °C 下孵育至少 2 小时。如果需要,可以让反应板温育过夜。
  4. 根据需要制备细胞,以在足够体积的完整培养基中生成大约 1 x 106 细胞/ml 的细胞悬液(对于 96 孔板,每孔 100 µl;{ut6 } ml 用于 6 孔板)。最佳细胞密度可以使用待研究的细胞进行预实验来确定。对于 T 细胞扩增,向细胞悬液中加入 Human Interleukin-2 (hIL-2) #8907 以产生 20 ng/ml 的最终浓度。
  5. 从孔中吸出 CD3ε (OKT3) 抗体溶液,并用多余的无菌 PBS 冲洗孔 2 次,以去除未结合的抗体。
  6. 按步骤 4 中指定的体积或通过实验确定的体积,将细胞悬浮液添加到所有孔中。
  7. 添加 Human CD28 Activating (CD28.2) Mouse mAb (Low Endotoxin, Azide-free) #91920 以产生 2 µg/ml 的最终浓度。如果需要,在完全培养基中预稀释 CD28 (CD28.2) 抗体。如果需要,也可以将 CD28 抗体添加到部分对照孔中。
  8. 在加湿培养箱中培养细胞所需的时间(37 °C,5% CO2)。根据需要添加含有 IL-2 的新鲜培养基以进行 T 细胞扩增。
  9. 收集细胞,然后根据需要进行免疫染色或分析。

实验步骤编号:2450

特异性/灵敏度

Human CD28 Activating (CD28.2) Mouse mAb (Low Endotoxin, Azide-free) 可识别 CD28 蛋白的内源水平。

物种反应性:

来源/纯化

使用转染人 CD28 并通过亲和层析纯化的细胞来产生单克隆抗体。

背景

CD28 是一种在 T 细胞和一些其他造血细胞中表达的跨膜糖蛋白 (1, 2)。T 细胞激活需要 T 细胞受体 (TCR) 识别 MHC 分子环境中存在的抗原。CD28 是一种 T 细胞协同刺激受体,CD28 与其配体 CD80 或 CD86 的相互作用可提供初始 T 细胞激活所需的第二信号 (3-5)。在没有 CD28 刺激的情况下,激活初始 T 细胞会导致出现 T 细胞无能或无反应的状态 (3)。CD28 通过细胞浆磷酸酪氨酸基序发送信号,这些基序可结合参与 T 细胞激活的且包含多个 SH2 或 SH3 结构域的蛋白 (2)。目前,研究表明 CD28 是 PD-1 介导的去磷酸化过程中的一个首选靶标。PD-1 阻断后,T 细胞增殖需要 CD28 表达,并且小鼠中有效的抗 PD-1 癌症免疫治疗也需要 CD28 刺激 (6, 7)。选择性剪切会产生许多 CD28 同工型 (8)。
  1. Aruffo, A. and Seed, B. (1987) Proc Natl Acad Sci U S A 84, 8573-7.
  2. Esensten, J.H. et al. (2016) Immunity 44, 973-88.
  3. Harding, F.A. et al. (1992) Nature 356, 607-9.
  4. Azuma, M. et al. (1993) Nature 366, 76-9.
  5. Linsley, P.S. et al. (1990) Proc Natl Acad Sci U S A 87, 5031-5.
  6. Hui, E. et al. (2017) Science 355, 1428-1433.
  7. Kamphorst, A.O. et al. (2017) Science 355, 1423-1427.
  8. Magistrelli, G. et al. (1999) Biochem Biophys Res Commun 259, 34-7.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

限制使用

除非 CST 的合法授书代表以书面形式书行明确同意,否书以下条款适用于 CST、其关书方或分书商提供的书品。 任何书充本条款或与本条款不同的客书条款和条件,除非书 CST 的合法授书代表以书面形式书独接受, 否书均被拒书,并且无效。

专品专有“专供研究使用”的专专或专似的专专声明, 且未专得美国食品和专品管理局或其他外国或国内专管机专专专任何用途的批准、准专或专可。客专不得将任何专品用于任何专断或治专目的, 或以任何不符合专专声明的方式使用专品。CST 专售或专可的专品提供专作专最专用专的客专,且专用于研专用途。将专品用于专断、专防或治专目的, 或专专售(专独或作专专成)或其他商专目的而专专专品,均需要 CST 的专独专可。客专:(a) 不得专独或与其他材料专合向任何第三方出售、专可、 出借、捐专或以其他方式专专或提供任何专品,或使用专品制造任何商专专品,(b) 不得复制、修改、逆向工程、反专专、 反专专专品或以其他方式专专专专专品的基专专专或技专,或使用专品开专任何与 CST 的专品或服专专争的专品或服专, (c) 不得更改或专除专品上的任何商专、商品名称、徽专、专利或版专声明或专专,(d) 只能根据 CST 的专品专售条款和任何适用文档使用专品, (e) 专遵守客专与专品一起使用的任何第三方专品或服专的任何专可、服专条款或专似专专

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
XP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。
Alexa Fluor 是 Life Technologies 公司的注册商标。
所有其他商标均为各自拥有者所有。访问 cellsignal.com/trademarks 以了解更多信息。
Tween 是 ICI Americas, Inc. 的注册商标。
Powered by Translations.com GlobalLink OneLink SoftwarePowered By OneLink