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56612
Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit
一抗
抗体小包装组合

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit #56612

引用 (1)
Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 1

使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb(上图)或 β-actin (13E5) Rabbit mAb #4970(下图)对对照的 HeLa 细胞(泳道 1)或 YAP 敲除型 HeLa 细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白印迹分析。YAP 敲除型 HeLa 细胞中没有信号,这证实了抗体对 YAP 的特异性。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 2

使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对 NCI-H2052 细胞中提取的交联染色质和 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。结果图显示在 CTGF 内结合,CTGF 是一种已知的 YAP 靶标基因(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 3

使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对 NCI-H2052 细胞和 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 测定。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制备 DNA 库。结果图显示在 YAP 的已知靶基因 TSPAN2 内结合(参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他图)。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 4

使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005,对 NCI-H2052 细胞的交联染色质和 TAZ (D3I6D) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。结果图显示在 SMYD3 内结合,SMYD3 是一种已知的 TAZ 靶标基因(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。如需了解其他 ChIP-seq 情况,请下载产品说明书。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 5

对来自 PANC-1 细胞提取物的Ajuba 蛋白进行免疫沉淀。泳道 1 是10 % input,泳道 2 是 Rabbit (DA1E) mAb XP® Isotype Control #3900,而泳道 3 是 Ajuba (D4D8P) Rabbit mAb。使用 Ajuba (D4D8P) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 6

使用 PTPN14 (D5T6Y) Rabbit mAb(上图)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 7

使用 Merlin (D3S3W) Rabbit mAb(绿色)对 PC-3 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 8

使用 MST1 (D8B9Q) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 9

使用 FRMD6 (D8X3R) Rabbit mAb(上)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下)对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 10

一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 11

使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb(上图)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。正如预期,RL-7 细胞的 YAP 蛋白表达呈阴性。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 12

使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对 NCI-H2052 细胞中提取的交联染色质和 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。结果图显示在染色体 6(上图)内的结合,包括 YAP 的已知靶标基因 CTGF(下图)(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 13

使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对 NCI-H2052 细胞和 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 测定。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体 1 (上图)内的结合,包括 YAP 的已知靶基因 TSPAN2(下图)(参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图)。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 14

使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对 NCI-H2052 细胞的交联染色质与 TAZ (D3I6D) Rabbit mA 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human CTGF Promoter Primers #14927、Human SMYD3 intron 2 primers 与 SimpleChIP® Human CTGF Upstream Primers #14928,通过实时 PCR对富集的 DNA 进行定量分析。每份样品的免疫沉淀 DNA 含量,用染色质投入总量(相当于 1)相对应的信号进行表示。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 15

使用 Ajuba (D4D8P) Rabbit mAb,对来自不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 16

使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(泳道 2)或 Merlin (D3S3W) Rabbit mAb(泳道 3),对小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 提取物 merlin 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 Merlin (D3S3W) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 17

使用 MST1 (D8B9Q) Rabbit mAb 对血清饥饿整晚之后经赋形剂 (-) 或 Staurosporine #9953(1 μM,4 小时;+)处理的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。Staurosporine 可诱导全长 MST1 由半胱天冬酶介导的裂解,从而产生一个该抗体可检测的 37 kDa 氨基末端片段和一个不可检测到的 18 kDa 羧基末端片段。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 18

使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对 NCI-2052 细胞中提取的交联染色质与 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human CTGF Promoter Primers #14927、Human SMYD3 intron 2 primers 与 SimpleChIP® Human CTGF Upstream Primers #14928,通过实时 PCR对富集的 DNA 进行定量分析。每份样品的免疫沉淀 DNA 含量,用染色质投入总量(相当于 1)相对应的信号进行表示。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 19

使用 CUT&RUN Assay Kit #86652,通过 NCI-H2052 细胞和 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #66362 进行 CUT&RUN。使用人 C1D 下游引物、人 TSPAN2 上游引物和人 ITM2A 下游引物进行实时 PCR 来对富集的 DNA 进行定量。每份样品的免疫沉淀 DNA 含量,用染色质投入总量(相当于 1)相对应的信号进行表示。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 20

使用 TAZ (D3I6D) Rabbit mAb(上图)和 GAPDH (D16H11) XP® #5174(下图)对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。正如预期一样,Raji 细胞中 TAZ 呈阴性。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 21

使用 Merlin (D3S3W) Rabbit mAb(上)、Ezrin/Radixin/Moesin Antibody #3142(中间)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下),对 PC-3 细胞以及野生型和 Nf2 (-/-) 小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 提取物进行蛋白质印迹分析。(MEF wt 和 MEF Nf2 (-/-) 细胞由 MGH Cancer Center 和 Harvard Medical School 的 Andrea McClatchey 博士和 Andrew Gladden 博士惠赠)。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 22

使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(泳道 2)或 MST1 (D8B9Q) Rabbit mAb(泳道 3)对 Ramos 细胞提取物 MST1 进行免疫沉淀法分析。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 MST1 (D8B9Q) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 23

使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对 RL-7 细胞(蓝色)和 A-204 细胞(绿色)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 24

使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb(绿色)对低汇合度 MCF 10A 细胞(左图)、高汇合度 MCF 10A 细胞(中间)和 YAP 呈阴性的 RL-7 细胞(右图)进行共聚焦免疫荧光分析。下图中的蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。在低汇合度(增殖)细胞中观察到越来越多的 YAP 蛋白位于胞核。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 25

在 Leica® BOND™ Rx 上使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人非霍奇金淋巴瘤进行免疫组织化学分析。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 26

在 Leica® BOND™ Rx 上使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人子宫内膜样腺癌进行免疫组织化学分析。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 27

使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 28

使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 29

使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的野生型 293T 细胞沉淀物(左图,阳性)或敲除 YAP/TAZ 的 293T 细胞沉淀物(右图,阴性)进行免疫组织化学分析。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 30

使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb(顶部图)or TAZ (E9J5A) XP® Rabbit mAb #72804(底部图)对石蜡包埋的未转染(左图,YAP/TAZ 低)或 YAP 转染(中图)或 TAZ 转染(右图)的 BEN 细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 31

使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb(顶部图)或 TAZ (E9J5A) XP® Rabbit mAb #72804(底部图)对石蜡包埋的人非小细胞肺癌(左图)、结肠癌病例 1(中图)或结肠癌病例 2(右图)进行免疫组织化学分析。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 32

使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人卵巢浆液性癌进行免疫组织化学分析。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 33

使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 PANC-1(左图)和 RL-7(右图)细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 34

使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人良性前列腺增生细胞进行免疫组织化学分析。

Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 35

使用 Rabbit (DA1E) mAb XP® Isotype Control #3900(泳道 2)或 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb(泳道 3)对 A-204 细胞提取物 YAP 蛋白进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb #3678 用作二抗。

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1 个试剂盒(7 x 20 µl)

产品说明

Hippo Pathway Proteins Antibody Sampler Kit 提供了一种便捷方法检测已被鉴定为 Hippo 信号转导通路上游调控因子的蛋白。该试剂盒包含的抗体足以针对每种一抗进行 两 次蛋白质印迹实验。

特异性/敏感性

Hippo Pathway Proteins Antibody Sampler Kit 中的每种抗体均可检测其靶标蛋白的内源水平。

来源/纯化

使用与小鼠 TAZ 中 Ala200、人 FRMD6 中 Phe608、人 PTPN14 中 Leu737、人 merlin 中 Gln470、人 Ajuba 中 Arg77、人 MST1 中 Pro9 周围的残基相对应的合成肽,以及与人 YAP 蛋白的羧基末端相对应的重组蛋白,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。在 YAP 的所有已知同工型中,YAP 表位周围的该序列区域具有 100% 的保守性。

背景

Hippo 信号转导通路是一种进化保守的信号级联放大反应,可调节细胞、组织和器官生长以应答多种多样的环境因素(包括细胞密度、机械应力、生长因子及细胞因子)和代谢信号 (1,2)。在哺乳动物类,该通路的核心组分为 YAP 和 TAZ 转录共激活因子,可调节控制细胞增殖和存活的靶标基因的表达 (3)。YAP/TAZ 靶标基因的转录控制通过一个涉及哺乳动物 sterile-20-like 激酶 (MST1/2)、LATS1/2 激酶和关键接头蛋白的复杂的激酶级联反应进行调节。LATS 激酶 对 YAP 和 TAZ 的磷酸化导致 YAP 和 TAZ 在细胞质滞留,从而抑制其靶标基因的转录激活。多种蛋白被发现在 MST1/2 和 LATS1/2 的上游发挥作用,影响 LATS 介导的 AP/TAZ 磷酸化。这些蛋白包括抑癌基因蛋白 Merlin (4)、含 FERM 结构域蛋白 6 (FRMD6/Willin) (5)、含 LIM 结构域接头蛋白 Ajuba (6,7) 和蛋白酪氨酸磷酸酶 PTPN14 (8)。

  1. Meng, Z. et al. (2016) Genes Dev 30, 1-17.
  2. Watt, K.I. et al. (2017) Front Physiol 8, 942.
  3. Fu, V. et al. (2017) Curr Opin Cell Biol 49, 99-107.
  4. Su, T. et al. (2017) Dev Cell 40, 478-490.
  5. Angus, L. et al. (2012) Oncogene 31, 238-50.
  6. Das Thakur, M. et al. (2010) Curr Biol 20, 657-62.
  7. Reddy, B.V. and Irvine, K.D. (2013) Dev Cell 24, 459-71.
  8. Liu, X. et al. (2013) Oncogene 32, 1266-73.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

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