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56612
Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit
一抗
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Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit #56612

引用 (1)
Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 1
使用 Merlin (D3S3W) Rabbit mAb（上）、Ezrin/Radixin/Moesin Antibody #3142（中间）和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下），对 PC-3 细胞以及野生型和 Nf2 (-/-) 小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 提取物进行蛋白质印迹分析。（MEF wt 和 MEF Nf2 (-/-) 细胞由 MGH Cancer Center 和 Harvard Medical School 的 Andrea McClatchey 博士和 Andrew Gladden 博士惠赠）。
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使用 PTPN14 (D5T6Y) Rabbit mAb（上图）和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图），对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
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使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb（上图）或 β-actin (13E5) Rabbit mAb #4970（下图）对对照的 HeLa 细胞（泳道 1）或 YAP 敲除型 HeLa 细胞（泳道 2）的提取物进行蛋白印迹分析。YAP 敲除型 HeLa 细胞中没有信号，这证实了抗体对 YAP 的特异性。
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使用 FRMD6 (D8X3R) Rabbit mAb（上）和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下）对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
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使用 MST1 (D8B9Q) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
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使用 Ajuba (D4D8P) Rabbit mAb，对来自不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
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使用 TAZ (D3I6D) Rabbit mAb（上图）和 GAPDH (D16H11) XP® #5174（下图）对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。正如预期一样，Raji 细胞中 TAZ 呈阴性。
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一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
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使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（泳道 2）或 Merlin (D3S3W) Rabbit mAb（泳道 3），对小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 提取物 merlin 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 Merlin (D3S3W) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
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使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb（上图）和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。正如预计的一样，RL 细胞的 YAP 蛋白表达呈阴性。
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使用 MST1 (D8B9Q) Rabbit mAb 对血清饥饿整晚之后经赋形剂 (-) 或 Staurosporine #9953（1 μM，4 小时；+）处理的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。Staurosporine 可诱导全长 MST1 由半胱天冬酶介导的裂解，从而产生一个该抗体可检测的 37 kDa 氨基末端片段和一个不可检测到的 18 kDa 羧基末端片段。
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对来自 PANC-1 细胞提取物的Ajuba 蛋白进行免疫沉淀。泳道 1 是 10 % input，泳道 2 是 Rabbit (DA1E) mAb XP® Isotype Control #3900，而泳道 3 是 Ajuba (D4D8P) Rabbit mAb。使用 Ajuba (D4D8P) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
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使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对 NCI-H2052 细胞的交联染色质和 TAZ (D3I6D) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。结果图显示在 SMYD3 内结合，SMYD3 是一种已知的 TAZ 靶标基因（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。如需了解其他 ChIP-seq 情况，请下载产品说明书。
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使用 Merlin (D3S3W) Rabbit mAb（绿色）对 PC-3 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
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使用 Rabbit (DA1E) mAb XP® Isotype Control #3900（泳道 2）或 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb（泳道 3）对 A-204 细胞提取物 YAP 蛋白进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb #3678 用作二抗。
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使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（泳道 2）或 MST1 (D8B9Q) Rabbit mAb（泳道 3）对 Ramos 细胞提取物 MST1 进行免疫沉淀法分析。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 MST1 (D8B9Q) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
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使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对 NCI-H2052 细胞的交联染色质和 TAZ (D3I6D) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。结果图显示在染色体 1（上图）内的结合，包括 TAZ 的已知靶基因 SMYD3（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
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在 Leica® BOND™ Rx 上使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人非霍奇金淋巴瘤细胞进行免疫组织化学分析。
Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 19
使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对 NCI-H2052 细胞的交联染色质与 TAZ (D3I6D) Rabbit mA 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human CTGF Promoter Primers #14927、Human SMYD3 intron 2 primers 与 SimpleChIP® Human CTGF Upstream Primers #14928，通过实时 PCR对富集的 DNA 进行定量分析。每份样品的免疫沉淀 DNA 含量，用染色质投入总量（相当于 1）相对应的信号进行表示。
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在 Leica® BOND™ Rx 上使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人子宫内膜样腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 21
使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 22
使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 23
使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的野生型 293T 细胞沉淀物（左图，阳性）或敲除 YAP/TAZ 的 293T 细胞沉淀物（右图，阴性）进行免疫组织化学分析。
Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 24
使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb（顶部图）or TAZ (E9J5A) XP® Rabbit mAb #72804（底部图）对石蜡包埋的未转染（左图，YAP/TAZ 低）或 YAP 转染（中图）或 TAZ 转染（右图）的 BEN 细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。
Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 25
使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb（顶部图）或 TAZ (E9J5A) XP® Rabbit mAb #72804（底部图）对石蜡包埋的人非小细胞肺癌（左图）、结肠癌病例 1（中图）或结肠癌病例 2（右图）进行免疫组织化学分析。
Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 26
使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb（左图）或 YAP Antibody（右图）对石蜡包埋的小鼠小肠进行免疫组织化学分析。这两种抗体可检测 YAP 蛋白上独特的非重叠表位。使用两种抗体获得的相似染色模式有助于确认染色特异性。
Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 27
使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人卵巢浆液性癌进行免疫组织化学分析。
Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 28
使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 PANC-1（左图）和 RL（右图）细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。
Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 29
使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人良性前列腺增生细胞进行免疫组织化学分析。
Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 30
使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb（绿色）对低汇合度 MCF 10A 细胞（左图）、高汇合度 MCF 10A 细胞（中图）和 YAP 呈阴性的 RL 细胞（右图）进行共聚焦免疫荧光分析。下图中的蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。在低汇合度（增殖）细胞中观察到越来越多的 YAP 蛋白位于胞核。
Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 31
使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对 RL 细胞（蓝色）和 A-204 细胞（绿色）进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 32
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对 NCI-H2052 细胞中提取的交联染色质和 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。结果图显示在 CTGF 内结合，CTGF 是一种已知的 YAP 靶标基因（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 33
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对 NCI-H2052 细胞中提取的交联染色质和 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。结果图显示在染色体 6（上图）内的结合，包括 YAP 的已知靶标基因 CTGF（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 34
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对 NCI-2052 细胞中提取的交联染色质与 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human CTGF Promoter Primers #14927、Human SMYD3 intron 2 primers 与 SimpleChIP® Human CTGF Upstream Primers #14928，通过实时 PCR对富集的 DNA 进行定量分析。每份样品的免疫沉淀 DNA 含量，用染色质投入总量（相当于 1）相对应的信号进行表示。
Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 35
使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对 NCI-H2052 细胞和 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 测定。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制备 DNA 库。结果图显示在 YAP 的已知靶基因 TSPAN2 内结合（参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他图）。
Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 36
使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对 NCI-H2052 细胞和 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 测定。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体 1 （上图）内的结合，包括 YAP 的已知靶基因 TSPAN2（下图）（参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图）。
Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 37
使用 CUT&RUN Assay Kit #86652，通过 NCI-H2052 细胞和 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #66362 进行 CUT&RUN。使用人 C1D 下游引物、人 TSPAN2 上游引物和人 ITM2A 下游引物进行实时 PCR 来对富集的 DNA 进行定量。每份样品的免疫沉淀 DNA 含量，用染色质投入总量（相当于 1）相对应的信号进行表示。
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56612T		 1 个试剂盒（7 x 20 微升）

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产品说明

Hippo Pathway Proteins Antibody Sampler Kit 提供了一种便捷方法检测已被鉴定为 Hippo 信号转导通路上游调控因子的蛋白。该试剂盒包含的抗体足以针对每种一抗进行 两 次蛋白质印迹实验。

特异性/敏感性

Hippo Pathway Proteins Antibody Sampler Kit 中的每种抗体均可检测其靶标蛋白的内源水平。

来源/纯化

使用与小鼠 TAZ 中 Ala200、人 FRMD6 中 Phe608、人 PTPN14 中 Leu737、人 merlin 中 Gln470、人 Ajuba 中 Arg77、人 MST1 中 Pro9 周围的残基相对应的合成肽，以及与人 YAP 蛋白的羧基末端相对应的重组蛋白，对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。在 YAP 的所有已知同工型中，YAP 表位周围的该序列区域具有 100% 的保守性。

背景

Hippo 信号转导通路是一种进化保守的信号级联放大反应，可调节细胞、组织和器官生长以应答多种多样的环境因素（包括细胞密度、机械应力、生长因子及细胞因子）和代谢信号 (1,2)。在哺乳动物类，该通路的核心组分为 YAP 和 TAZ 转录共激活因子，可调节控制细胞增殖和存活的靶标基因的表达 (3)。YAP/TAZ 靶标基因的转录控制通过一个涉及哺乳动物 sterile-20-like 激酶 (MST1/2)、LATS1/2 激酶和关键接头蛋白的复杂的激酶级联反应进行调节。LATS 激酶 对 YAP 和 TAZ 的磷酸化导致 YAP 和 TAZ 在细胞质滞留，从而抑制其靶标基因的转录激活。多种蛋白被发现在 MST1/2 和 LATS1/2 的上游发挥作用，影响 LATS 介导的 AP/TAZ 磷酸化。这些蛋白包括抑癌基因蛋白 Merlin (4)、含 FERM 结构域蛋白 6 (FRMD6/Willin) (5)、含 LIM 结构域接头蛋白 Ajuba (6,7) 和蛋白酪氨酸磷酸酶 PTPN14 (8)。
  1. Meng, Z. et al. (2016) Genes Dev 30, 1-17.
  2. Watt, K.I. et al. (2017) Front Physiol 8, 942.
  3. Fu, V. et al. (2017) Curr Opin Cell Biol 49, 99-107.
  4. Su, T. et al. (2017) Dev Cell 40, 478-490.
  5. Angus, L. et al. (2012) Oncogene 31, 238-50.
  6. Das Thakur, M. et al. (2010) Curr Biol 20, 657-62.
  7. Reddy, B.V. and Irvine, K.D. (2013) Dev Cell 24, 459-71.
  8. Liu, X. et al. (2013) Oncogene 32, 1266-73.

通路和蛋白

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