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53898
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit
一抗
抗体小包装组合
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ER Homeostasis Antibody Sampler Kit #53898

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ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 1
使用 ATF-4 (D4B8) Rabbit mAb（上）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下）对未经 (-) 或经 tunicamycin 处理（2 μg/ml，8 小时；+）的 293 和 Hela 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 2
使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对经过 Thapsigargin #12758 (300nM) 处理 4 小时的 Hep G2 细胞和 ATF-4 (D4B8) Rabbit mAb 进行使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制备 DNA 库。该图显示了 ATF-4 的已知靶标基因 ASNS 内的结合（参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图）。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 3
使用 BiP (C50B12) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 4
使用 PERK (C33E10) Rabbit mAb 对不同细胞类型的提取物进行蛋白质印迹分析。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 5
使用 IRE1α (14C10) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹法分析。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 6
使用 Phospho-eIF2α (Ser51) (D9G8) XP® Rabbit mAb （上）或 eIF2α Antibody #9722（下）对未经处理的或经 Thapsigargin 处理的 C2C12 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 7
使用 XBP-1s (E9V3E) 兔单克隆抗体（上图）和 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457（下图）对未经 (-) 或已经 Tunicamycin #12819（2 μg/ml，8 小时；+）处理的 293T 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 8
使用 ATF-6 (D4Z8V) Rabbit mAb 对未经 (-) 或经衣霉素处理（1 mM；1 小时；+）的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 9
一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 10
使用 CCPG1 (E3C5G) Rabbit mAb（上图）或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图）对不同细胞系的提取物进行蛋白印迹分析。根据 RNAseq 预测 Jurkat 细胞中信号的缺失并确认抗体的特异性。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 11
使用 CCPG1 (E3C5G) Rabbit mAb（上图）或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图）对未经处理 (-) 或经 Tunicamycin #12819（5 μg/mL，24 小时；+）处理的 SNU-475 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 12
使用 CCPG1 (E3C5G) Rabbit mAb（上图）、Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb #2278（中图）或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图）对转染空载 (-) 或转染带有 Myc/DDK 标记的全长人 CCPG1 蛋白 (hCCPG1-Myc/DDK; +) 表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 13
对 Colo 205 细胞提取物 CCPG1 蛋白进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 CCPG1 (E3C5G) Rabbit mAb。使用 CCPG1 (E3C5G) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 14
使用 FAM134B (E8Y9R) Rabbit mAb（上图）或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图）对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。Hep G2 细胞中 FAM134B 的信号缺失与 RNAseq 数据一致，并证实了抗体对 FAM134B 的特异性。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 15
使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（泳道 2）或 ATF-4 (D4B8) Rabbit mAb（泳道 3）对 tunicamycin 处理（2 μg/ml，8 小时）的 293 细胞提取物进行免疫沉淀法分析。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 ATF-4 (D4B8) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Mouse Anti-rabbit IgG (Light-Chain Specific) (L57A3) mAb #3677 和 Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody #7076 可用作二抗。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 16
使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对经过 Thapsigargin #12758 (300nM) 处理 4 小时的 Hep G2 细胞和 ATF-4 (D4B8) Rabbit mAb 进行使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制备 DNA 库。该图显示了在染色体 7（上图）内的结合，包括 ATF-4 的已知靶标基因 ASNS（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 17
使用 BiP (C50B12) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人恶性胶质瘤进行免疫组织化学分析。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 18
使用 Phopsho-eIF2α (Ser51) (D9G8) XP® Rabbit mAb 对未经处理的（左）或经 λ 磷酸酶处理（右）的石蜡包埋人结肠癌组织进行免疫组织化学分析。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 19
使用 XBP-1s (E9V3E) 兔单克隆抗体（上图）和 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457（下图）对未经 (-) 或已经 Tunicamycin #12819（2 μg/ml，8 小时；+）处理的 C2C12 细胞以及未经 (-) 或已经 Tunicamycin #12819（5 μg/ml，24 小时；+）处理 的 INS-1 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 20
对 293T 细胞提取物 ATF-6 进行免疫沉淀法分析。泳道 1 为 10% 输入，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 ATF-6 (D4Z8V) Rabbit mAb。使用 ATF-6 (D4Z8V) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 21
使用 FAM134B (E8Y9R) Rabbit mAb（上图）或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图），对转染空载 (-) 或转染表达带 Myc/DDK 标签的全长人 FAM134B 蛋白 (hFAM134B-Myc/DDK; +) 表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 22
使用 ATF-4 (D4B8) Rabbit mAb（绿色）对未经（左）或 tunicamycin 处理（2 μg/ml，8小时；右）的 Hela 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin（红色）标记肌动蛋白纤丝。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 23
使用经 Thapsigargin #12758 (300nM) 处理 1 小时 的 Hep G2 细胞和 ATF-4 (D4B8) Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #66362，通过 CUT&RUN Assay Kit #86652 进行 CUT&RUN 分析。使用 human TRB3 exon 1 primer、human ASNS exon 1 primer 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 24
使用 BiP (C50B12) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 25
使用 Phospho-eIF2α (Ser51) (D9G8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌组织进行免疫组织化学分析。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 26
使用 XBP-1s (E9V3E) 兔单克隆抗体（绿色）对未经（左图）或已经 Tunicamycin #12819（2 µg/ml，8 小时；右图）处理的 C2C12 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight™ 554 Phalloidin #13054（红色）标记。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 27
对 SCLC-21H 细胞提取物 FAM134B 蛋白进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 FAM134B (E8Y9R) Rabbit mAb。使用 FAM134B (E8Y9R) Rabbit mAb 进行蛋白印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 28
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对经 衣霉素（2ug/ml，过夜）处理的小鼠胚胎纤维母细胞中提取的交联细胞质和 ATF-4 (D4B8) Rabbit mAb进行染色质免疫沉淀法分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在 Ddit3/CHOP 内结合，Ddit3/CHOP 是一种已知的 ATF4 靶标基因（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他图）。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 29
使用 BiP (C50B12) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肝癌进行免疫组织化学分析。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 30
使用 Phospho-eIF2α (Ser51) (D9G8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人淋巴瘤组织进行免疫组织化学分析。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 31
使用 XBP-1s (E9V3E) Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对未经处理（蓝色，下图）或经 Tunicamycin （2 μg/ml，8 小时；绿色，阳性）处理的 C2C12 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 32
使用 FAM134B (E8Y9R) Rabbit mAb（绿色）和 β-Actin (8H10D10) Mouse mAb #3700（红色）对 TT 细胞（左图，阳性）和 HeLa 细胞（右图，阴性）进行共聚焦免疫荧光分析。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961（蓝色）封片。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 33
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对经 衣霉素（2ug/ml，过夜）处理的小鼠胚胎纤维母细胞中提取的交联细胞质和 ATF-4 (D4B8) Rabbit mAb进行染色质免疫沉淀法分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体10（上图）内的结合，包括 ATF4 的已知靶标基因 Ddit3/CHOP（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 34
在对照物肽（左）或 BiP Blocking Peptide #1084（右）存在的情况下，使用 BiP (C50B12) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 35
使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对用 10% 马血清分化 7 天，随后经 Tunicamycin（2 μg/ml，7 小时）处理的 C2C12 细胞的交联染色质与 XBP-1s (E9V3E) Rabbit mAb #2392 或 Normal Rabbit IgG #2729 一起进行染色质免疫沉淀分析。使用 SimpleChIP® Human DNAJB9 Exon 1 Primers #79879、mouse EIF2AK3 promoter primers 和 SimpleChIP® Mouse GAPDH Intron 2 Primers #8986，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 36
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003对经 衣霉素（2ug/ml，过夜）的小鼠胚胎纤维母细胞中提取的交联染色质，在加入 ATF-4 (D4B8) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后，进行染色质免疫沉淀法分析。使用 SimpleChIP® Mouse ATF-3 Intron 1 Primers #13059、Mouse CHOP Promoter Primers 和 SimpleChIP® Mouse RPL30 Intron 2 Primers #7015，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
ER Homeostasis Antibody Sampler Kit: Image 37
使用与浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（红色）作为 BiP (C50B12) Rabbit mAb（蓝色）的对照，对 A204 细胞进行流式细胞术分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
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53898T		 1 个试剂盒（9 x 20 微升）

定制制剂

产品包括 数量 应用 反应性 MW (kDa) 同型
FAM134B (E8Y9R) Rabbit mAb 83414 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
 H M R 70 兔 IgG
CCPG1 (E3C5G) Rabbit mAb 80158 20 µl
  • WB
  • IP
 H 105-120 兔 IgG
XBP-1s (E9V3E) Rabbit mAb 40435 20 µl
  • WB
  • IF
  • F
  • ChIP
 H M R 60 (human), 55 (mouse/rat) 兔 IgG
ATF-6 (D4Z8V) Rabbit mAb 65880 20 µl
  • WB
  • IP
 H M 90-100 兔 IgG
Phospho-eIF2α (Ser51) (D9G8) XP® Rabbit mAb 3398 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
 H M R Mk Dm 38 兔 IgG
PERK (C33E10) Rabbit mAb 3192 20 µl
  • WB
 H M R Mk 140 兔 IgG
ATF-4 (D4B8) Rabbit mAb 11815 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
  • ChIP
  • C&R
 H M R 49 兔 IgG
IRE1α (14C10) Rabbit mAb 3294 20 µl
  • WB
  • IP
 H M R 130 兔 IgG
BiP (C50B12) Rabbit mAb 3177 20 µl
  • WB
  • IHC
  • F
 H M 78 兔 IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl
  • WB
 Rab 山羊 

产品说明

ER Homeostasis Antibody Sampler Kit 提供一种高性价比产品，检测通过调节 ER 应激和 ER-吞噬参与 ER 稳态的蛋白。该试剂盒包含的抗体足以使用每种一抗进行两次蛋白印迹实验。

特异性/灵敏度

ER Homeostasis Antibody Sampler Kit 中的每种抗体均可检测各自靶蛋白的内源性水平。XBP-1s (E9V3E) Rabbit mAb 可检测 78 kDa 和 99 kDa 的未知条带。

来源/纯化

使用与人 FAM134B 蛋白中 Pro327、小鼠 XBP-1s 蛋白中 Ala361、人 PERK 蛋白中 Ala246、人 IRE1α 蛋白中 His963、人 BiP 蛋白中 Gly584 周围的残基以及人 ATF-6 和 ATF-4 蛋白中羧基末端周围的残基相对应的合成肽以及与人 eIF2α 蛋白中 Ser51 周围的残基相对应的合成磷酸肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

内质网 (ER) 是一个大细胞器，从核包膜延伸到质膜上，结构和功能多样化 (1,2)。它在钙储存、脂质和类固醇合成以及蛋白折叠、加工和运输中起作用。ER 的结构和功能以动态方式进行调节，以适应 ER 应激和细胞器损伤情况 (1,2)。当对蛋白加工的需求超过其自身能力时，细胞会触发一种称为未折叠蛋白反应 (UPR) 的适应性机制，这种机制在很大程度上受三个通路的活性调控：PERK、IRE1α 和 ATF-6 (1)。ER 伴侣蛋白 BiP 被募集到 ER 管腔中的未折叠蛋白上，其与 PENK、IRE1α 和 ATF-6 解离后被激活。PERK 是 ER 膜上的激酶，可使 ER 应激与翻译变化串联起来。ER 应激过程中的 PERK 激活导致 eIF2α 磷酸化，从而抑制大多数翻译，但选择性诱导一些靶标，例如在应激反应恢复中调节靶标的转录因子 ATF-4。IRE1α 是一种具有内切核糖核酸酶活性的 ER 蛋白，在 ER 应激期间被激活，并将 XBP-1 从未剪接的 XBP-1μ 同工型转化为剪接的 XBP-1s 同工型，后者作为转录因子调节应激反应基因。最后，在 ER 应激期间，ATF-6 被切割，从而释放调控应激反应基因的成熟转录因子。
在 UPR 触发 ER 扩增后，细胞可能会触发 ER 吞噬过程，即 ER 片段通过自噬降解 (3)。自噬是通过双膜自噬体与溶酶体融合，使细胞浆组分大量降解的过程。选择性自噬，如 ER 吞噬，会使特定靶标降解。这个过程通常涉及含有 LIR 或 GIM 结构域的特定转运蛋白受体，转运蛋白受体分别通过与 LC3 或 GABARAP 的相互作用而靶向与自噬体结合的转运蛋白。FAM134B 是发现的第一个 ER 吞噬受体。当受到营养缺乏或内质网应激刺激时，FAM134B 的缺失可使细胞对凋亡敏感。CCPG1 是另一种 ER 吞噬转运蛋白受体，它与作为 ULK1 复合物的组分 FIP200 结合，可促进 ER 转运至自噬体。重要的是，CCPG1 受 ER 应激的转录调控。总之，来自 UPR 和 ER 吞噬的信号有助于调节 ER 稳态。这个过程中的缺陷可能会导致病理状况，包括代谢和神经系统疾病、癌症以及对传染病的防御 (3)。
  1. Sano, R. and Reed, J.C. (2013) Biochim Biophys Acta 1833, 3460-3470.
  2. Ferro-Novick, S. et al. (2021) Trends Biochem Sci 46, 630-639.
  3. Hübner, C.A. and Dikic, I. (2020) Cell Death Differ 27, 833-842.

通路与蛋白质

探索与本产品相关的通路 + 蛋白质。

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