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55051
CD63 (D4I1X) Rabbit mAb (IHC Specific)
一抗
单克隆抗体

CD63 (D4I1X) Rabbit mAb (IHC Specific) #55051

引用 (6)
筛选器:
  1. IHC
Immunohistochemistry Image 1: CD63 (D4I1X) Rabbit mAb (IHC Specific)
使用 CD63 (D4I1X) Rabbit mAb (IHC Specific) 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 2: CD63 (D4I1X) Rabbit mAb (IHC Specific)
肺:

使用 CD63 (D4I1X) Rabbit mAb (IHC Specific) 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。

Immunohistochemistry Image 3: CD63 (D4I1X) Rabbit mAb (IHC Specific)
淋巴液:

使用 CD63 (D4I1X) Rabbit mAb (IHC Specific) 对石蜡包埋的人非霍奇金淋巴瘤进行免疫组织化学分析。

Immunohistochemistry Image 4: CD63 (D4I1X) Rabbit mAb (IHC Specific)
使用 CD63 (D4I1X) Rabbit mAb (IHC Specific) 对石蜡包埋的人黑色素瘤进行免疫组织化学分析。
To Purchase # 55051S
产品货号 规格 价格 库存
55051S
100 µl

支持数据

反应性 H
敏感性 内源性
MW (kDa)
来源/亚型 兔 IgG

应用缩写:

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Vir- Virus
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品使用信息

应用 稀释度
免疫组织化学(石蜡) 1:400

保存

保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。

实验步骤

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免疫组织化学(石蜡)

A. 溶液和试剂

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 二甲苯。
  2. 无水变性乙醇,组织级(100% 和 95%)。
  3. 去离子水 (dH2O)。
  4. 苏木精(可选)。
  5. 洗涤缓冲液
    1. 含 Tween® 20 (TBST) 的 1X Tris 盐缓冲液:要制备 1L 1X TBST,添加 100 ml 含 Tween® 20 的 10 X Tris 盐缓冲液 (#9997) 至 900 ml dH20 中并混合。
  6. SignalStain® Antibody Diluent (#8112).
  7. 1X 柠檬酸盐修复液:要制备 250 mL 的 1X 柠檬酸盐修复液,将 25 ml 的 SignalStain® Citrate Unmasking Solution (10X) (#14746) 稀释到 225 mL 的 dH2O 中。
  8. 3% 过氧化氢:要制备 100 ml,添加 10 ml 30% H2O2 至 90 ml dH2O 中。
  9. 封闭液:TBST/5% Normal Goat Serum 或 1X Animal-Free Blocking Solution。
    1. TBST/5% Normal Goat Serum:要制备 5 ml 1X TBST,添加 250 µl Normal Goat Serum (#5425)。
    2. 1X Animal-Free Blocking Solution:要制备 4 mL of dH2O,添加 1 ml 的 Animal-Free Blocking Solution (5X) (#15019)。
  10. 检测系统:SignalStain® Boost IHC Detection Reagents (HRP, Rabbit #8114)。
  11. 底物:SignalStain® DAB Substrate Kit (#8059)。
  12. 苏木精: Hematoxylin (#14166)。
  13. 封片剂: SignalStain® Mounting Medium (#14177)。

B. 脱蜡/复水

注意:在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。

  1. 脱蜡/水化合步骤:
    1. 将切片放入二甲苯的洗液中孵育 3 次,每次 5 分钟。
    2. 将切片放入 100% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 分钟。
    3. 将切片放入 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 分钟。
  2. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。

C. 抗原修复

对于柠檬酸盐:将切片浸入 1 X 柠檬酸盐修复液,再放入微波炉中加热直至沸腾;继续保持亚沸腾温度 10 分钟 (95°-98°C)。在实验台上冷却切片 30 分钟。

D. 染色

  1. 用 dH2O 清洗切片三次,每次 5 分钟。
  2. 切片放入 3 % 过氧化氢水溶液中,孵育 10 分钟。
  3. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。
  4. 用洗涤缓冲液清洗切片持续 5 分钟。
  5. 使用 100–400 µl 封闭液将每张切片在室温下封闭 1 小时。
  6. 去除封闭液,并给每块切片添加 100–400 µl 在 SignalStain® Antibody Diluent (#8112) 中稀释过的一抗。4°C 孵育过夜。
  7. 使 SignalStain® Boost Detection Reagent (HRP, Rabbit #8114) 平衡至室温。
  8. 清除抗体溶液,用洗涤缓冲液清洗切片 3 次,每次 5 分钟。
  9. 根据需要在切片上滴 1–3 滴 SignalStain® Boost Detection Reagent (HRP, Rabbit #8114)。在加湿箱中室温孵育 30 分钟。
  10. 用洗涤缓冲液清洗切片 3 次,每次 5 分钟。
  11. 加入 1 滴 (30 µl) SignalStain® DAB Chromogen Concentrate 至 1 ml 的 SignalStain® DAB Diluent 中,使用前充分混合。
  12. 在每张切片上应用 100–400 µl SignalStain® DAB,并密切观察,通常 1–10 分钟即可得到合适的染色强度。
  13. 将切片浸入 dH2O 中。
  14. 如果需要,使用 hematoxylin (#14166) 复染切片。
  15. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。
  16. 使切片脱水:
    1. 在 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 秒。
    2. 在 100% 乙醇中重复孵育 2 次,每次 10 秒。
    3. 在二甲苯中重复孵育 2 次,每次 10 秒。
  17. 使用盖玻片和封片剂 (#14177) 封片。

检测试剂/底物兼容性
推荐的
检测试剂
SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Rabbit) #8114 SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (AP, Rabbit) #18653
兼容的
色原
SignalStain® DAB Substrate Kit #8059 SignalStain® Vibrant Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit #76713
SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit #96632  

注意:使用本实验步骤中未指定的检测试剂可能需要进一步优化一抗,考虑到检测试剂的不同灵敏度。


发布​于 2010 年 2 月 

修订于 2020 年 6 月

实验步骤编号:283

特异性/敏感性

CD63 (D4I1X) Rabbit mAb (IHC Specific) 可识别 CD63 总蛋白的内源水平。

物种反应性:

来源/纯化

通过采用重组 CD63 蛋白对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

CD63 属于以四个跨膜结构域、一个短胞外结构域 (ECL1) 和一个长胞外结构域 (ECL2) 为特征的四次跨膜蛋白家族 (1-3)。四次跨膜蛋白在特化的四次跨膜蛋白富集微结构域 (TEMs) 中与多种细胞表面蛋白和胞内信号转导分子相互作用,其中它们介导一系列过程,包括黏附、运动性、膜组织和信号转导 (3)。CD63,如同其他四次跨膜蛋白,在外切体中富含 (4)。它还是内皮细胞中存在的 Weibel-Palade 体的组分 (5)。探索研究证实了 CD63 在不同细胞类型中的几种功能,包括在肥大细胞脱颗粒中的作用、内皮细胞中的 VEGF 信号转导、募集白细胞至内皮细胞和黑素生成期间内体分选 (6-9)。
  1. Oren, R. et al. (1990) Mol Cell Biol 10, 4007-15.
  2. Levy, S. et al. (1991) J Biol Chem 266, 14597-602.
  3. Hemler, M.E. (2005) Nat Rev Mol Cell Biol 6, 801-11.
  4. Escola, J.M. et al. (1998) J Biol Chem 273, 20121-7.
  5. Vischer, U.M. and Wagner, D.D. (1993) Blood 82, 1184-91.
  6. Kraft, S. et al. (2013) J Immunol 191, 2871-8.
  7. Tugues, S. et al. (2013) J Biol Chem 288, 19060-71.
  8. Doyle, E.L. et al. (2011) Blood 118, 4265-73.
  9. van Niel, G. et al. (2011) Dev Cell 21, 708-21.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

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